NORGEN的纯化技术纯化基于自旋色谱柱色谱法。优先从其他细胞成分(例如基因组DNA和RNA)中纯化质粒DNA。该过程涉及首先颗粒的隔夜细菌培养物具有质粒DNA(请参阅第3页的流程图)。然后,使用提供的重悬溶液AZ重悬细菌颗粒,并使用裂解缓冲液N进行细菌。然后添加缓冲液。然后添加缓冲液TN,从而导致溶液中存在的基因组DNA和蛋白质。然后通过离心阐明裂解物,以去除含有质粒DNA的裂解物中的沉淀蛋白和基因组DNA。然后将澄清的裂解物加载到自旋柱上。Norgen的柱以取决于离子浓度的方式结合DNA,因此,只有质粒DNA才能与柱结合,而大多数消化的RNA和蛋白质将在流动中除去或保留在柱床的顶部。然后用提供的洗涤溶液J洗涤结合的DNA,以去除剩余的杂质。最后,无内毒素纯化的质粒DNA用洗脱缓冲液洗脱。纯化的DNA是最高质量的,可用于许多下游应用,包括测序,克隆和转染。
生化遗传学是一门跨学科领域,融合了生物化学和遗传学,从分子水平上揭示生物过程的复杂性。该领域研究基因如何影响生化过程以及生化途径如何受遗传信息调控。这两门科学学科的融合极大地促进了我们对细胞功能、遗传和疾病机制的理解。历史背景生化遗传学的根源可以追溯到 20 世纪初,当时古典遗传学和代谢途径研究的出现。格雷戈尔·孟德尔等科学家的开创性工作为遗传学奠定了基础,而弗雷德里克·高兰·霍普金斯爵士和亚瑟·哈登等研究人员则探索了酶和辅酶在代谢中的作用。1953 年,詹姆斯·沃森和弗朗西斯·克里克发现 DNA 是遗传物质,这是一个转折点,突出了遗传的分子基础。在随后的几十年里,色谱法、电泳法和分子克隆等技术的发展推动了该领域的发展。这些创新使科学家能够详细分析蛋白质和核酸,从而建立遗传信息和生化功能之间更清晰的联系。
摘要在这篇评论中,在制药行业进行的化学和生物学测定,以确定抗生素的效力和生物活性。尽管通常采用的化学方法可以测量替代物质的效力,但估计生物活性的效率低下是其主要限制之一。由于其敏感性和成本效益,常见的微生物学分析可以用作替代方法。几个因素,例如抗生素剂量,琼脂培养基的同质性,接种浓度,琼脂培养基的化学成分,样品或药物分子的大小和溶解度,pH值,相对湿度和暴露时间可能会影响微生物学分析。基于特定需求和实验目标,琼脂扩散测定的设计重点是其成本,错误,准确性和简单性。在本研究中还讨论了为了滥用和过度使用导致药物抗药性的抗生素,诸如Inhi-Bition区域,最低抑制浓度,最低杀菌浓度,突变预防浓度和临界浓度等参数。最后,对微生物和高性能液态色谱法进行了特异性比较,以降低成本的敏感性,准确性和生物学活性的敏感性,准确性和效果。由于它们的优势和缺点,建议同时使用生物测定和化学方法,以精确确定抗生素的效力。
白血病 (ALL) 5 。长春花碱用于治疗乳腺癌、睾丸癌和神经母细胞瘤 6 。长春地辛是一种从长春花碱中提取的生物碱,已显示出对抗霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤、肺癌和乳腺癌的活性 7 。长春瑞滨用于治疗已发展到周围组织或身体其他部位的非小细胞肺癌 (NSCLC) 8 。根据最近的一项研究,长春胺是少数对活细胞有积极作用的生物碱之一。通过增加血流量和区域葡萄糖的吸收,它可以作为脑代谢增强剂,对缺血和缺氧具有神经保护作用,并具有抗氧化和抗凋亡特性。长春胺被认为是治疗镰状细胞病的潜在成分,因为它似乎可以作为活细胞中的氧载体 9 。长春胺是一种单萜吲哚生物碱(图1),主要存在于长春花叶中10。在本研究中,根据国际协调会ICH Q2(R1)指南11的建议,建立了高效薄层色谱法(HPTLC)对长春花叶甲醇提取物中的长春胺进行定量分析。
