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药物治疗同质癌细胞后出现不同的克隆命运
重印和许可信息可在 http://www.nature.com/reprints 上找到。通信和材料请求应发送至 Yogesh Goyal 或 Arjun Raj。yogesh.goyal@northwestern.edu；arjunrajlab@gmail.com。作者贡献 YG 和 AR 构思并设计了这个项目。YG 设计、执行和分析了所有实验，由 ARMP 监督，GTB 和 EIG 协助 YG 进行 FateMap 实验和分析。RHB、PTR、JL 和 MP 协助 YG 进行批量 RNA-seq 实验和分析。MP 根据 YG 和 ARIPD 的意见对修订进行了特定分析，GTB、SSA、EIG、MCD 和 CC 协助 YG 进行组织切片以及自动 RNA FISH 和 DAPI 扫描和分析。YG、BE 和 KK 设计并优化了 PCR“副反应”引物，以从 scRNA-seq 文库中恢复条形码。 RHB、GTB 和 JL 提取了 gDNA 用于 WGS 实验，NB 在 YG 的输入下进行了 WGS 分析，ARAK 协助 YG 设计和实施球体实验。GTB、NJ、JL、JB、MP 和 IAM 协助 YG 准备条形码库并完成计算流程。YG 设计了小鼠条形码实验，DF、HL、YC、GMA 和 MEF 在 YG、MH、AR 和 ATWYG 的输入下进行了小鼠实验，GTB 为小鼠实验准备了条形码库。MC、RHB、RGW、RL、DRI、SBJ、KW、MP、AJL 和 JAW 在 YG 和 ARYG 的输入下进行了人类患者实验和分析，GTB 和 EIG 准备了本研究中使用的所有插图。YG 和 AR 在所有作者的帮助下撰写了手稿。
重新列出了dna de dna delinfócitost
Figura 1: Desenho esquemático dos componentes presentes nas redes extracelulares de DNA em neutrófilos ................................................................................................................................................17 Figura 2: Representação esquemática da via da Netose ........................................................................19 Figura 3: Desenho experimental .................................................................................................................28 Figura 4: Estratégia de análise para avaliar a frequência das populações de CD14+,CD19+, CD4+ e CD8+ após a Marcaçãocomanticorpos antisubpopulaçõescelulares eaquisiçãoporcitometriade fluxo。..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... 38图5：富集淋巴细胞的细胞组成的细胞仪分析。。...................................................................................................................................................39 Figura 6: Avaliação da porcentagem de morte celular por citometria de fluxo ................................... 40 Figure 7: Evaluation, in lymphocyte -enriched crops, by confocal microscopy, of the occurrence of extracellular DNA. 在 ................. 51 Figure 15: SME evaluation of CD4+ and CD8+ T lymphocytes................................... 40 Figure 7: Evaluation, in lymphocyte -enriched crops, by confocal microscopy, of the occurrence of extracellular DNA.在................. 51 Figure 15: SME evaluation of CD4+ and CD8+ T lymphocytes.................. 51 Figure 15: SME evaluation of CD4+ and CD8+ T lymphocytes........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................ .......................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... 46 Figure 11: Extracellular networks blushed by DAPI do not have actin. ............................... 47 Figure 12 Electronic microscopy assessment of scanning the presence of extracellular networks in lymphocyte -enriched crops. .......................................................................... 50 Figure 13 Electronic Microscopy Evaluation of Internal Morphology Transmission of Lymphocytes. ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ......................................................... 