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全国牛布鲁氏菌病监测计划
自 1934 年以来，美国农业部 (USDA) 动物和植物卫生检验局 (APHIS) 一直与美国畜牧业和州动物卫生当局合作，以根除美国的布鲁氏菌病 (Ragan，2003)。多年来，人们使用了许多监测策略来根除这种疾病，包括在屠宰时对母牛和公牛进行检测、第一点检测（在牲畜市场、展览、销售、购买站等）以及对整个畜群进行农场检测。这些监测策略已被证明是成功的。到 2007 年，全国畜群的患病率降至历史最低水平，不到 0.0001% (USDA APHIS VS，2014)。自 2009 年 7 月以来，APHIS 已正式将美国所有 50 个州指定为牛布鲁氏菌病无级区，尽管最近在大黄石地区 (GYA) 的三个州（爱达荷州、蒙大拿州和怀俄明州）发现了布鲁氏菌病，这可能是由于野生动物外溢造成的。虽然所有 GYA 州仍为无级区，但 GYA 仍然是牲畜布鲁氏菌病的主要焦点，因为该病在 GYA 的野生麋鹿和野牛中流行。目前没有证据表明布鲁氏菌病已传播到 GYA 之外。
将受精卵注射到牛胚胎中，对自然发生的序列变异进行基因组编辑
基因组编辑通过有针对性地引入天然序列变体，加速遗传增益，为改进当前的牛育种策略提供了机会。这可以通过在修复模板存在的情况下利用编辑器诱导的基因组切割后的同源性定向修复机制来实现。将基因组编辑器引入受精卵并在胚胎中进行编辑的优势在于，活体动物的发育不会受到影响，并且与当代基于胚胎的改良实践保持一致。在我们的研究中，我们调查了引入已知的前黑素体蛋白 17 ( PMEL ) 和催乳素受体 ( PRLR ) 基因的序列变体，并产生完全转化为精确基因型的非嵌合体编辑胚胎的潜力。将 gRNA/Cas9 编辑器注射到牛受精卵中以将 3 bp 缺失变体引入 PMEL 基因，可产生高达 11% 的完全转化胚胎。使用 TALEN 后，转化率提高到 48%，但前提是通过质粒递送。在几种已知 PRLR 序列变体、不同修复模板设计和 DNA、RNA 或核糖核蛋白传递的背景下测试三种 gRNA/Cas9 编辑器，实现了高达 8% 的完全转化率。此外，我们还开发了一种基于活检的非嵌合体胚胎筛选策略，该策略有可能专门生产具有预期精确编辑的非嵌合体动物。
corning®胎牛血清
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通过将核糖核蛋白电穿孔到Zona-Intact牛胚胎
体细胞核转移或细胞质显微注射已用于产生基因组编辑的农场动物。但是，这些方法具有降低其效率的几个缺点。这项研究旨在开发电穿孔条件，使CRISPR/CAS9系统的传递到牛为有效的基因敲除。我们优化了电穿孔条件，以传递CAS9：SGRNA核糖核蛋白到牛合子，而不会损害胚胎发育。较高的电穿孔脉冲电压导致膜渗透性增加。但是，高于15 v/mm的电压降低了胚胎发育潜力。牛胚胎的Zona卵石不是有效的RNP电穿孔的障碍。使用针对最大膜通透性进行优化的参数，同时我们在靶向牛OCT4时达到了高基因编辑的速率，这导致100％评估的胚胎和预期在莫拉拉阶段对胚胎发育的预期停滞的100％蛋白质。总而言之，CAS9：SGRNA核糖核蛋白可以通过电穿孔到Zona-Intact牛合子的能力递送，从而导致有效的基因敲除。
牛布鲁氏疫苗疫苗菌株S19在疫苗接种之前检测到的犊牛
1生物技术和生物多样性亲核 - 西特罗 - 西方网络，Mato Grosso Do Sul，MS Campo Grande，MS，巴西2动物基因工程实验室，国家切割牛研究中心，巴拉西利农业研究中心，embrapa，Campo Grande，MS，Brazil，Brazil，Brazil wittor：G.M.S。Rosinha电子邮件：gracia.rosinha@embrapa.br genet。molres19（3）：GMR18659收到2020年6月5日，2020年8月3日接受于2020年8月27日，doi http://dx.doi.org/10.4238/gmr18659摘要。牛布鲁克洛蛋白是一种人畜共患病，对肉类和牛奶等产品的市场产生了保存的经济影响。巴西是世界上最大的牛群之一，这种疾病是一种象征性的农业和公共卫生康纳。2001年，巴西启动了国家控制和动物布鲁氏菌病和结核病的计划。该程序包括使用光滑和减弱的S19菌株接种3-8个月大的小牛，以及通过血清学检查的井监测。已经有S19排泄和持久性的报道。在这种情况下，这项研究的目的是监测来自接种犊牛的血液样本中S19疫苗菌株的持续性。研究了血清转化以评估疫苗免疫原性。PCR的血液和血清测定在以下位置为：“零天”，疫苗接种后1至15天，每月至12个月，总计10个犊牛中的每一个收集了28个。通过研究，即使在零一天，在疫苗接种之前也检测到疫苗菌株。测序分析证实了S19菌株的存在。血清学测试的结果未显示“零天”样品中的凝集，这意味着免疫反应为阴性。第四天首先在两个样本中检测到免疫反应。一个可以