摘要:在这项研究中,它旨在通过经过验证的静态静态顶空气体色谱法(GC-MS)方法研究番茄酱,胡椒粉,番茄酱,蛋黄酱,蛋黄酱和烧烤酱样品中的苯甲酸(BA)和丝氨酸(SOA)浓度。水杨酸(SALA)用作内标,测量值分别在BA和SOA的宽线性浓度范围内进行,分别为2.5-5000和12.5-5000。确定检测限为1.5和4.5 mg/kg,而BA和SOA的定量极限(LOQ)分别为2.5 mg/kg。在开放的番茄酱样品中发现BA和SOA的平均回收%值分别为98.5%和98.7%,而在蛋黄酱样本中,这些值分别为98.7%和100.3%。确认了所提出的方法的准确性。在实际样品中,发现合适的番茄酱和工业酱样品的结果,但在某些番茄和胡椒粉产品中以传统或自制的名称出售,尽管禁止在糊剂中使用保留剂。对于公共卫生来说,防止在土耳其美食以及在世界上普遍消费的糊状物中掺假,这是必不可少的。因此,由于其可靠性和消耗较小的毒性化学试剂,因此提出的方法可用于食品控制实验室。
ot弹簧富含多种微生物,包括能够生产工业重要酶的嗜热细菌。这项研究旨在从位于沙特阿拉伯南部地区的三个温泉中隔离,纯化和鉴定嗜热细菌,即Al-Ma'a al-Har,Al-Redhah和Al-Ahsarai温泉。筛选了分离的细菌分离株以产生淀粉酶,并选择了最有效的分离株Cytobacillus cytobacillus oq834432分离株OHA8,用于大规模生产淀粉酶。然后使用盐沉淀,Sephacryl S-200色谱法和Deae-Sepharose柱色谱纯化酶。总共确定了21种细菌,cytobacillus Firmus表现出最高的淀粉酶活性。发现淀粉酶活性的最佳条件在50°C和pH 5.0处,在镁离子存在下活性增强了153%。EDTA抑制了酶的活性,发现分别以100%和110.3%的淀粉和淀粉蛋白具有活性。总而言之,这项研究证明了温泉的嗜热细菌产生重要的酶的潜力,并提供了有关酶产生和活性的最佳条件的见解。这些发现对利用各个工业领域中嗜热细菌的生物技术应用的发展具有重要意义。
注1。细胞因子:一种主要由其他细胞分泌的蛋白质,并通过与细胞表面的受体结合来维持和生长细胞。如果缺乏,细胞将无法生存。注2。造血干细胞:这些是哺乳动物成人骨髓中发现的少数细胞,通过分裂细胞,它们为生命提供了血液。注3。线粒体:细胞内的细胞器之一。使用两种代谢途径,即柠檬酸循环和电子传输系统,将使用氧气吸入细胞的养分被分解为水和二氧化碳以产生ATP。注4。sdhaf1:一种在电子传输系统中称为复合物II的蛋白质,以及辅助琥珀酸脱氢酶(SDH)复合物的因子的缩写。注5。ATP:三磷酸腺苷。细胞所需的最大能量是由ATP分解时产生的能量提供的。注6。 pGAM1基因诱导的缺失小鼠:一种在磷酸甘油酸突变酶基因(糖酵解酶之一)给予他莫昔芬(一种化学合成的雌激素)时被诱导删除的小鼠。可以在时间和组织中专门删除基因。注7。 糖酵解系统:将葡萄糖掺入细胞中并分解为丙酮酸和乳酸无氧的过程,从而获得能量。注8。 离子色谱/质谱技术:通过组合电离色谱法量化每个分子的丰度的技术,可以高精度分离电离化合物和质谱法,质谱法,从而可以精确测量质量和电荷的比例,从而量化每种分类分子的质量和电荷。注9。 五肽磷酸盐循环:一种代谢途径,该途径合成了来自葡萄糖的Pentose,一种DNA和RNA的材料。在此过程中,细胞提供去除活性氧所需的还原能力。注意10。 活性氧:在包含氧的分子中,它们是特别反应性的,很薄,例如DNAATP:三磷酸腺苷。细胞所需的最大能量是由ATP分解时产生的能量提供的。注6。pGAM1基因诱导的缺失小鼠:一种在磷酸甘油酸突变酶基因(糖酵解酶之一)给予他莫昔芬(一种化学合成的雌激素)时被诱导删除的小鼠。可以在时间和组织中专门删除基因。注7。糖酵解系统:将葡萄糖掺入细胞中并分解为丙酮酸和乳酸无氧的过程,从而获得能量。注8。离子色谱/质谱技术:通过组合电离色谱法量化每个分子的丰度的技术,可以高精度分离电离化合物和质谱法,质谱法,从而可以精确测量质量和电荷的比例,从而量化每种分类分子的质量和电荷。注9。五肽磷酸盐循环:一种代谢途径,该途径合成了来自葡萄糖的Pentose,一种DNA和RNA的材料。在此过程中,细胞提供去除活性氧所需的还原能力。注意10。活性氧:在包含氧的分子中,它们是特别反应性的,很薄,例如DNA
