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原创研究依达拉奉通过 mBDNF/TrkB/PI3K 通路减轻丙泊酚在发育海马中引起的神经毒性
方法：通过检测新生大鼠海马神经干中 ki67 的表达和 HT22 细胞中的细胞计数试剂盒 8 (CCK8) 测定来研究细胞增殖。通过 Western blot 检测 caspase 3 和通过末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 测定神经元和神经胶质细胞的凋亡来评估体内细胞凋亡。通过流式细胞术分析 HT22 细胞中的细胞凋亡。使用 Morris 水迷宫评估大鼠的长期学习和记忆能力。通过酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测炎症因子。通过 Western blot 和定量逆转录聚合酶链反应 (q-RT PCR) 检测 mBDNF/TrkB/PI3K 通路相关蛋白的表达。结果：在新生大鼠海马及HT22细胞中，依达拉奉可促进细胞增殖，减少丙泊酚过量引起的神经毒性作用。此外，依达拉奉预处理可降低促炎因子白细胞介素（IL）-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α的水平。丙泊酚组联合应用原肌球蛋白受体激酶B（TrkB）拮抗剂ANA-12和TrkB激动剂7,8DHF，发现依达拉奉可通过成熟脑源性神经营养因子（mBDNF）/TrkB/磷酸肌醇3-激酶（PI3K）通路减轻丙泊酚过量引起的神经毒性。但当前剂量的丙泊酚对大鼠的长期学习记忆无明显影响。结论：依达拉奉预处理通过激活 mBDNF/TrkB/PI3K 通路改善了丙泊酚诱导的增殖抑制、神经细胞凋亡和神经炎症。关键词：依达拉奉、丙泊酚、海马、脑源性神经营养因子、BDNF、酪氨酸激酶受体 B、TrkB、7,8-二羟基黄酮、7,8-DHF、ANA-12
理学学士微生物学第三学期和第四学期...
第一单元 遗传工程简介。DNA、RNA 和蛋白质分析方法：琼脂糖凝胶电泳、Southern 和 Northern 印迹技术、点印迹、SDS-PAGE 和 Western 印迹。DNA 修饰酶及其应用：限制酶、DNA 聚合酶。末端脱氧核苷酸转移酶、激酶和磷酸酶以及 DNA 连接酶。第二单元 聚合酶链式反应。C-DNA 合成和克隆：mRNA 富集、逆转录、接头、衔接子、平端连接、同聚物加尾。基因组和 cDNA 文库：制备和用途、基因组测序。DNA 测序：传统和自动测序。
在CBP突变体癌症中发现和表征具有有效抗肿瘤活性的P300选择性降解器
（a）通过A549细胞中的p300或CBP测量的降解的选择性。化合物1：ABSDC 50 = 3.2nm，dmax = 90％;化合物2：ABSDC 50 = 1.2nm，DMAX = 87％。（b）孵育6H后通过蛋白质印迹的剂量反应显示H1299细胞中P300的选择性。（c）全局蛋白质组学说明了H1299细胞的选择性。（d）p300的降解取决于UPS系统，这是通过对Neddylation抑制剂（MLN-4924，1μM），Creblon（CC-220，1μM）或蛋白酶体（MG-132，1μm）进行预处理所证明的。（E）通过Hibit测定法测量的p300降解的动力学。
CDK1抑制剂RO-3306通过抑制JAK2/STAT3信号传导
途径在RO-3306的影响下，我们对经过各种治疗的U2932细胞进行了细致的RNA-Seq研究：DMSO，Ibrutinib，RO-3306，以及Ibrutinib和RO-3306的组合。这种方法促进了几种差异表达的RNA的识别，特别是指向与JAK2/STAT3途径激活的关联（图3）。Western印迹和免疫荧光实验，结果表明RO-3306抑制JAK2/STAT3信号，从而抑制了NF-κB的表达和Bcl-2。增强Bax的表达；并影响DLBCL细胞对依鲁替尼的生存，凋亡和药物敏感性。
转座元件的压抑增强了干扰素beta信号传导和