52 Figure 16: Evaluation of the percentage of cell death by CD4+ and CD8+ T lymphocyte flow cytometry. .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 54 在........................................... 46 Figure 11: Extracellular networks blushed by DAPI do not have actin................................ 47 Figure 12 Electronic microscopy assessment of scanning the presence of extracellular networks in lymphocyte -enriched crops. .......................................................................... 50 Figure 13 Electronic Microscopy Evaluation of Internal Morphology Transmission of Lymphocytes. ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ......................................................... 52 Figure 16: Evaluation of the percentage of cell death by CD4+ and CD8+ T lymphocyte flow cytometry. .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 54 在............................... 47 Figure 12 Electronic microscopy assessment of scanning the presence of extracellular networks in lymphocyte -enriched crops........................................................................... 50 Figure 13 Electronic Microscopy Evaluation of Internal Morphology Transmission of Lymphocytes. ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... ......................................................... 52 Figure 16: Evaluation of the percentage of cell death by CD4+ and CD8+ T lymphocyte flow cytometry. .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 54 在.......................................................................... 50 Figure 13 Electronic Microscopy Evaluation of Internal Morphology Transmission of Lymphocytes................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................ ........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................ 52 Figure 16: Evaluation of the percentage of cell death by CD4+ and CD8+ T lymphocyte flow cytometry. .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 54 在......................................................... 52 Figure 16: Evaluation of the percentage of cell death by CD4+ and CD8+ T lymphocyte flow cytometry............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................... 54 在.............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 54在.............................................. 55 Figure 18 Evaluation by CD107 + cell frequency flow cytometry 56 Figure 19: Immunofluorescence of CD8 +, Lets and CD107. ........................ 58 Figure 21: Evaluation of cellular composition of patient injuries through histopathological analysis by hematoxylin/eosin coloration. ........................................................................59 Figura 22: Avaliação da composição celular de lesões de pacientes com LTA ..................................60 Figura 23 : Avaliação por microscopia confocal de ETs em lesões de pacientes da forma cutânea da LTA . ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. .............................................................................................. 