使用 CRISPR/Cas9 生成 cd209 敲除是获得对牛白血病病毒 (BLV) 具有抗性的牛品种的一种方法
摘要。牛白血病病毒 (BLV) 可引起地方性白血病 - 一种慢性传染病，其背景是病毒嵌入 B 淋巴细胞基因组，导致恶性化、肿瘤细胞侵入器官和形成肿瘤。该病在美国、日本和亚洲很常见。在俄罗斯，高达 30% 的人感染了 BLV。此外，有证据表明某些人群中存在针对 BLV 病毒的抗体，BLV 与人类癌症之间的关系被广泛讨论。所有这些都表明迫切需要研究 BLV 并创造对其具有抗性的品种。解决此问题的方法的开发很复杂，因为感染所通过的受体仍然未知。最近，有人提出病毒使用 CD209 分子穿透动物的淋巴细胞。在本文中，我们提出了一种基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑系统来敲除该基因。我们假设使用所提出的基因组编辑系统获得的动物将能够抵抗牛白血病病毒的感染。
CRISPR 介导的基因组编辑牛胚胎中的嵌合性和脱靶突变评估
未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者（此版本于 2020 年 6 月 4 日发布。；https://doi.org/10.1101/2020.06.04.134759 doi：bioRxiv preprint
牛鼻气管炎病毒性腹泻疫苗
怀孕母牛安全性研究摘要 一项实地研究利用了来自三个不同牛群的 1600 多头牛，以及来自第四个牛群的血清学研究，证明了怀孕母牛和小母牛的安全性。所有参与研究的母牛和小母牛在配种前都接种了 Express ® FP 10 疫苗，这是一种改良活病毒 (MLV) 疫苗，含有传染性牛鼻气管炎 (IBR)、牛病毒性腹泻 (BVD) 1 型、BVD 2 型、副流感病毒 3 (PI3) 和牛呼吸道合胞病毒 (BRSV)，以及犬钩端螺旋体、流感伤寒杆菌、哈德焦钩端螺旋体、出血性黄疸杆菌、波莫纳钩端螺旋体疫苗。大约三分之一的参与研究的牛被分配到三个妊娠期中的每一个。确认妊娠状态后，在指定的妊娠期进行第二次疫苗接种。每个妊娠期组的一半接种 Express ® FP 10，另一半接种 Lepto-5 疫苗。所有登记的牛都经过密切观察直至产犊。记录任何胎儿损失并对胎儿进行全面尸检。两个治疗组的胎儿损失相似。测试疫苗接种组的总胎儿损失率为 1.6%（810 头中的 13 头），对照组为 1.9%（776 头中的 15 头）。没有因 IBR 或 BVD 而诊断的流产或胎儿损失。登记的牛犊在出生后 30 天内受到监测。两个治疗组之间的犊牛健康状况没有差异。
牛鼻气管炎疫苗
怀孕母牛安全性研究摘要 一项实地研究利用了来自三个不同牛群的 1600 多头牛，以及来自第四个牛群的血清学研究，证明了怀孕母牛和小母牛的安全性。所有参与研究的母牛和小母牛在配种前都接种了 Express ® FP 10 疫苗，这是一种改良活病毒 (MLV) 疫苗，含有传染性牛鼻气管炎 (IBR)、牛病毒性腹泻 (BVD) 1 型、BVD 2 型、副流感病毒 3 (PI3) 和牛呼吸道合胞病毒 (BRSV)，以及犬钩端螺旋体、流感伤寒杆菌、哈德焦钩端螺旋体、出血性黄疸杆菌、波莫纳钩端螺旋体疫苗。大约三分之一的参与研究的牛被分配到三个妊娠期中的每一个。确认妊娠状态后，在指定的妊娠期进行第二次疫苗接种。每个妊娠期组的一半接种 Express ® FP 10，另一半接种 Lepto-5 疫苗。所有登记的牛都经过密切观察直至产犊。记录任何胎儿损失并对胎儿进行全面尸检。两个治疗组的胎儿损失相似。测试疫苗接种组的总胎儿损失率为 1.6%（810 头中的 13 头），对照组为 1.9%（776 头中的 15 头）。没有因 IBR 或 BVD 而诊断的流产或胎儿损失。登记的牛犊在出生后 30 天内受到监测。两个治疗组之间的犊牛健康状况没有差异。