结核病(TB)是由结核分枝杆菌引起的疾病,对全球健康是严重威胁。可用于检测和鉴定引起TB的细菌的方法是定量聚合酶链反应(QPCR)。在这种方法中,变性和延长温度是需要优化成功的决定因素之一。这项研究旨在优化DNA M.结核病的扩增中的变性和延长温度。使用准实验设计的研究。最优化的温度为93、94、95、96和97°C,用于扩展为58、59、60、61和62°C。测试样品是从结核分枝杆菌的患者收集的痰液样本,对异念珠菌具有抗性。优化是使用七个测试引物,即S315T,S315N,S315I,S315R,S315G,S315G,S315L和R463B,具有KATG基因的靶标。优化数据通过MS Excel处理最低的CT值。结果表明,使用的每个引物的最佳变性温度各不相同。主要的S315T,S315R和S315G在96°C的变性温度下最佳,最佳S315N在94°C时,主要S315i和R463B在93°C下最佳的R463B,最佳的S315L引物在95°C,最佳的S315L引物,最佳使用的温度为96°C. 96°C. 在58°C下的最佳延伸温度,用于原代S315N,S315N,S315I和R463B,初级S315R和S315G在60°C下,初级S315L在61°C下为61°C。 可以得出结论,变性研究的最佳温度为96°C,延伸为58°C。。在58°C下的最佳延伸温度,用于原代S315N,S315N,S315I和R463B,初级S315R和S315G在60°C下,初级S315L在61°C下为61°C。可以得出结论,变性研究的最佳温度为96°C,延伸为58°C。
1圣乔治大学和圣乔治大学医院NHS基金会信托基金会,英国伦敦,圣乔治大学和圣乔治大学医院; 2曼彻斯特的真菌学参考中心,曼彻斯特学术健康科学中心,Wythenshawe医院,曼彻斯特大学NHS基金会信托基金会和进化论,感染与基因组学部,英国曼彻斯特大学生物学,医学与健康学院; 3意大利罗马的Superiore Di Sanita Instituto Superiore Di Sanita Instituto Superiore Di Sanita系感染,寄生和免疫介导的疾病系; 4Unitéde MycologieMoléculaire,法国巴黎的巴斯德研究所; 5英国加迪夫大学感染,免疫和生物化学系和医学院; 6巴黎大学,寄生虫学杂志实验室,HôpitalSaint-Louis,APHP,巴黎,法国; 7新南威尔士州临床病理学与医学研究所,新南威尔士州健康病理学研究所,澳大利亚威斯特米德医院,临床病理与医学研究所,临床病理与医学研究所,临床病理与医学研究所; 8亨利·蒙多医院的血液学和干细胞移植部门和法国克里蒂尔大学的巴黎 - 最佳克雷特尔大学; 9 Fungal PCR倡议,意大利维罗纳国际人类和动物真菌学会的工作组; 10 Med。诊所II,Caritas Hospital Bad Mergentheim,德国; 11英国格拉斯哥大学感染,免疫和炎症研究所; 12 Karolinska Institutet,瑞典斯德哥尔摩的Karolinska大学医院实验室医学系; 13 Medizinische Klinik II,LaborWü4i,Universitätsklinikumwürzburg,德国; 14临床微生物学学科,都柏林三一学院,爱尔兰都柏林圣詹姆斯医院校园; 15曼彻斯特大学NHS大学NHS基金会信托基金会,曼彻斯特大学的曼彻斯特真菌参考中心和传染病系,曼彻斯特Wythenshawe医院;威尔士大学医院公共卫生医院Cardiff公共卫生参考实验室和16个公共卫生健康参考实验室,威尔士大学医院和试验中心研究/感染与免疫部,加迪夫大学,英国加的夫大学诊所II,Caritas Hospital Bad Mergentheim,德国; 11英国格拉斯哥大学感染,免疫和炎症研究所; 12 Karolinska Institutet,瑞典斯德哥尔摩的Karolinska大学医院实验室医学系; 13 Medizinische Klinik II,LaborWü4i,Universitätsklinikumwürzburg,德国; 14临床微生物学学科,都柏林三一学院,爱尔兰都柏林圣詹姆斯医院校园; 15曼彻斯特大学NHS大学NHS基金会信托基金会,曼彻斯特大学的曼彻斯特真菌参考中心和传染病系,曼彻斯特Wythenshawe医院;威尔士大学医院公共卫生医院Cardiff公共卫生参考实验室和16个公共卫生健康参考实验室,威尔士大学医院和试验中心研究/感染与免疫部,加迪夫大学,英国加的夫大学