65.............................................. 55 Figure 18 Evaluation by CD107 + cell frequency flow cytometry 56 Figure 19: Immunofluorescence of CD8 +, Lets and CD107......................... 58 Figure 21: Evaluation of cellular composition of patient injuries through histopathological analysis by hematoxylin/eosin coloration. ........................................................................59 Figura 22: Avaliação da composição celular de lesões de pacientes com LTA ..................................60 Figura 23 : Avaliação por microscopia confocal de ETs em lesões de pacientes da forma cutânea da LTA . ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 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..................................60 Figura 23 : Avaliação por microscopia confocal de ETs em lesões de pacientes da forma cutânea da LTA .............................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 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计算机断层扫描指南和巴西心脏病学会和巴西Radiol学院的心血管磁共振成像
帕拉纳大学联邦大学（CHC-UFPR），库里蒂巴1号，巴西心脏医院（HCOR）1，SP-巴西叙利亚黎巴嫩医院，SP，SP-Brazil Paulo，SP-Brazil Derman Derman Derman Hospiti Paulo（HCFMUSP）Lotus radiologia ltda，6RibeirãoPreto，SP -SP-巴西联邦大学圣保罗大学（UNIFESP），7SãoPaulo，SP-巴西DASA-巴西DASA-美国S/A，A，A，A，S/A，SP -8 S/A，SP -Brazil bazil brazibi brazibi frunderwosibi s/a s/a，pr brazil flun -pr brazil flun -pr brazil flun prin， RJ - Brazil Hospital Antonio Pedro, 11 Niterói, RJ - Brazil Brazil Faculty of Medicine of ABC, 13 Santo André, SP - Brazil Cancer Institute of the State of São Paulo, 14 São Paulo, SP - Brazil University of São Paulo (USP), 15 Ribeirão Preto, SP - Brazil Nc Diagnostic Nucleus, 16 Maringá, PR -巴西欧米茄诊断，17Maringá，PR-巴西PARANá，18Maringá，PR-巴西Procape，19 Recife，20 Puritiba，PR-巴西帕拉纳大学联邦大学（CHC-UFPR），库里蒂巴1号，巴西心脏医院（HCOR）1，SP-巴西叙利亚黎巴嫩医院，SP，SP-Brazil Paulo，SP-Brazil Derman Derman Derman Hospiti Paulo（HCFMUSP）Lotus radiologia ltda，6RibeirãoPreto，SP -SP-巴西联邦大学圣保罗大学（UNIFESP），7SãoPaulo，SP-巴西DASA-巴西DASA-美国S/A，A，A，A，S/A，SP -8 S/A，SP -Brazil bazil brazibi brazibi frunderwosibi s/a s/a，pr brazil flun -pr brazil flun -pr brazil flun prin， RJ - Brazil Hospital Antonio Pedro, 11 Niterói, RJ - Brazil Brazil Faculty of Medicine of ABC, 13 Santo André, SP - Brazil Cancer Institute of the State of São Paulo, 14 São Paulo, SP - Brazil University of São Paulo (USP), 15 Ribeirão Preto, SP - Brazil Nc Diagnostic Nucleus, 16 Maringá, PR -巴西欧米茄诊断，17Maringá，PR-巴西PARANá，18Maringá，PR-巴西Procape，19 Recife，20 Puritiba，PR-巴西
不确定性和空间变异性的量化... - CORE
3 IRSA，意大利罗马 4 国家研究委员会，意大利罗马 在畜牧业中使用抗生素作为生长促进剂导致了越来越令人担忧的抗生素耐药性的发展。为了评估抗生素暴露对土壤微生物种群的长期影响，1999 年在加拿大安大略省伦敦建立了一系列田间试验地，此后每年施用磺胺二甲嘧啶、泰乐菌素和金霉素混合物，浓度（0、0.1、1.0 和 10 mg/kg 土壤）相当于每年施用药物猪粪所产生的浓度。经过十年的年度应用，对这些药物的生物降解潜力和持久性进行了评估。在有药物暴露史的土壤中，磺胺二甲嘧啶和泰乐菌素的残留物（而非金霉素）的去除速度比在未经处理的对照土壤中快得多。在经过历史处理的土壤中，14 C-磺胺二甲嘧啶的残留物迅速彻底地矿化为 14 CO 2，但在未经处理的土壤中则完全没有。从经过历史处理的土壤中获得了能够降解磺胺二甲嘧啶的细菌的富集培养物，但未处理的土壤中没有。在显微镜下评估了活菌的丰度及其在主要细菌系统发育群中的相对分布。使用 DAPI 和 Molecular Probes Live/Dead 染色剂，处理对活菌的丰度没有影响。就 Alpha- 变形菌、Beta- 变形菌、Gamma- 变形菌、低 GC 和高 GC 革兰氏阳性菌的相对丰度而言，不同处理之间没有差异。处理过程中浮霉菌和噬细胞菌-黄杆菌群的丰度存在差异，但这些差异并不表明存在一致的剂量反应。长期处理改变了功能性微生物种群，这是使用污染诱导群落耐受性 (PICT) 测试检测到的，该测试使用单独存在的每种抗生素或混合物进行评估。总体而言，这些结果表明土壤细菌在功能上适应长期接触某些兽用抗生素，特别是导致药物持久性急剧降低。暴露于农业、废水或制药生产废水的基质中抗生素的加速生物降解会减弱抗生素的环境暴露，并且值得在评估环境中抗生素耐药性发展的潜在风险的背景下进行研究。
