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World File Search System金门
crispr-tsko的金门装配
在第一步中，将六个金门入口向量合并为目标向量。有各种可以使用的金门目标向量，其中包含可以使用的不同植物和/或视觉标记物（请参阅补充数据集1中的金门目标矢量（CCDB +）1）。第一个入口向量（AB）包含组织特异性表达的启动子。第三个入口矢量（CD）包含核酸酶，可以与N末端（BC）或C末端标签（DE）结合使用。另外，如果不需要标签，则使用链接序列。第五入口矢量（EF）包含工厂终结器。选择的第六个黄金入口向量（FG）取决于最终目标。要克隆与一个或两个GRNA兼容的矢量，请使用未武装的GRNA进入矢量PGG-F-F-ATU6-26-AARI-AARI-AARI-G（请参阅补充数据集1中的未武装GRNA进入向量1）。要克隆与多个GRNA兼容的矢量，请使用可变的链接器PGG-F-a-aari-sacb-aari-g-g（请参阅补充数据集1中的可变链接器）。由于我们的克隆策略使用限制酶Bsai和Aari，因此要求所有向量都需要无BSAI和AARI-FIME（除了克隆位点）。
金门DNA组装的自动化和微型化
量子位可以隔离以执行有用的信息理论任务，即使物理系统从根本上是由非常高维操作员代数来描述的。这是因为可以将Qubits始终嵌入更高维的Hilbert空间中。将经典概率分布的类似嵌入到量子理论中，可以通过变质出现经典物理。在这里，我们询问哪些其他概率模型可以类似地嵌入到有限的维量子理论中。我们表明，可嵌入的模型正是与欧几里得特殊的约旦代数相对应的模型：对真实，复数或四元素的量子理论以及“自旋因子”（具有三个以上自由度的量子），及其直接总和。在这些情况下，只有具有超级条例规则的经典和标准量子理论才能由物理腐蚀图产生。我们的结果通过阐明如何（或不能）伪造量子理论的某些实验测试对量子理论的某些实验测试产生了重大影响。此外，它们暗示所有不受限制的非古典模型都必须是上下文。
使用综合方法预测金门组装 (GGA)
一锅法组装来自多个组成部分的长 DNA 序列是快速生成现代合成生物学构建体的关键。一锅法组装由短悬垂结构（例如 Golden Gate）连接的多个片段的方法取决于准确和无偏的连接。迄今为止，连接点的设计很大程度上取决于经验法则和经验成功，而不是连接酶保真度和偏向性的详细数据。在本研究中，我们应用 Pacific Biosciences 单分子实时测序技术在一次实验中直接测量每个可能的 5′-四碱基悬垂结构配对的连接频率。该综合数据集已用于预测使用 IIS 型限制性酶 BsaI 的 Golden Gate 组装 (GGA) 的准确性。根据连接数据设计了十个片段组装，其中连接点预测会导致高或低保真度组装。实验结果不仅证实了总体准确性，还证实了观察到的特定错配连接错误及其相对频率。这些数据还用于设计 12 或 24 个片段的乳糖操纵子组装体，结果表明组装体具有高保真度和高效率。因此，连接酶保真度数据可以预测高精度突出端对集，设计灵活性比经验法则更高，即使在定义的编码区域内也可以在高精度连接点组装 20 多个片段，而无需修改天然 DNA 序列。
标题低成本的弗雷德金门，辅助空间作者...
有效的量子信息处理部分是最大程度地减少量子逻辑门所需的量子资源。在这里，我们提出了通过利用辅助Hilbert空间来优化最大2 n + 1个两分门和2 N单Qudit门的N- controlled Qubit的弗雷德金门。逻辑门的数量需要改善较早的结果，以模拟任意N Qubit Fredkin大门。尤其是，一个单控制的弗雷德金门（需要三个Qutrit-Qubit部分折叠门）的最佳结果破坏了理论上的非构造性下限五个Qubit Gates的下限。此外，使用其他空间模式的自由度，我们设计了一种可能的体系结构，以实现具有线性光学元素的极化编码的弗雷德金门。
金门国家娱乐区气候行动计划2024
我们采购决策的上游和下游影响通过产品和废物的生产，运输和处置有助于气候变化。我们将专注于对减少废物和排放产生最大影响的公园行动。我们还将优先采取措施，以最大程度地划分一次性塑料产品，与DOI秘书命令3407。该订单旨在减少单塑料产品和包装的采购，销售和分发，目的是在2032年之前在部门管理的土地上淘汰所有一次性塑料产品。
使用Nebridge®金门组件进行蛋白质工程的DNA洗牌
