抽象的生物药物蛋白通常是通过培养重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞而产生的。高生产者细胞系从转染的细胞中筛选,并随机整合靶基因。由于转基因表达易受综合基因组基因座的周围环境的影响,因此应从大量具有异质转基因插入的重组细胞中选择生产者细胞系。相比之下,靶向集成在特征的基因组基因座中可以预测的转基因表达和较少的克隆变异性,因此可以预期稳定的靶蛋白产生。基于基于可编程核酸酶的基因组编辑技术最近已成为细胞基因组中靶基因座精确编辑的多功能工具。在这里,我们使用CRISPR/CAS9和CRISPR介导的精确整合到靶染色体(PIST)系统中,证明了将转基因的靶向敲入转基因的CHO细胞中的低黄嘌呤磷酸糖基转移酶(HPRT)基因座。我们还基于与同源性的靶向集成(HITI)系统生成了敲入CHO细胞。我们使用这些系统评估了转基因在HPRT基因座中的敲门效率。
收稿日期:2020 - 03 - 25 基金项目:国家统计生物新品种培育重大专项(2018ZX08003 - 03B) 作者简介:李树磊,男,硕士研究生,研究方向:植物分子生物学与基因工程;邮箱:lishuleilsl@163.com 通讯作者:王磊,男,博士,研究员,研究方向:作物功能基因组学;邮箱:wanglei01@caas.cn
2024年3月19日,CNCVRC公布了第二批通过CNCVRC初步审查的转基因1号玉米和大豆品种名单(中文链接)。该公告的公众意见征询期为30天,或至2024年4月17日。该公告是继其首批转基因玉米和大豆品种登记名单之后发布的,该名单于2023年10月17日公布征询意见,并于2023年12月7日最终确定。有关第一批转基因品种名单的更多信息,请参阅GAIN报告《MARA宣布51个转基因玉米和大豆品种已登记》。公布的 27 个转基因玉米品种包括北京大北农科技集团(DBN)开发的 14 个转基因玉米品种(DBN9936)、北京良源生物技术有限公司开发的 8 个品种(ND207)和杭州瑞丰生物科技股份有限公司与浙江大学开发的 3 个品种(瑞丰 125 事件)。公布的 3 个转基因大豆品种包括中国农业科学院作物科学研究所开发的 2 个品种(中黄 6106)和 DBN 开发的 1 个品种(DBN9004)(每个品种的转基因目标性状信息见本报告附录 2)。一旦最终确定,上市的转基因玉米和大豆品种将有资格在核准地区种植,这将使中国更接近转基因玉米和大豆的全面商业化种植。但在可预见的未来,这些品种很可能仅在中国批准的转基因玉米和大豆试点项目中种植,这将限制2024年的种植规模。本报告提供了CNCVRC公告的非正式翻译,以及通过第五届CNCVRC初步审查的转基因玉米和大豆品种名单、适宜种植区域和这些品种的产量表现。公告还包括通过第五届CNCVRC第六次会议初步审查的转基因玉米和大豆品种简介(中文链接),其中提供了有关性状特征、产量表现、栽培技术和初审意见的更多信息。本报告附录2提供了这些品种的目标性状和产量表现摘要的非正式翻译。
外源基因的异源表达、内源基因的过度表达和抑制不良基因的表达是转基因技术改良作物的三种策略。截至 2020 年,全球批准商业化推广的作物单个转基因事件(265 个)中,大多数(227 个)都是通过第一种策略开发的。其中 38 个是通过转录反义或双链 RNA 的合成序列转化的,3 个是通过抑制不良基因表达的突变拷贝转化的(第三种策略)。通过第一种和第三种策略,已经开发并批准商业化推广了数百个转基因事件和数千个品种,这些品种对除草剂和杀虫剂的抗性以及营养品质都有显著提高。它们的应用大大减少了合成农药的使用和作物生产成本,提高了作物的产量和农民的收益。然而,除一个育性恢复事件和另一个提高除草剂耐受性的事件外,几乎所有的内源基因过度表达事件都停留在测试阶段。在组成型启动子的控制下异源表达的外源基因所赋予的新功能通常在受体作物中是不存在的或通过不同的途径实现。然而,过量表达的内源基因编码的内源蛋白质受到复杂的网络调控,具有功能冗余和可替换的途径,难以显著地赋予理想的表型。结论是,对于作物的转基因改良而言,外源基因的异源表达和通过 RNA 干扰和成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR/Cas) 抑制不良基因的表达优于内源基因的过量表达。