鉴定人类细胞中复制应力反应的关键因素Louise M.E. Janssen 1，Empar Baltasar Perez 1，Chantal Vaartin
方法在补充了10％FCS，1％谷歌补充剂（Gibco），100 U/ml青霉素和100μg/ml链霉菌素的IMDM（Gibco）中培养了衍生成近单倍型HAP1细胞的细胞培养。siRNA转染是根据制造商的指南使用Rnaimax（Invitrogen）进行的。在这项研究中使用了以下siRNA：Sinon-targetable（Dharmacon），Sipolg2（地平线，TargetPlus，SmartPool），SIMRPL23（Horizon，Targetplus，TargetPlus，Smartpool）。将所有药物（Aphidicolin，Hu，Olaparib，Rad51i（B02），DNA-PKI（NU74441）和寡霉素A）溶解在DMSO中，并以指示浓度使用。细胞使用具有137CS源的γ提取器（最佳疗法）进行γ辐射。生长测定HAP1细胞以1500个细胞/孔的密度将HAP1细胞铺在96孔板中，并被视为5天。5天后，使用100％甲醇固定细胞，并在室温下使用Crystal Violet染色2H。随后，将晶体紫溶解在10％乙酸中，并使用Biotek Epoch Epoch分光光度计在595 nm处测量强度。使用非线性拟合，sigmoidal，4pl，x是log（浓度），将这些测量值用于棱镜中的IC50计算。在9mm玻璃盖上生长免疫荧光细胞，并在室温下以4％甲醛和0.2％Triton X-100固定10分钟。使用了以下抗体：人类抗克雷斯特（Cortex Biochem，CS1058），兔抗PH3SER10（Campro，＃07-081），小鼠抗ERCC6L（PICH）（ABNOVA，ABNOVA，000548421-B01P）。所有初级抗体在4°C的夜间孵育。使用固定缓冲液I（BD生物科学）固定细胞。细胞。二级抗体（分子探针，Invitrogen）和DAPI在室温下孵育2小时。使用延长金（Invitrogen）安装盖玻片。使用具有60倍1.40 Na油目标的Deltavision Deonvolution显微镜（Applied Precision）获取图像。SoftWorx（应用精度），ImageJ，Adobe Photoshop和Illustrator CS6用于处理获得的图像。单倍体插入诱变筛选基因对用APH或HU处理的HAP1细胞的存活至关重要，如先前所述35，使用单倍体插入诱变筛查鉴定。诱变的HAP1细胞是从Brummelkamp实验室获得的。简短地，获得HAP1细胞的诱变如下：在HEK293T细胞中产生了基因陷阱逆转录病毒。每天两次收获逆转录病毒至少三天，并通过离心（使用SW28转子进行2小时，21,000 rpm，4°C，4°C）进行沉淀。在8μg/ml硫酸素硫酸素的存在下，在T175烧瓶中至少连续两天，在8μg/ml硫酸素的存在下，将大约4000万个HAP1细胞通过浓缩基因陷阱病毒的转导而被诱变。在包含10％DMSO和10％FCS的IMDM培养基中冷冻诱变细胞。解冻后，在存在27.5 nm adphidicolin或100μmHu的情况下，将诱变的HAP1细胞转移了10天。传递后，通过胰蛋白酶-EDTA收集细胞，然后进行沉淀。为了最大程度地减少潜在地含有杂合突变的二倍体细胞的混杂，用DAPI染色固定的细胞，以允许使用Astrios Moflo对G1单倍体DNA含量进行分类。将3000万个排序的细胞在56°C下裂解过夜，以使使用DNA迷你试剂盒（QIAGEN）进行基因组DNA分离。插入位点映射基因陷阱插入位点通过LAM-PCR放大，然后进行捕获，ssDNA接头连接和指数放大，并在测序之前使用含有Illumina适配器的引物，如前所述，如前所述35。映射和插入位点的分析以前描述了78。简短地，在对HISEQ 2000或HISEQ 2500（Illumina）进行测序之后，将插入位点映射到人类基因组（H19），允许一个不匹配，并与RefSeq坐标相交，以将插入位点分配给基因。基因区域在相对链上重叠的基因区域没有考虑进行分析，而对于在相同链基因名称上重叠的基因是串联的。对于每种复制和两种药物治疗（APH或HU）基因的必要性都是通过二项式检验确定的。合成致死性。一个基因通过所有Fisher的测试，其p值截止为0.05，效应大小至少为0.12（减法比率wt sense比率 - 复制应力条件感官比率）。
Microsoft Word-Weber等人，人IPSC衍生的细胞移植物通过分子相互作用与中风造成的脑_v3.docx
图1：IPSC衍生的NPC的产生，中风诱导和移植。（a）左：IPSC派生的NPC的生成。右：iPSCS和NPCS（通道7）染色为Nanog和Nestin。比例尺：50UM。（b）左：NPC的神经分化。右：分化后的D26（上排）分化的NPC，对βIII-微管蛋白，S100β和DAPI染色。比例尺：50UM。（c）实验设计的示意图。（d）通过激光多普勒成像（LDI）获得的脑灌注水平。（e）右半球的相对血液灌注与中风诱导后立即记录的基线（急性）和牺牲前（43 dpi）相比。（f）中风梗塞大小的定量。左：相对于勃雷格玛（MM），针对前后（A-P）距离绘制的病变区域。右：两个治疗组的病变体积（mm 3）的箱形图。（g）描绘中风梗塞大小的3-D小鼠脑模型的示意图。比例尺：2mm。（H）使用生物发光成像进行NPC移植后细胞存活的纵向分析。（i）生物发光信号强度表示为35天的SR X10 6的每秒3个光子数量。显示的显着性水平是指天之间的比较。（J）示意图和免疫荧光表示，描绘了移植核（深蓝色）和移植物周围（浅蓝色）。hunu用于可视化移植细胞。比例尺：1mm。比例尺：2mm。（k）脑切片对hunu染色，以前到后验（A-P）顺序排列。（l）量化移植物核心和移植物周围面积。左：相对于前核（MM），绘制在前后（A-P）距离的移植面积（mm 2）。右：移植动物的平均移植体积（mm 3）的箱形图。数据显示为平均分布，其中红点表示平均值。框图表示数据的25％至75％四分位数。箱形图：图中的每个点代表一种动物。线图被绘制为平均值±SEM。使用成对的t检验（基线与中风）或未配对的t检验（车辆与NPC）评估平均差异的显着性。在E-I中，每组n = 11只小鼠；在L，每组n = 9只动物。星号表示显着性： *p <0.05。
常规和青年研究员奖摘要......