组合片段的序列和所得的吸光度光谱用于开发计算模型，以预测片段的进一步组合，从而导致其他新型颜色。用适配器（TwistBioscience®，South San Francisco，CA）重新排序基因片段，以进行扩增，并使用Q5®热启动High Fidelity 2X Master Mix（NEB＃M0494）在50 µL反应中放大了PCR，并使用Spri®Beads清洁，并在100 µL水中洗净。使用Opentrons OT-2，将包含目的地矢量的主混合物和15 µL Nebridge Golden Gate组件套件（BSAI-HFV2）的组件组件组装在4°C温度模块上，然后通过涡旋将其混合在甲板上。然后，液体处理程序在没有温度控制的情况下将主混合物分布在96孔板上。使用OT-2，在3小时以上（总计576个零件）的过程中，将每个组件的6个零件移动。然后将板密封，并进行37°C的30个循环1分钟16°C 1分钟，然后在60°C的最终持有5分钟。2 µL转化为20 µL T7 Express Compation E.Coli。5 µL的稀释或浓缩转化铺在LB KAN上，并在37°C下生长过夜。菌落生长后，将它们从孵化器中取出，并允许在台式上开发颜色过夜，然后在4°C的冰箱中发育。
使用Nebridge®金门组件进行蛋白质工程的DNA洗牌
组合片段的序列和所得的吸光度光谱用于开发计算模型，以预测片段的进一步组合，从而导致其他新型颜色。用适配器（TwistBioscience®，South San Francisco，CA）重新排序基因片段，以进行扩增，并使用Q5®热启动High Fidelity 2X Master Mix（NEB＃M0494）在50 µL反应中放大了PCR，并使用Spri®Beads清洁，并在100 µL水中洗净。使用Opentrons OT-2，将包含目的地矢量的主混合物和15 µL Nebridge Golden Gate组件套件（BSAI-HFV2）的组件组件组装在4°C温度模块上，然后通过涡旋将其混合在甲板上。然后，液体处理程序在没有温度控制的情况下将主混合物分布在96孔板上。使用OT-2，在3小时以上（总计576个零件）的过程中，将每个组件的6个零件移动。然后将板密封，并进行37°C的30个循环1分钟16°C 1分钟，然后在60°C的最终持有5分钟。2 µL转化为20 µL T7 Express Compation E.Coli。5 µL的稀释或浓缩转化铺在LB KAN上，并在37°C下生长过夜。菌落生长后，将它们从孵化器中取出，并允许在台式上开发颜色过夜，然后在4°C的冰箱中发育。
使用Nebridge®金门组件进行蛋白质工程的DNA洗牌
质粒DNA的产率和质量受质粒拷贝数，质粒大小，插入毒性，宿主应变，抗生素选择，生长培养基和培养条件的影响。对于大肠杆菌的标准克隆菌株，我们建议使用新鲜条纹的选择板中的单个菌落来接种标准的生长培养基，例如LB（Luria-Bertaini）培养基。培养物通常在37°C和200-250 rpm的血管中生长，该容器允许曝气（Erlenmeyer烧瓶或滚筒上的Erlenmeyer烧瓶或培养管），并在12-16小时后收获，因为培养物从对数生长到固定相的培养过渡。这是质粒DNA含量最高的时间。LB中的培养物通常在3-6之间的最终OD 600中饱和，但生长至饱和度通常会导致细胞裂解。结果，质粒的产量和质量降低，并增加不需要的宿主染色体DNA的可能性增加。使用丰富的培养基（例如2x YT或TB）在较短的时间内会产生更高的生物量。如果选择用于生长，则应对准备中使用的培养时间和细胞数量进行调整以纠正这些差异，并避免矩阵过载并降低DNA的产量和质量。
悉尼·亨特 (Sydney Hunt)：我想我妈妈确实有一些事情……
绝对是。我的意思是，我认为经典的是金门大桥。我觉得它太美了。我只是想知道，当你想到加利福尼亚时，我觉得大多数人都认为我更像洛杉矶、南加州、海滩等等，这也许太天真了。海湾美丽而美妙。海滩没有那么热，所以我们不会游泳和潜水。但我认为这里的景色令人难以置信。金门大桥美丽而美妙。实际上，我认为我们在秋天看到的最好的景色是 Knight-Hennessy 的 Bruno 组织的帆船比赛，我们可以乘船在海湾或金门大桥下的恶魔岛航行，那里真的很美。所以我认为我也有点偏见，因为那是我最喜欢的学者组织的活动之一。我肯定会说是金门大桥。Zareen's。哦，我的天哪。我痴迷了。我太着迷了。
![arxiv：2307.16130v2 [Quant-ph] 2023年10月10日](/simg/e\e00fe707fff037bedd0542b51a45bbf5e921f9e4.webp)
arxiv：2307.16130v2 [Quant-ph] 2023年10月10日
抽象的金门克隆已成为最受欢迎的DNA组装技术之一。其模块化和分层结构允许构建复杂的DNA片段。随着时间的流逝，金门克隆允许创建可重复使用的部分的存储库，从而降低了频繁的序列验证的成本。但是，随着反应和碎片的数量增加，消耗品的成本和人为错误的可能性也会增加。通常，黄金反应以10至25 µL的体积进行。最近的技术进步导致了使用声音将NL液体从源板转移到目标板中的液体处理机器人的发展。这些声学分配器在合成生物学领域变得特别流行。该技术的使用允许以无尖的方式微型化和平行分子反应，从而通过减少塑料废物和试剂使用来使其可持续。在这里，我们提供了一种逐步协议，用于在1 µL总体积中执行和并行化的金门克隆反应。关键词：金门克隆，DNA组装，声学液体处理，体外，合成生物学，NL反应，可持续性