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使用新型 Lb Cas12a 变体对大麦进行高效基因组编辑以及 sgRNA 结构的影响 Tom Lawrenson、Alison Hinchliffe、Macarena
CRISPR、Cas12a、CPF1、大麦、诱变、单子叶植物、基因组编辑摘要我们报告了首次成功、高效使用大麦中的 Lb Cas12a，并描述了两种新型 Cas12a 变体的开发和应用。总共我们使用二十种不同的指南比较了五种编码序列 (CDS) 变体，包括两种新型变体和两种指南架构，针对 5 种不同的靶基因。我们发现不同 CDS 版本 (0-87%) 和指南架构 (0-70%) 之间的编辑效率存在很大差异，并且表明我们的两个新型 CDS 版本在该物种的测试中大大优于其他版本。我们展示了产生的突变的遗传性。我们的研究结果强调了优化单个物种的 CRISPR 系统的重要性，并可能有助于在其他单子叶植物中使用 Lb Cas12a。正文 毛螺菌科细菌 Cas12a (Lb Cas12a) 可能是继化脓性链球菌 Cas9 (Sp Cas9) 之后植物基因组编辑中第二广泛使用的可编程核酸酶，并且具有一些潜在优势。首先，由于其对 TTTV PAM 的要求与 NGG 的 Sp Cas9 要求不同，它可用于 GC 沙漠，而 GC 沙漠通常存在于内含子、UTR 和启动子区域中。其次，Lb Cas12a 通常比 Sp Cas9 产生更大的缺失，这可能在缺失研究中有用。第三，虽然 Sp Cas9 在靶标的 PAM 近端切割产生平端，但 Lb Cas12a 在 PAM 远端区域切割产生粘端；这两个特征可能解释了使用 Lb Cas12a 实现的基因靶向发生率更高 (Wolter 和 Puchta，2019)。已知在植物中起作用的三种版本的 Lb Cas12a 针对一个大麦靶标进行了测试。首先，是水稻优化的编码序列 (CDS) (Os Cas12a) (Tang et al., 2017)；其次是人类优化的 CDS (Hs Cas12a)，在双子叶植物中具有功能 (Bernabé-Orts et al., 2019)；第三是拟南芥优化的 CDS，包含 D156R“耐高温”突变 (tt At Cas12a) (Schindele and Puchta, 2020)。我们还创建了两个新版本，携带 D156R 突变的 Hs Cas12a (tt Hs Cas12a) 和携带 8 个内含子的 tt At Cas12 (tt At Cas12+int)。这些内含子之前曾显著提高过 Sp Cas9 的效率（Grutzner 2021），因此我们使用相同的在线工具（NetGene2 - 2.42 - Services - DTU Health Tech）在我们的 tt At Cas12+int 设计中为拟南芥选项获得了较高的剪接置信度。
化学反应中固定质量比定律
1反式支架，H = 750 mm 37694-00 1 2支撑基础演示02007-55 1 3支撑杆，不锈钢，L = 600毫米，D = 10 mm 02037-00 2 4正确的角度boss-boss-head夹具37697-00 4 5通用夹夹37715-01 4 6 Universal Clamp 37715-01 4 4 6 6 R RING combos bass Hears the boss heb heb tobs heb heb heb heb heb heb heb hep heb hear hear hear hear hear hear hear hear hey i i i。 d。 = 10 cm 37701-01 1 7三角w.pipeclay，L 60mm 33278-00 1 8瓷器盘，盖，低，低，29 ML 46449-00 6 9燃烧管，300毫米，300毫米，Quartz，Quartz，Quartz，Quartz，Quartz，Quartz，Quartz，ns 33948-01 1 10连接管IGJ 19/2 26-GL 18/8 3511 clampe fime关节，塑料，NS19 43614-00 2 12 Teflon套筒IGJ 19，10 pcs 43616-00 1 13秒钟，3向，T形，T形，玻璃36731-00 1 14玻璃管，直角，10 pcs。