冠状病毒家族[1]。病毒基因组(约29 kb)包含11个开放式阅读框,它们编码四个结构蛋白和7种非结构性(NS)蛋白质。FCOV根据其致病性分为两种生物型:猫肠病毒(FECV)和猫感染性骨膜炎病毒(FIPV)[2]。FECV感染主要限于肠道,导致轻度,自限制的胃肠道疾病。FIPV会导致致命的多系统,免疫介导的疾病,该疾病是大坝老化的各种组织和器官,腹膜炎甚至死亡是损害的最典型迹象[2,3]。fipv被认为是FECV的突变体,导致病毒致病性和向性欲的变化。然而,可以解释FECV和FIPV的不同致病性的遗传差异仍然不清楚[1,4,5]。根据病毒抗原>
Original Research Article Effect of DNA Template Concentration on Standard Polymerase Chain Reaction Alif Haikal Mazlan 1 , Muhamad Hafizal Aqhmal Muhamad Najib 1 , Mizaton Hazizul Hassan 1 , Fazleen Haslinda Mohd Hatta 1 , Rosmadi Mohd Yusoff 1* 1 Faculty of Pharmacy, Universiti Teknologi MARA (UiTM)雪兰莪分支,42300 Bandar Puncak Alam,雪兰莪,马来西亚摘要聚合酶链反应(PCR)是一种在分子生物学中广泛使用的基本基本程序,用于扩大特定的脱氧核酸(DNA)序列。使用从人类血细胞中提取的DNA研究PCR的效率和特异性,在此优化过程中,使用了几种浓度的DNA模板来获得准确且可重现的结果。主要目标是确定哪种浓度是放大DNA靶序序的最佳浓度并研究浓度尺度对标准PCR的影响。在这项研究中,在优化的引物浓度,退火温度和延长时间的情况下,使用各种浓度的DNA模板进行了一系列PCR。结果表明,DNA模板浓度显着影响PCR的效率和特异性,因为在紫外线的琼脂糖凝胶电泳上增加了靶基因扩增带的强度,这表明PCR产物产物。随着DNA模板浓度降低导致非特异性扩增,引物二聚体的形成变得更加突出。从10 ng/µl到70 ng/µl的浓度是最佳反应,促成了靶基因扩增的显着壮举,而小于1 ng/µl的浓度却没有产生,而没有产生的非特异性结果,而无需留下少量的靶基因扩增。总而言之,我们的研究强调了DNA模板浓度的关键作用,优化了PCR,以提高可靠性和可重复性,从而扩展了我们对遗传分析,诊断和法医科学的理解。关键字:聚合酶链反应(PCR),DNA模板浓度,扩增效率和特异性 *相应的作者Rosmadi Mohd Yusoff Yusoff Pharmaceutical Life Sciences,药房,Teknologi Universiti Teknologi Mara(UITM)Mara(UITM)Selangor Branch,42300 Bandar Puncak puncak Alam,Malays selandia,Malays selangia,Malase。rosmadi0365@uitm.edu.my收到:2023年11月2日;接受:2024年1月3日在线上可用:2024年2月29日http://doi.org/10.24191/ijpnacs.v7i1.01
使用适当的诊断工具对于土壤传播的蠕虫控制和消除工作至关重要。Kato-Katz(KK)是最常用的诊断,但最近其他工具,例如实时定量聚合酶链反应(多重QPCR),开始使用更多。在这里,我们评估了泰国五个蠕虫物种的这两种诊断工具的性能。在没有黄金标准的情况下,可以使用潜在类别分析评估诊断性能。我们的结果表明,在高于2%多重QPCR的中等至高流行率的情况下,这比KK更敏感,对于东北省的Opisthorchis viverrini来说,这尤其明显。然而,对于低患病率,两种诊断症都遭受低灵敏度。两种诊断的特异性估计在所有设置中均为高(高于70%)。对于某些特定的蠕虫感染,例如O. viverrini,