背景 免疫系统对癌症疗法的反应可以表明患者在治疗后是否会有积极的结果。了解肿瘤微环境 (TME) 在肿瘤发生和治疗反应过程中如何演变对于开发个性化治疗以改善癌症治疗至关重要。借助强大而全面的多重成像技术，免疫生物标志物可用于检测髓系和淋巴细胞谱系和结构，当与特定的肿瘤生物标志物结合时，可以捕捉各种肿瘤中 TME 内的免疫反应。细胞类型特异性生物标志物的可用性，加上使用多重组织成像进行检测的能力，为免疫细胞群和 TME 中许多细胞类型的空间细胞相互作用提供了前所未有和新颖的见解。Cell DIVETM 多重成像解决方案允许通过迭代染色和染料失活工作流程探测和成像整个单个组织切片上的数十种生物标志物。从本质上讲，Cell DIVE 是一种精确且适应性强的开放式多路复用解决方案，可灵活选择多路复用成像研究中使用的生物标志物组的抗体。Cell Signaling Technology (CST) 拥有广泛的经 IHC 验证的抗体产品组合，可检测 TME 中的关键蛋白质，从而实现组织中的免疫细胞检测和表型分析。CST 提供已验证可用于 Cell DIVE 的现成 (OTS)、可立即发货的抗体偶联物，并提供经 IHC 验证的抗体与荧光团和其他检测试剂的定制偶联物。CST 采用严格的方法进行 IHC 验证，然后在 Cell DIVE 平台上进行验证，以确保成功检测蛋白质。在这里，我们展示了使用多种组织类型的数十种 CST 生物标志物的新面板进行多路复用 Cell DIVE 成像。方法 使用 4 通道加 DAPI 中的各种生物标志物偶联抗体 (Cell Signaling Technology) 对切片进行染色，并使用 Cell DIVE 进行成像。使用 Cell DIVE 工作流程 (Leica Microsystems) 完成多轮染色和成像。结果 开发多路复用面板需要最少的优化，能够识别复杂的细胞类型并揭示它们在肿瘤微环境中的细胞间相互作用。结论 多路复用全切片成像可以深入分析免疫细胞谱系，并为肿瘤微环境中的免疫和肿瘤细胞间相互作用提供新的见解。
DNA复制叉速度在皮质神经发生中充当发动机
a，示意图，显示了MCMBP介导的组装，并将MCM3-7导出到核中，该核能形成新生的MCM，用MCM2作为恢复前复合物，并调节DNA复制叉速度。nls表示核定位信号。b，从顶端到基础位置的MCMBP的时空表达，从E12.5到E15.5。c，蛋白质印迹分析显示了皮质发育产前和产后阶段的MCMCBP表达模式。d，在P3处的CKO小鼠和同窝对照的代表性图像。红色星星指示CKO鼠标。e，（左图）MCMBP +/ +的背视图; EMX1-CRE和MCMBP FL/FL； EMX1-CRE（CKO）P4大脑。（右图）与同窝对照（CTRL）相比，CKO中的皮质区域显着降低。（平均，两尾未配对的t检验，ctrl：n = 7，cko：n = 5）。f，（左图）MCMBP +/ +和CKO P4脑的DAPI染色冠状切片。与同窝对照（CTRL）相比，CKO的皮质板厚度显着降低了皮质板厚度。（平均，两尾未配对的t检验，ctrl：n = 7，cko：n = 5）。g，MCMBP +/ +的P4脑中的层标记物BRN2，TBR1，LHX2和TLE4的免疫染色； EMX1-CRE和CKO。h，与同窝对照组（CTRL）相比，CKO的上层神经元显着降低。（均值，两尾未配对的t检验，BRN2，TBR1，CTRL：n = 8，cko：n = 5，lhx2，tle4，ctrl：n = 4，cko：cko：n = 4）。i，蛋白质印迹分析显示了E15.5，E16.5和P4 Cortex中MCMCBP表达的下调。（平均，两尾未配对的t检验，ctrl：n = 3，cko：n = 3）。