36701-52 1 15 Porcelain boats, 10 pcs 32471-03 1 16 Gasometer 1000 ml 40461-00 2 17 Weather monitor, 6 lines LCD 87997-10 1 18 Test tube, 160 x 16 mm, 100 pcs 37656-10 1 19 Test tube,180x20 mm, PN19 36293-00 1 20 Rubber stopper, d = 22/17毫米，1孔39255-01 1 21干燥器，真空，直径。150 mm 34126-00 1 22 Porcelain plate f.desiccator150mm 32474-00 1 23 Precision Balance, Sartorius, 620 g : 1 mg 49311-99 1 24 Teclu burner, DIN, natural gas 32171-05 1 25 Safety gas tubing, DVGW, sold by metre 39281-10 1 26 Hose clip f.12-20 diameter tube 40995-00 2 27 Lighter f.natural/liquified gases 38874-00 1 28 Steel cylinder hydrogen, 2 l, full 41775-00 1 29 Reducing valve for hydrogen 33484-00 1 30 Table stand for 2 l steel cylinders 41774-00 1 31 Wrench for steel cylinders 40322-00 1 32 Scissors, straight,180 mm 64798-00 1 33坩埚钳，200毫米，不锈钢33600-00 1 34汤匙，特殊钢33398-00 1 35镊子，直，直，钝，200毫米40955-00 1 36 36 36橡胶管，I.D。6毫米39282-00 1 37 Emery Paper，中等01605-00 1 38硅胶，橙色，颗粒，500 G 30224-50 1 39铜箔，0.1 mm，100 g 30117-10 1 40铜-III II氧化物，氧化铜，氧化物，100 g 30125-10 141 41 41 41 41 41 41固定，技术铅，颗粒250 G 30040-25 1 43铅-II氧化物-Litharge-500 G 31121-50 1 44银箔，150 x150 x 0.1 mm，25 G 31839-04 1 45银氧化物，A.R.A.R.
2025年3月11日，康涅狄格州太阳能和存储的评论...
太阳能光伏系统。Connssa是该州的住宅太阳能安装商和商业太阳能开发商的业务组，雇用了2,000多名居民，他们在康涅狄格州提供，出售，设计，工程和安装太阳能电动（光伏）能源产品。已安装在100,000多个康涅狄格州的住宅和商业场所上。Connssa不支持HB 6052。我们同意HB 6052的某些部分。直言不讳，我们已经公开同意三（3）个不同但类似的家庭太阳能消费者保护法案中的一部分。在2021年，SB 951关于住宅太阳能光伏系统招标的法案。康涅狄格州太阳能行业愿意与帐单支持者会面，并在第二年退还更好的账单。我们没有接受我们在书面证词中提供的会面的提议。在2022年是No.5326关于住宅太阳能光伏系统招标和涉及太阳能的房地产交易的法案。再次，康涅狄格州太阳能安装人员提出与帐单支持者会面。无响应。在2024年，SB 297关于太阳能公司客户的消费者保护的一项法案。它创建了一个由16名成员组成的工作组，以研究改善客户太阳能光伏系统销售的方法。工作队将在2025年1月1日之前向立法机关报告其调查结果和建议。