crispr介导的基因激活A La Feng Zhang等人,自然协议(2017),PMID:28333914“基因组cris crisr-carspr-cas9敲除和转录激活筛选” (#1587,https://www.addgene.org/89308) 制作lenti病毒,请参阅其他地方,使用矢量1和向量2对靶细胞进行选择,选择带有HYG和BSD的细胞,而Lenti-MPH V2表达细胞系可以首先建立。 所有一个向量都可以使用#167934 https://www.addgene.org/167934/制作lenti病毒,请参阅其他地方,使用矢量1和向量2对靶细胞进行选择,选择带有HYG和BSD的细胞,而Lenti-MPH V2表达细胞系可以首先建立。所有一个向量都可以使用#167934 https://www.addgene.org/167934/
2。在有指导RNA的情况下与靶DNA结合,只要目标是原始的邻接基序的上游(5'),GRNA和cas9核酸内切酶都会形成Cas9:GRNA复合物。cas9核酸内切酶与靶基因组基因核基因座结合均由导向RNA中包含的靶序列介导,又介导了一个3碱基对序列,称为原始序列相邻基序或PAM。为了通过CAS9切割DsDNA,它必须立即包含由导向RNA靶向的位点下游(3')的PAM序列。在没有引导RNA或PAM序列的情况下,CAS9既不会结合也不会切割目标。Cas9同源物(请参见下表)具有不同的PAM要求。这些不同的PAM要求使研究人员能够针对许多不同的基因组基因座。