J，MCMBP +/ +中的顶祖细胞标记物SOX2和中间祖细胞标记的免疫染色； EMX1-CRE和CKO从E12.5到E16.5。K，SOX2+细胞数分析表明，在E12.5处CTRL和CKO之间没有差异。但是，由于E13.5，Sox2+细胞显着降低并持续到E16.5。(mean, two-tailed unpaired t-test, E12.5, ctrl: n=5, cKO: n=4, E13.5, ctrl: n=4, cKO: n=3, E14.5, ctrl: n=5, cKO: n=5, E15.5, ctrl: n=6, cKO: n=4, E16.5, ctrl: n=6, CKO：n = 4）。l，EOMES+细胞数分析表明，在E12.5和E13.5处CTRL和CKO之间没有差异。但是，Eomes+细胞从E14.5显着降低到E16.5。(mean, two-tailed unpaired t-test, E12.5, ctrl: n=3, cKO: n=3, E13.5, ctrl: n=4, cKO: n=4, E14.5, ctrl: n=4, cKO: n=4, E15.5, ctrl: n=4, cKO: n=3, E16.5, ctrl: n=4, CKO：n = 3）。
熔融电颤技术使半月板结构中的胶原蛋白排列整齐
披露：作者对于本研究没有任何需要披露的信息。简介：半月板对于膝关节的负荷分布、减震和稳定性至关重要。半月板损伤会导致疼痛、活动受限和易患骨关节炎。虽然传统治疗方法不能恢复半月板功能，但生物制造有望生成具有仿生血管化和非血管化区域的半月板结构 1 。然而，这种模拟通常是通过软水凝胶或厚的应力屏蔽纤维实现的。熔融电写 (MEW) 通常用于为具有 µ m 级纤维的水凝胶提供长期机械稳定性 2 。熔融电纤颤 (MF) 使用类似原理，但通过使用牺牲材料，可以实现纳米级纤维 3 。本研究旨在通过融合 MEW 和 MF 来制造区域性半月板结构。 MEW 提供直接的机械稳定性，而 MF 引导胶原蛋白排列以刺激结构 ECM 元素的沉积，从而实现长期的机械稳定性。方法：使用 MEW（聚己内酯 (PCL)）和 MF（PCL/PVAc，比例 = 20:1（MEW:MF））打印菱形（15、30、60 °）和盒子状结构（300 x 300 µm）。通过乙醇/PBS 洗涤溶解 PVAc，并在支架上接种人源半月板祖细胞（hMPC，密度 = 5*10 6 细胞/毫升）。进行压缩和拉伸测试（动态机械分析仪，TA Q800）。用免疫荧光可视化细胞（Dapi、肌动蛋白）和 I 型胶原蛋白引导。为了将脉管系统纳入外部区域，将血管和血管周围细胞（HUVEC：2.5*10 6 细胞/ml 和 MSC：5*10 6 细胞/ml）接种到支架的外部区域。）通过免疫荧光（CD-31 和 a-SMA）研究血管网络的形成。结果部分：MF 纤维引导 MPC（肌动蛋白 +）和 I 型胶原蛋白沉积，而 MPC 聚集在 MEW 微纤维上，I 型胶原蛋白主要沉积在这些聚集体周围（图 1A）。此外，与 MEW PCL 支架或非增强凝胶相比，MF-MEW 的汇聚为半月板结构提供了更高的压缩 E 模量，尤其是随着时间的推移（图 1B）。评估血管分区显示所有结构的总血管长度保持不变，并且与非增强凝胶相比更大（图 1C）。讨论：本研究强调了 MEW 和 MF 融合以引导细胞和 ECM 引导的潜力。MEW/MF 胶原引导可能归因于随着时间的推移更好的基质弹性。此外，本研究展示了生物打印机械能力和半月板构造的第一步，其中包括仿生血管和无血管区。意义/临床意义：这些发现与生成高度多孔但机械稳定的半月板植入物有关，这些植入物可实现胶原对齐，从而实现潜在的长期稳定机械性能。此外，这些结构可用于包括半月板血管和非血管成分的体外研究，以进一步获得半月板再生的基础知识，最终改善患者护理。参考文献：