现在（HB 6052）再次发生。几位太阳能行业志愿者提出要担任工作队，并由州长拉蒙特（Lamont）的工作人员和核心小组领导人分别审查，并被任命为从未举行过会议的工作队。令人失望的是，在前三（3）次尝试通过太阳能销售消费者保护费用太阳能安装人员被排除在初次讨论之外。自从我们在2021年提供帮助以来，我们对太阳能销售消费者保护政策的看法没有改变。我们继续分享一些相同的合理立法政策思想。实际上，我们的成员已经与许多其他州合作，在该领域发展了最佳实践。我们渴望分享其他州发现的坚实政策。我们当然反对冗余政策，这些政策为销售集团和市政当局和强烈反对法规创造了额外的工作，这些法规将以太阳能行业的规则和罚款来挑选出HB 6052中的规则和惩罚，而HB 6052中并未在所有房屋建筑销售中同样应用。
轻度创伤性脑损伤后出现新的精神障碍
目的 脑震荡是一种轻度创伤性脑损伤 (mTBI)，最常发生在头部钝性创伤后，可能导致暂时失去意识。这些患者通常由神经重症监护专家、神经病学专家和神经外科医生共同管理，具体取决于疾病的严重程度。本研究的目的包括两个方面：1) 评估患者的人口统计特征如何影响 mTBI 后新型精神疾病 (NPD) 的发展；2) 制定筛查建议以识别患有 NPD 的患者。方法 作者使用了医疗保健成本和利用项目 2010-2019 年国家再入院数据库的数据。确定了 2010 年至 2019 年期间首次入院后一年内因 mTBI 再次入院的患者 (n = 206,070)。使用多元二项回归分析检验患者人口统计特征与 mTBI 后 NPD 出现之间的关联。密度图用于检查 NPD 的诊断模式。结果 所有患者的平均年龄为 50.9 ± 26.2 岁，其中 43.9% 的患者为女性。总体而言，mTBI 后，另有 818 名 (0.40%) 患者报告出现新的自杀意念 (SI)、3866 名 (1.9%) 患者出现新的抑郁、3449 名 (1.7%) 患者出现新的焦虑和 88 名 (0.043%) 患者出现新的杀人意念 (HI)。年龄较小 (OR 0.9775, 95% CI 0.9705–0.9848, p < 0.0001) 和 Charlson 合并症指数 (CCI) 评分降低 (OR 0.9155, 95% CI 0.8539–0.9774, p = 0.010) 可能预测新发 SI，而女性 (OR 0.7464, 95% CI 0.6026–0.9214, p = 0.0069) 可能与 mTBI 后的新发 SI 呈负相关。此外，多变量分析发现，女性（OR 1.1774，95% CI 1.0654–1.3016，p = 0.0014）和医疗保险/医疗补助保险类型（OR 0.9381，95% CI 0.8983–0.9797，p = 0.0039）可能预测 mTBI 后的新型焦虑。同样，年龄较小（OR 0.9956，95% CI 0.9923–0.9989，p = 0.0096）、CCI 评分较高（OR 1.0363，95% CI 1.0099–1.0629，p = 0.0062）和 Medicare/Medicaid 保险类型（OR 0.9386，95% CI 0.8998–0.9789，p = 0.0032）可能预测新发抑郁症。最后，女性（OR 0.3271，95% CI 0.1467–0.6567，p = 0.0031）和中位收入增加（OR 0.8829，95% CI 0.7930–0.9944，p = 0.049）与 mTBI 后新发 HI 成反比。抑郁症、焦虑症、SI 和 HI 的 NPD 诊断中位时间为 69.5 天、66.5 天、70.0 天和 66.5 天。结论 众多患者人口统计学因素是 mTBI 和脑震荡后 NPD 发展的重要预测因素。在 mTBI 后 3 周和 3 个月内筛查 NPD 可以识别出大多数有患上新的脑震荡后精神疾病风险的患者，包括焦虑、抑郁、HI 和 SI。有必要进行进一步研究，以了解患者的人口统计学特征应如何决定 mTBI 和脑震荡后的医疗管理和筛查。
个人简历 VINOD KUMAR，博士 主席兼......
