NCOA3是通过ESRRB招募到目标基因座的ERRE的。(a)使用先前描述的野生型(WT)或ERRE突变序列的DNA下拉测定法(Feng et al。2009)或Nanog(van den Berg等人 2008)。 生物素化探针(40–50-50碱基对[BP])与来自Flag-EsRRB和NCOA3转染的COS-1细胞的提取物一起孵育,并在链霉亲蛋白珠上回收,并通过Western Blotting可视化与DNA相关的蛋白质。 (b)ESRRB,KLF4,NANOG和SOX2 ERRES的ESRRB和NCOA3富集水平以及一个基因(Inter。) 通过CHIP和QPCR评估的ESC中的控制区域,并相对于输入表示。 数据是三个生物学重复的平均6 SEM。 (c)ESRRB耗竭后的候选基因座的NCOA3和ESRRB富集水平相对于输入表示。 在每个实验中,富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100%。 数据是至少两个独立实验的平均6 SD。 B和C中的虚线表示对照IgG(Santa Cruz Biotechnology)的背景富集。 (d)蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。 请注意,此时NCOA3和OCT4级别不变。 (E)使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析,该探针还包含相邻的OCT – SOX位点(Van Den Berg等人 2008),并从NCOA3,OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。2009)或Nanog(van den Berg等人2008)。 生物素化探针(40–50-50碱基对[BP])与来自Flag-EsRRB和NCOA3转染的COS-1细胞的提取物一起孵育,并在链霉亲蛋白珠上回收,并通过Western Blotting可视化与DNA相关的蛋白质。 (b)ESRRB,KLF4,NANOG和SOX2 ERRES的ESRRB和NCOA3富集水平以及一个基因(Inter。) 通过CHIP和QPCR评估的ESC中的控制区域,并相对于输入表示。 数据是三个生物学重复的平均6 SEM。 (c)ESRRB耗竭后的候选基因座的NCOA3和ESRRB富集水平相对于输入表示。 在每个实验中,富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100%。 数据是至少两个独立实验的平均6 SD。 B和C中的虚线表示对照IgG(Santa Cruz Biotechnology)的背景富集。 (d)蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。 请注意,此时NCOA3和OCT4级别不变。 (E)使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析,该探针还包含相邻的OCT – SOX位点(Van Den Berg等人 2008),并从NCOA3,OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。2008)。生物素化探针(40–50-50碱基对[BP])与来自Flag-EsRRB和NCOA3转染的COS-1细胞的提取物一起孵育,并在链霉亲蛋白珠上回收,并通过Western Blotting可视化与DNA相关的蛋白质。(b)ESRRB,KLF4,NANOG和SOX2 ERRES的ESRRB和NCOA3富集水平以及一个基因(Inter。)通过CHIP和QPCR评估的ESC中的控制区域,并相对于输入表示。数据是三个生物学重复的平均6 SEM。(c)ESRRB耗竭后的候选基因座的NCOA3和ESRRB富集水平相对于输入表示。在每个实验中,富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100%。 数据是至少两个独立实验的平均6 SD。 B和C中的虚线表示对照IgG(Santa Cruz Biotechnology)的背景富集。 (d)蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。 请注意,此时NCOA3和OCT4级别不变。 (E)使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析,该探针还包含相邻的OCT – SOX位点(Van Den Berg等人 2008),并从NCOA3,OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。富集SHGFP转染的细胞的富集设置为100%。数据是至少两个独立实验的平均6 SD。B和C中的虚线表示对照IgG(Santa Cruz Biotechnology)的背景富集。(d)蛋白质印迹显示特定的ESRRB蛋白耗竭后48小时用ShesRRB转染。请注意,此时NCOA3和OCT4级别不变。(E)使用Nanog野生型或ERRE突变探针的DNA下拉分析,该探针还包含相邻的OCT – SOX位点(Van Den Berg等人2008),并从NCOA3,OCT4和SOX2转染的COS-1提取细胞提取物。
文库。除此之外,源井还提供CRISPR-KO、CRISPRa、CRISPRi 三大定制文库从高通量sgRNA 文
摘要:在体外产生的类似胚泡的结构非常重要,因为它们概括了早期胚胎发生的特定特征或过程,因此与使用天然胚胎相比,避免了道德问题,并提高了可伸缩性和可及性。在这里,我们结合了细胞重编程和机械刺激,以创建与天然胚胎表型相似的3D球形骨料。具体而言,皮肤成纤维细胞被重编程,利用miR-200家族特性在体细胞中诱导高可塑性状态。随后,使用临时诱导方案将miR- 200个编程的细胞驱动朝向滋养外胚层(TR)谱系驱动,或者封装在聚二氟乙烯微生物反应器中,以维持和促进多能性,以促进多脂蛋白,从而产生内部细胞质量(ICM)样球体。然后将所获得的Tr样细胞和ICM样球体共培养在同一微晶状体中,然后转移到微孔中,以鼓励囊性形成。值得注意的是,上述方案应用于从年轻和老年供体获得的成纤维细胞上,其结果突出了miR-200'的能力成功地重编程了具有可比性类囊体率的年轻和老年细胞,无论供体的细胞年龄如何。总的来说,此处描述的方法代表了一种新的策略,用于创建人工类囊体,用于在辅助繁殖技术领域中用于研究植入后和早期植入后机制。
摘要:为了设计出在进一步优化阶段有较高成功率的先导化合物,应解决药物-靶标相互作用、细胞内化和靶标参与问题。因此,我们设计了叶酸与抗癌肽的结合物,它能够结合人胸苷酸合酶 (hTS) 并通过几种癌细胞高表达的叶酸受体 α (FR α ) 进入癌细胞。机制分析和分子建模模拟表明,这些结合物与 hTS 单体-单体界面的结合力比酶活性位点大 20 倍以上。在几种癌细胞模型上测试时,这些结合物在纳摩尔浓度下表现出 FR α 选择性。当结合物与抗癌剂以协同或附加组合方式递送时,观察到类似的选择性。与 5-氟尿嘧啶和其他靶向 hTS 催化口袋的抗癌药物不同,这些结合物不会诱导该蛋白质的过度表达,因此可以帮助对抗与高 hTS 水平相关的耐药性。■ 简介
为Ҷ进一步ՈॆCas13a ⭘于RNA ࠶ᆀ䇺ᯝ的⚥ᓖ,ᕐ䬻઼ -aPes -CROOLQs 䈮仈㓴合ሶ䟽㓴㚊合䞦ᢙ໎ᢰᵟ˄recRPELQase pRO\Perse aPpOLILcaWLRQ,RPA˅઼Cas13a 的旁支活性结合,ᔰ发 ࠪҶާᴹᴤ侩⚥ᓖ的'NARNA ࠶ᆀỰ⍻ᐕާüüS+(R/2C.˄SpecLILc +LJK-SeQsLWLYLW\ (Q]\PaWLc RepRrWer 8Q/2C.LQJ˅。俆ݸ࡙⭘RPA 或R7-RPA ሶṧ૱中的Ṩ䞨࠶ᆀ序列进㹼ᚂᢙ໎,❦ਾ㓿7 䖜ᖅ䞦 䖜ᖅࠪབྷ䟿的RNA ࠶ᆀ,ަ中的目标RNA ࠶ᆀ与crRNA-Cas13 ༽合⢙ 结合◰活Cas13 㳻ⲭ的旁支活性,从而切割ઘത⧟ຳ中࣐的ᣕ࠶ ᆀ,ӗ⭏㜭被Ự⍻的㦗ݹؑਧ。
收稿日期:2016 年 11 月 9 日 摘要 接受日期:2017 年 11 月 7 日 本研究对描述电子维护关键组成部分的现有学术文献进行了系统回顾。利用 Scopus、SpringerLink 和 ScienceDirect 等多个学术数据库对当前文献进行了审查,并使用 Google 搜索查找与电子维护相关的学术和同行评审期刊文章。文献将电子维护描述为一种利用互联网、信息和通信技术、无线技术和云计算的先进维护策略。电子维护系统用于根据实时数据提供实时分析,以提供多种解决方案并定义维护任务。收集和分析适当的维护和过程数据对于创建强大的“维护情报”以及最终改善制造成本、安全性、环境影响和设备可靠性至关重要。本文介绍了过去十年中有关电子维护的科学讨论如何显著扩展,从而需要进行最新的审查。最后,确定了电子维护领域的三个研究空白,包括评估电子维护的好处、就全面定义达成一致以及开发合作电子维护的工具和结构。