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马铃薯 ( Solanum tuberosum ) 是一种高度多样化的四倍体作物。优良品种杂合性极强,品种内和品种间短片段多态性 (indel) 和单核苷酸多态性 (SNP) 的发生率很高,在 CRISPR/Cas 基因编辑策略和设计中必须考虑这些因素才能获得成功的基因编辑。在本研究中,对马铃薯品种 Saturna 和 Wotan 中葡聚糖水双激酶 (GWD)1 和抗霜霉病 6 (DMR6-1) 基因分别进行深入测序,结果显示与杂合二倍体 RH 基因组序列相比,四倍体与二倍体相比,存在 indel 和 1.3 – 2.8 的高 SNP 发生率。这使向导 RNA (gRNA) 和诊断性 PCR 设计变得复杂。细胞库(原生质体)水平的高编辑效率对于实现四倍体中的完全等位基因敲除以及减少下游繁琐而精细的植株再生至关重要。在这里,CRISPR/Cas 核糖核蛋白颗粒 (RNP) 通过聚乙二醇 (PEG) 介导的转化瞬时递送到原生质体中。对于 GWD1 和 DMR6-1 中的每一个,设计了 6 – 10 个 gRNA 来靶向包含两个基因的 5 ' 和 3 ' 端的区域。与包括多种生物体的其他研究类似,单个 RNP/gRNA 的编辑效率差异很大,并且一些产生了特定的插入/缺失模式。尽管与靶向 3′ 端相比,靶向 GWD1 5′ 端的 RNP 产生的编辑效率明显更高,但 DMR6-1 5′ 端和 3′ 端的编辑效率似乎有些相似。当仅靶向 GWD1 基因的 3′ 端时,同时用两个 RNP 靶向 5′ 端或 3′ 端(多路复用)对总体编辑产生了明显的正协同效应。与单个 RNP/gRNA 转化中获得的编辑效率相比,位于不同染色体上的两个基因的多路复用对单个 RNP/gRNA 编辑效率没有影响或略有负面影响。这些初步发现可能会引发更大规模的研究,以促进和优化植物的精准育种。
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1 微电网研究中心(CROM)、奥尔堡大学 AAU 能源、9220 奥尔堡、丹麦;juq@energy.aau.dk(JCV);naj@energy.aau.dk(NB)2 马来西亚玻璃市大学(UniMAP)电气工程技术学院、Kampus Pauh Putra、Arau 02600、Perlis、马来西亚;muzaidi@unimap.edu.my 3 奥尔堡港港口设施与环境管理、Langerak 19、9220 奥尔堡、丹麦;bdr@portofaalborg.com 4 可再生能源与电力系统研究卓越中心、电气与计算机工程系、工程学院、KA CARE 能源研究与创新中心、阿卜杜勒阿齐兹国王大学、吉达 21589、沙特阿拉伯; yaturki@kau.edu.sa * 通信地址:nurnbab@energy.aau.dk 或 nurnajihah@unimap.edu.my (NNAB);joz@energy.aau.dk (JMG)
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来自可再生能源(通过电解)或生物质(通过气化)等可再生能源的绿色氢(通过气化)是在少量的小体积中生产的,允许将甲烷与甲烷混合并使用现有的气体基础设施进行管道运输。目前现有的专用氢运输基础设施是比利时,法国北部和荷兰的工业集群。一些项目已经测试了管道转化和地下存储从天然气到氢的可行性。
摘要— 分析了检查机载激光扫描数字高程模型平面精度的当前技术水平。介绍了所提出方法的原理,包括数学方程。特别强调了用于与真实值进行比较的导出点的精度。应用最小二乘调整,通过迭代确定权重作为校正大小的函数来减少观测中误差的影响。使用来自丹麦新数字高程模型的数据进行了实际测试。所需的参考值是通过航空图像和摄影测量技术得出的。一些地面控制点由 GPS 确定。然后根据从该方法的实际使用中获得的经验讨论了该方法的可靠性和实用性。结论是,所提出的方法是准确的、对错误具有鲁棒性的并且具有自动化的潜力。