摘要:最近发现的Jingmenvirus组包括具有分段基因组的病毒,正极性的RNA以及几种与邻属蛋白酶成员蛋白质较远的蛋白质的蛋白质。据报道,一些Jingmenvirus组成员,即unsshan病毒(ALSV)和Jingmen Tick病毒,是tick传播的人类病原体,可能引起多种症状。ALSV广泛分布在欧亚大陆,但没有可靠的测定可以检测到它的存在。我们描述了用于ALSV检测的QPCR系统。我们的数据表明,该系统可以检测到样品中ALSV的10 4份。该系统没有显示出在欧亚大陆循环的常见tick传播病毒的扩增,即扬孔tick病毒(这是另一个jingmenvirus群体成员)或临床属的一些已知成员。QPCR系统进行了测试,没有ixodes ricinus,I。Persulcatus,Dermacentor reticulatus,D。Marginatus,Haemaphysalis concinna和H. Japonica Ticks的非专业信号。QPCR系统也没有针对人类和绵羊血清的非十个信号。总体而言,此处描述的QPCR系统可用于可靠和定量的ALSV检测。
1动物菌丝病的预防和控制剂的关键实验室(农业和农村事务部),霍贝里农业科学学院动物饲养和兽医研究所,特殊ONE,Nanhuyaoyuan,Hongshan地区,洪山区,Wuhan 430064,中国; DJF0825@163.com(J.D.); wangzui@webmail.hzau.edu.cn(Z.W.); lili_0215@126.com(L.L.); luqin198909@126.com(Q.L.); jinxinxin@webmail.hzau.edu.cn(X.J.); Cheery2221@163.com(X.L.); shhb1961@163.com(H.S.)2 Hubei Hongshan Laboratory, Wuhan 430064, China 3 Department of Animal Medicine, College of Life Science and Food Engineering, Hebei University of Engineering, Handan 056038, China 4 Department of Microbiology and Immunology, Dalhousie University, Halifax, NS B3H 4R2, Canada * Correspondence: zhaixg1966@163.com (X.Z.); qingping0523@163.com(q.l.)†这些作者为这项工作做出了同样的贡献。
Amplification of DNA for: • Sequencing • Genotyping • Cloning • Pathogen detection Advantages • Increased dynamic range of detection • No post-PCR processing • Higher sensitivity and specificity • Closed system reduces the risk of contamination • An increase in reporter fluorescent signal is directly proportional to the number of amplicons generated • Shorter turnaround time • No post-PCR processing
基于摘要的树突状细胞(DC)的免疫疗法已应用于胶质母细胞瘤(GBM);但是,告知反应的生物标志物仍然对回应的理解仍然很差。我们在基于替莫唑胺的化学放疗后,研究了接受TFDC免疫疗法的患者,研究了替莫唑胺的化学疗法并确定预后因素的患者,研究了肿瘤融合的DC(TFDC)免疫疗法。纳入了28名GBM异氯酸盐脱氢酶(IDH)野生型(IDH-WT)的成年患者;给予127次TFDC疫苗注射(4.5±2.6次/患者)。GBM IDH-WT患者的5年生存率(24%)可观,验证了TFDC免疫疗法的临床活性,尤其是针对O 6-甲基鸟氨酸-DNA甲基转移酶(MGMT)非甲基化GBM(5年生存率:33%)。确定影响了用TFDC免疫疗法处理的GBM IDH -WT中总体生存(OS)的新因素,评估了临床参数,并进行了涉及转录组和外来分析的全面分子分析。MGMT启动子甲基化状态,肿瘤切除程度和疫苗参数(给药频率,直流和肿瘤细胞数以及融合比)与TFDC免疫疗法后的存活无关。老年以及术前和术后Karnofsky绩效状况与OS显着相关。肿瘤细胞中的HLA-A-A表达和缺乏CCDC88A,KRT4,TACC2和TONSL突变的缺乏与更好的预后相关。我们验证了TFDC免疫疗法对GBM IDH -WT的活性,包括化学抗性的MGMT启动子未甲基化病例。在GBM IDH -WT中预测TFDC免疫疗法功效的分子生物标志物的鉴定将促进3期试验中的设计和患者分层,以最大程度地提高治疗益处。