** Air III-第844/2012号Reg(EU)下的附件I续期; MRL第396/2005号法规第10条,第396/2005号法规(EC)第43条,ART 31授权是指(EC)第31条(EC)178/2002 ***第1章***第1节和第2条的氯洛龙和第2条是与平行的专业知识和专家有关。
有几件事常常会出错。首先,基因编辑工具或“基因剪刀”可以在基因组中与目标位点相似的非预期位置进行切割,从而导致非目标基因发生突变(DNA损伤)。其次,即使在预定的编辑位点也会发生不同类型的无意DNA损伤,这可能导致许多基因功能的意外破坏或中断。第三,整个基因编辑过程(包括必需的植物细胞组织培养阶段)会导致生物体基因组中发生数百或数千个随机突变,其中一些突变会破坏许多基因的功能,即使是无意的。
雄性蚊子具有生育能力,因此可以交配并产生可存活的后代。这种蚊子经过基因改造后主要产生雄性后代(实验室中高达 95%)。雄性蚊子不会叮咬,因此不会传播疾病。由于这种蚊子不携带基因驱动技术(50% 的后代通过正常遗传携带转基因),在获得批准的野外释放中,这种基因改造只会传递有限的几代,然后就会从种群中消失,大概在两个雨季内。雄性蚊子具有父系遗传性,这意味着携带基因改造的雄性会生出大多数雄性后代,而与未携带基因改造的雄性交配的雌性会拥有 50% 雌性和 50% 雄性的正常性别比例。
摘要。转基因 (GM) 动物对于解决与营养和健康有关的人类全球问题是必不可少的。兔子作为实验室、家养和农场动物,在研究中占据着特殊的地位。转基因兔子有望成为利用牛奶或血液生产生物活性 (BA) 蛋白的生物反应器,并且在生物医学中作为疾病的生物模型受到欢迎。迄今为止,世界上已经使用 CRISPR/Cas9 技术创建了许多转基因兔子-生物模型,即重组蛋白的生产者。全俄动物生理学、生物化学和营养研究所在通过将重组 DNA 微注射到受精卵原核中来获得转基因兔子-利用牛奶生产人类 BA 蛋白方面拥有丰富的经验。讨论了使用 CRISPR/Cas9 技术对兔乳清酸性蛋白 (WAP) 基因进行位点特异性修饰的可能性。获得了包含与 WAP 兔基因同源臂和质粒形式的位点特异性 CRISPR/Cas9 成分的 DNA 基质。对兔受精卵进行显微注射,并评估了体外胚胎的存活率。评估了使用 DNA 基质中巨细胞病毒启动子下的绿色荧光蛋白基因作为同源定向修复指标的效率。这项工作对于获得用乳汁 BA 蛋白代替 WAP 生产的兔子很有用。
基于 CRISPR/Cas 的基因组编辑技术有可能加快大规模作物育种计划。然而,坚硬的细胞壁限制了 CRISPR/Cas 成分进入植物细胞,从而降低了基因组编辑效率。已建立的方法,例如农杆菌介导或基因枪转化,已用于将含有 CRISPR 成分的基因盒整合到植物基因组中。这些方法虽然有效,但也存在几个问题,包括 1) 转化过程需要费力且耗时的组织培养和再生步骤;2) 许多作物物种和优良品种难以转化;3) 在无性繁殖或高度杂合的作物(如菠萝)中,转基因的分离要么困难要么不可能;4) 生产转基因第一代可能引起公众争议和繁重的政府监管。无转基因基因组编辑技术的发展可以解决许多与转基因方法相关的问题。无转基因基因组编辑已通过递送预组装的 CRISPR/Cas 核糖核蛋白实现,尽管其应用有限。使用病毒载体递送 CRISPR/Cas 成分最近已成为一种强有力的替代方法,但需要进一步探索。在这篇综述中,我们讨论了无转基因基因组编辑方法的不同策略、原理、应用和未来方向。
B2 与申请有关的转基因生物的一般描述 GMO 的描述 GMO 是野生型副伤寒沙门氏菌 (S. Paratyphi) A 9150 菌株的同源突变体。遗传改造的目的是构建一种带有 guaBA 操纵子和 clpX 基因缺失的改良 S. Paratyphi A 9150 菌株,以产生生长缺陷的减毒 S. Paratyphi A 菌株 (CVD 1902)。GMO (CVD 1902) 将用于研究其作为减毒活口服疫苗在受控人类感染模型中预防肠热病的价值。CVD 1902 副伤寒沙门氏菌 A 血清型活口服疫苗是由野生型亲本菌株 S. Paratyphi A 9150 构建的。使用改良的 Lambda Red 介导的定点诱变程序进行缺失。删除了两个基因序列:guaBA 染色体操纵子(编码远端从头鸟嘌呤核苷酸生物合成途径中使用的两种酶)和 clpX 基因(编码分子伴侣 ATPase,与 clpP 编码的丝氨酸蛋白酶一起发挥作用,形成参与各种代谢过程的复合物)。clpX 缺失突变的表型后果之一是鞭毛的过度表达,这也可能增强 GMO 菌株的免疫原性,因此有助于其作为减毒活疫苗的适用性。从研究中获得的信息将用于指导疫苗设计和开发,从而可能影响公共卫生干预策略。应用描述在这项临床研究中,我们建议调查 GMO CVD 1902 作为减毒活疫苗在 S. Paratyphi A 人类攻击模型中预防副伤寒感染的有效性。使用野生型 S 的 S. Paratyphi A 感染的人感染模型。副伤寒甲型(NVGH308 株)已在牛津疫苗组(英国牛津大学)建立。牛津疫苗组(英国牛津大学)一直在进行