图 2. 适用于鲍曼不动杆菌 276 AB5075 的基因组编辑策略示意图,用于删除 craA 。质粒特征如图 1 所示。当 277 表示时,LB 琼脂平板补充了 100 mg/L 氨苄青霉素 (Ap)、200 mg/L 阿普霉素 (Apr) 和/或 30 mg/L 亚碲酸盐 (Tel)。为了确认 craA 缺失,使用引物 craA fw seq 和 craA down rv 进行菌落 PCR 279。作为对照,使用野生型 AB5075 280 (WT) 和 pEMGT-craA (p)。M:DNA 分子量标记,条带大小以千碱基 (Kb) 表示。使用 BioRender.com 创建。282
摘要背景/目的:鲍曼不动杆菌是一种重要的院内病原体。为了更好地了解鲍曼不动杆菌 CsuA/BABCDE 菌毛在毒力中的作用,进行了细菌生物膜形成、粘附和碳水化合物介导的抑制研究。方法:克隆鲍曼不动杆菌 ATCC17978 的 CsuA/BABCDE 菌毛产生操纵子(简称 Csu 菌毛),以分析非生物塑料平板上的生物膜形成、细菌对呼吸道上皮人 A549 细胞的粘附和碳水化合物介导的抑制。用于抑制生物膜形成和对 A549 细胞粘附的碳水化合物包括单糖、吡喃糖苷和甘露糖聚合物。结果:将鲍曼不动杆菌ATCC17978的Csu菌毛克隆表达到不产生菌毛的大肠杆菌JM109中,并将其敲除。在电镜和原子力显微镜下观察大肠杆菌JM109/rCsu菌毛产生克隆上重组Csu(rCsu)菌毛丰富,而Csu敲除的鲍曼不动杆菌ATCC17978
基于 WGS 的监测大大提高了追踪临床相关病原体多药耐药克隆的全球传播和出现的能力。在本研究中,我们对属于序列类型 ST374 的鲍曼不动杆菌 (菌株 Ac56) 进行了基因组表征和比较分析,该菌株于 1996 年首次在巴西分离。Ac56 的基因组分析预测了总共 5373 个基因,其中 3012 个基因在来自欧洲、亚洲、北美和南美国家的 ST374 鲍曼不动杆菌分离株的九个基因组中是相同的。GoeBURST 分析将 ST374 谱系分为克隆复合体 CC3(国际克隆 IC-III)。ST374 克隆的抗性基因组分析预测了与重金属和临床相关的 β-内酰胺类和氨基糖苷类抗生素耐药性相关的基因。在这方面,在两种密切相关的鲍曼不动杆菌菌株中,内在的 bla ADC 基因与插入序列 IS Aba1 相关;包括 Ac56 菌株,该基因可能与对美罗培南的中等敏感性相关。其他四种耐卡巴培南的鲍曼不动杆菌菌株携带 IS Aba1/bla OXA-23 基因阵列,该基因阵列与转座子 Tn 2008 或 AbaR4 型耐药岛中的 Tn 2006 相关。虽然 ST374 的鲍曼不动杆菌菌株大多数毒力基因是相同的,但来自泰国的三种分离株含有 KL49 荚膜基因座,该基因座先前在高毒力鲍曼不动杆菌 LAC-4 菌株中发现。对三十四种预测质粒的分析显示八个主要组,其中 GR-6(LN − 1)和 GR-2(LN − 2)占主导地位。所有菌株(包括最早的分离株 Ac56)都含有至少一个完整的原噬菌体,但未检测到任何 CRISPR 相关 (cas) 基因。总之,A. baumannii ST374 的基因组数据显示该谱系有潜力成为成功的克隆。
结果:从137个表位中选择了最高分数的九种肽(20AA),并将五个肽视为抗原表位(E1 – E5)。E3作为有效抗原(得分:0.939537)和E1作为最佳疫苗候选者(得分:0.9803)。Solpro将所有表位视为可溶性肽。Protparam预测显示E3和E5作为稳定蛋白,保质期为3.5和1.9 h,具有负肉汁值。PSORTB服务器预测GACS蛋白序列作为细胞质膜蛋白的最终定位评分为7.88。IEDB保护分析显示,GACS序列中的100%保守序列,I类保护均为所有表位产生正值。聚类分析显示出很强的相互作用,并且与TLR-2最终检测到的E5的蛋白质肽相互作用是最佳相互作用的肽(H键= 14),其次是E3(H键= 12)。
由 PACHON IBAÑEZ MARIA EUGENIA - 48806201V 数字签名 识别名称 (DN):c=ES、serialNumber=IDCES-48806 201V、givenName=MARIA EUGENIA、sn=PACHON IBAÑEZ、cn=PACHON IBAÑEZ MARIA EUGENIA - 48806201V 日期:2020.04.23 09:13:44 +02'00'