在这项研究中,使用指数富集(SELEX)方法选择了使用配体的系统演化,选择了与OLE E 1(橄榄花粉的主要过敏原)的单链DNA适体。通过酶联寡核苷酸测定(ELONA)和适当沉淀测定法首先建立了适体的结合。此外,还使用适体模型的单片毛细血管色谱法,以评估该过敏蛋白对其他非靶向蛋白的识别。结果表明aptole1#6是为OLE E 1.选定的适体对该蛋白显示出良好的选择性识别,无法保留其他非靶蛋白(HSA,CYT C和其他花粉蛋白,例如OLE E 9)。通过在过敏皮肤测试中选择性识别OLE E 1的选择性识别,证明了Aftiminity整体柱的可行性。该整体柱的稳定性和可重复性是合适的,在保留时间和峰面积值分别为7.8和9.3%(列到柱可重新可重复),相对标准偏差(RSD)分别为7.8和9.3%。这是第一项研究,描述了该相关过敏原的有效DNA适体的设计。©2021作者。由Elsevier B.V.这是CC BY-NC-ND许可证(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/)下的开放访问文章。
这项研究研究了使用计算和实验方法在太阳能电池中使用的计算和实验方法,研究了新型共轭化合物的几何和电子特性。密度功能理论(DFT)在B3LYP水平上具有6-311g(DP)基集,用于探索这些材料的理论基态几何形状和电子结构。我们检查了环结构和取代基的影响,以更好地了解分子结构和光电特性之间的关系,重点是最高占用分子轨道(HOMO)的能级和最低的未置分子轨道(Lumo)。Homo-Lumo Energy GAP(ΔG)和开路电压(VOC)分析证实了这些材料作为有机染料太阳能电池候选物的潜力。在实验上,使用标准有机合成技术实现了化合物D1,D2,D3和D4的合成。中间化合物是通过冷凝反应合成的,并进一步反应形成了最终的肼产物。使用薄层色谱法纯化了这些化合物,其结构通过光谱技术确认,包括NMR,IR和MS。全面的验证确保了合成化合物的准确性和可重复性,证明了它们作为染料敏化太阳能电池的材料的功效。合并的理论和实验结果为优化这些染料增强太阳能细胞性能提供了坚实的基础。
摘要 R 环杂交和电子显微镜已用于测定克隆基因的细胞 RNA 浓度。在质粒 DNA 序列过量的情况下,所有互补 RNA 都被驱动到可通过电子显微镜分析的 R 环结构中。为测定特定 poly(A)+ RNA 的浓度,将质粒 DNA 每 2000-5000 个碱基对与三氧沙林和紫外线交联一次,以 DNA 序列过量的方式与各种已知量的总 poly(A)+ RNA 杂交,并通过用乙二醛处理来稳定 R 环。如有必要,可使用 Sepharose 2B 色谱法去除多余的未杂交 RNA,从而能够可视化较少的转录本。重建实验表明,通过电子显微镜测定含有特定 RNA 环的质粒 DNA 分子的比例可以给出总 poly(A)+ RNA 群体中特定 RNA 重量比例或浓度的准确值。这些方法还用于测定 TRT3 上与序列互补的五种 RNA 物种的浓度,TRT3 是一种重组 DNA 质粒,含有酵母组蛋白 2A 和 2B 基因以及另外三种非组蛋白基因。所描述的方法允许人们可视化丰富和非丰富转录本的 R 环结构,并通过确定含有 R 环的 DNA 分数来估计这些 RNA 物种的浓度。