DOE：能源部、DOD：国防部、NREL：国家可再生能源实验室、NETL：国家能源技术实验室、ORNL：橡树岭国家实验室、AFRL：空军研究实验室、AFTC：空军测试中心、HAFB：霍洛曼空军基地、MHPCC：毛伊高性能计算中心、UTEP：德克萨斯大学埃尔帕索分校、GFDL：地球物理流体动力学实验室、MHD：磁流体动力学、HPC：高性能计算研究资助的研究活动● UTEP（PI Kumar、Bronson、Sharma、Tandon、Tosh）、UNM（Lead、PI Vorobieff）、NMSU、NMT、PVTAMU V 和 Sandia（PI Tezaur）。，“里奥格兰德百亿亿次级模拟高级研究联盟 (Grande CARES)”，DOE NNSA MSIPP，2022-27，500 万美元（UTEP 125 万美元） ● V. Kumar (PI)，“6 马赫钝拱顶的边界层转变测量”，AFOSR，2022-24，65 万美元 ● V. Kumar (PI)，扩大国家高级建模与仿真基金会，DOE/ASCR，2022-23，4.4 万美元 ● A. Bronson (PI)、V. Kumar (Co-PI)、O. Cedillos (Co-PI)，“HF 合金熔体反应润湿形成 B4C 填料床陶瓷复合材料”，AFOSR，2021-2024，45 万美元 ● V. Kumar ( PI )、R. Edmonds (合作者 - 霍洛曼空军基地)，“HHSTT 雪橇水制动现象的 CFD 建模”，AFOSR， 2019 年 6 月 - 2022 年 12 月，360,000 美元（AFOSR 270,000 美元）● V. Kumar（PI）、V. Tandon、B. Calvo，“探索适合 14-21 岁残疾学生的 STEM”，德克萨斯劳动力委员会 (TWC)，2022 年，60,000 美元● V. Kumar（PI）、V. Tandon、B. Calvo，“探索适合 14-21 岁残疾学生的 STEM”，德克萨斯劳动力委员会 (TWC)，2021 年，65,000 美元● V. Kumar（PI）、N. Agarwal（共同 PI），“探索适合 14-21 岁残疾学生的 STEM”，德克萨斯劳动力委员会 (TWC)，2020 年，64,000 美元● V. Kumar（PI）、N. Agarwal（共同 PI），“探索适合 14-21 岁残疾学生的 STEM”，德克萨斯劳动力委员会(TWC)，2019 年，32,000 美元 ● V. Kumar (PI)、N. Agarwal (Co-PI)，“探索针对 14-21 岁残疾学生的 STEM”，德克萨斯劳动力委员会 (TWC)，2018 年，26,000 美元 ● C. Ramana (PI)、V. Kumar (CO-PI)、A. Bronson (CO-PI)、D. Hodges (CO-PI)，“收购原子层沉积系统以实现用于极端环境应用的先进高电气强度材料”，AFOSR，2019-20 年，590,000 美元 ● V. Kumar ( PI )、R.Gudimetla (合作者 –AFRL)，“遥感和成像物理学：开发深湍流对长路径激光传播影响的新指标”，AFOSR，2017 年 5 月 – 2020 年 5 月，150,000 美元 ● A. Bronson (PI)、V. Kumar (Co-PI)，“Hf-Ti-Me 合金熔体与 B4C 的计算实验反应润湿”，AFOSR，2017 年 8 月 15 日 – 2020 年 8 月 14 日，668,710 美元（AFOSR 45 万美元）● V. Kumar (PI)、W. Spotz（合作者 – Sandia），“流化床实验的高保真计算模型”，NETL - 能源部-化石能源，2015 年 9 月 1 日 – 2018 年 8 月 31 日，400,000 美元● V. Tandon (PI)、V. Kumar (Co-PI)、N. Soheil (Co-PI)、C. Ferregut (Co-PI)、W. Stern - GFDL (合作者)，● V. Kumar (Co-PI)，“了解气候变化对德克萨斯州交通系统的影响和成本”，TxDOT，2015 年 9 月 - 2017 年 8 月，25 万美元 ● V. Tandon (PI)、V. Kumar (Co-PI)，“了解气候变化对公路水力设计程序的影响”，SPTC 研究、教育和推广支持，2015 年 11 月 1 日至 2017 年 10 月 31 日，9 万美元 ● V. Kumar (PI)，“Sunshot 粒子接收器项目：近黑体、封闭式粒子接收器与流化床热交换器集成”，分包（NREL、DOE），2014 年 12 月 - 2015 年 3 月，27,808 美元
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