图1：与光子相比，质子辐射的类器官显示出更高的自我更新能力和IFN-β响应。（a）自我更新测定法的示意图。在第5天进行辐照，并在第18天的自我更新后计算了按器官形成效率（Ofe％）的定量。（b）自我更新后培养中器官的代表性图像。比例尺，100 µm。（c）相对于对照样品的折叠变化（FC）所示的器官定量。n = 9动物/病情。（d）大量RNA-Seq分析的示意图。RNA。（e）前10名重要（p.adj。<0.05）在辐照后2和6天，质子与控制和光子对照中的生物过程。（f）显着（p <0.05）ISG的基因表达水平从辐照后6天的类器官的大量RNA-seq数据推断出来。数据相对于对照样品显示为log 2 FC。（g）辐照后6天对ISG的RT-QPCR分析。数据相对于对照样品显示为FC。n = 4个动物/状况。（h）辐照后6天后对类器官的STAT1，PSTAT1和GAPDH的Western印迹分析。（i）STAT1的蛋白质印迹定量（图1i和S2e）。STAT1蛋白水平的GAPDH标准化。 数据相对于对照样品显示为FC。 n = 6只动物/状况。 数据是平均值±s.e.m。 学生的T检验和双向ANOVA。 *p <0.05，** p <0.01。STAT1蛋白水平的GAPDH标准化。数据相对于对照样品显示为FC。n = 6只动物/状况。数据是平均值±s.e.m。学生的T检验和双向ANOVA。*p <0.05，** p <0.01。另请参见图S1和S2。
在 ES 细胞中进行 CRISPR 增强靶向后，靶向率和串联风险增加
摘要：法国小鼠诊所 (Institut Clinique de la Souris; ICS) 已生产出 2000 多个用于 C57BL/6N 小鼠“点菜”诱变的靶向载体。尽管大多数载体已成功用于小鼠胚胎干细胞 (ESC) 中的同源重组，但少数载体在多次尝试后仍无法靶向特定位点。我们在此表明，将 CRISPR 质粒与与之前失败的质粒相同的靶向构建体进行共电穿孔可以系统地获得阳性克隆。然而，必须仔细验证这些克隆，因为大量克隆（但不是全部）显示靶向质粒在位点处发生串联。详细的南方印迹分析可以表征这些事件的性质，因为标准的长距离 5′ 和 3′ PCR 无法区分正确和错误的等位基因。我们表明，在 ESC 扩增之前进行简单且廉价的 PCR 可以检测和消除带有串联体的克隆。最后，尽管我们只测试了小鼠 ESC，但我们的结果强调了任何结合使用 CRISPR/Cas9 和环状双链供体的转基因细胞系（如已建立的细胞系、诱导性多能干细胞或用于体外基因治疗的细胞系）存在错误验证的风险。我们强烈建议 CRISPR 社区在使用 CRISPR 增强任何细胞类型（包括受精卵母细胞）中的同源重组时，使用内部探针进行南方印迹。
微生物组对主机社区动态的影响
持续的有机污染物（POP），其中包括全球广泛使用的农药和工业化学物质，对人类健康构成了秘密威胁。β -heacachlorocyclohexane（β-HCH）是一种具有惊人稳定性的有机氯农药，仍然在许多国家非法倾倒，并被认为是多种致病机制的原因。这项研究代表了暴露于特异性靶向神经元细胞（N2A），小胶质细胞（BV -2）和C57BL/6小鼠的β -HCH引起的神经毒性作用的开创性探索。如Western印迹和QPCR分析所示，β-HCH的给药触发了NF-κB的调节，NF-κB是影响炎症和促炎性细胞因子表达的关键因素。我们通过Proteo MIC和Western印迹技术证明了β -HCH诱导的H3组蛋白的表观遗传修饰。N2a中H3K9和H3K27的组蛋白乙酰化增加，在用β -HCH施用的C57BL/6小鼠的前额叶皮层中，它在BV -2细胞和海马群中降低。我们还通过新的对象识别测试（NORT）和对象位置识别任务（OPRT）行为测试对识别记忆和空间导航产生了严重的有害影响。认知障碍与BDNF和SNAP-25基因的表达降低有关，后者是参与突触功能和活性的介体。获得的结果扩大了我们对β -HCH暴露产生的有害影响的理解，通过强调其对神经疾病的发病机理的影响。这些发现将支持干预计划，以限制暴露于POPS引起的风险。监管机构应阻止进一步的非法使用，从而造成环境危害并危害人类和动物健康。
宠物系统手册
vi。纯化靶蛋白34 A.小规模分析34生长和诱导34诱导培养的光密度分析35总细胞蛋白（TCP）样本35培养基样品35周质分数样品 - 渗透性休克36可溶性细胞质分数37不溶于Preparation of Cell Extracts with BugBuster™ Protein Extraction Reagent 38 Soluble Fraction 38 Inclusion Body Purification 38 C. SDS-PAGE and Western Blot Analysis 39 Normalized SDS-PAGE Gel Loading 39 D. Large Scale Induction and Fractionation 40 Media Fraction 41 Periplasmic Fraction 41 Soluble Whole Cell Extract Fraction 41 Insoluble Whole Cell Extract Fraction–Isolation of Inclusion Bodies 42 Solubilization包含体和重折叠蛋白43亲和标签的纯化产品44