化疗药物 CX-5461 主要针对 TOP2B，在高危神经母细胞瘤中表现出选择性活性
D. PRISM 筛选的所有细胞系中 CX-5461 的 log 10（倍数变化）值的箱线图。倍数变化 163 表示 PRISM 测定中药物处理细胞与对照细胞的细胞活力差异，通过对每个细胞的唯一条形码进行测序估算。倍数变化越低，药物有效性越高。注意：GDSC 发现数据集中没有横纹肌样细胞系。166 E. 瀑布图显示代表神经母细胞瘤细胞系选择性的汇总分数，该分数针对 PRISM 中筛选的 148 种药物中的每种药物绘制（显示 PRISM 和 GDSC 筛选的药物），其中 y 轴 168 是观察到的分数，x 轴是药物等级。 169 F. 散点图显示 GDSC 中 CX-5461 的 MYCN 表达水平（x 轴）与 log 10 (IC 50 ) 值（y 轴）。这些点根据 TP53 突变状态着色。171 G. 蛋白质印迹显示使用 3 个独立 shRNA 敲低 CHP-134 细胞中的 MYCN 后 MYCN 蛋白水平。β -肌动蛋白用作上样对照。强力霉素，多西环素。173 H. 在使用 CX-5461 处理后，MYCN 敲低后的 CHP-134 细胞活力。用三个独立 MYCN shRNA 之一或阴性对照 shRNA 转导细胞。在含有 2 µg/ml 强力霉素的培养基中孵育 6 天后，用 CX-5461 处理细胞 3 天。用 MTS 测量细胞活力。数据代表3次独立实验的平均值±SD。 * P < 0.05, ** P < 0.01, 177 *** P < 0.001。 178 I. 条形图显示全基因组 CRISPR 筛选中 4 种独立 TP53 引导 RNA 的相对丰度（y 轴），无论是 DMSO 还是 CX-5461 处理的 CHP-134 神经母细胞瘤细胞系。 180 J. CX-5461 处理的细胞系中相对于 DMSO 的 Pre-rRNA 45S 表达（y 轴），通过 RT- 181 qPCR 确定，引物位于 rRNA 转录本的内部转录间隔区 (ITS) 区域。 182 数据代表 3 次独立实验的平均值±SD。 *** P < 0.001；ns，与 DMSO 183 对照无显着差异。 CX-5461 浓度：CHP-134，0.2 µM；IMR-5，0.05 µM；KELLY，2 µM；BE(2)-M17，10 µM；184 SK-NSH，2 µM；SK-N-FI，20 µM。185 K. EU 掺入试验评估整体新生 RNA 转录。CHP-134、IMR-5 和 KELLY 细胞 186 用 CX-5461 处理 24 小时。在细胞固定前 30 分钟（CHP-134、IMR-5）或 1 小时（KELLY）187 加入 1 mM EU。用 EU（红色）标记新生 RNA。用 DAPI（蓝色）染色细胞核。188 CX-5461 浓度：CHP-134，0.2 µM； IMR-5 0.05 µM；KELLY，2 µM。比例尺 = 10 μ m。189 L. 瀑布图显示 29 种神经母细胞瘤细胞系中 GDSC 中所有基因表达与 CX-5461 IC 50 倒数（y 轴）的 Spearman 相关性。y 轴上的值越高，基因的高表达与对 CX-5461 的敏感性越高。RNA-POL I 复合物特有的基因（与 RNA-POL II 不共享的基因）以红色突出显示。193 M。散点图显示 RNA-POL I 复合物 194 的 11 个基因的中位表达水平（x 轴）（其中 GDSC 中可获得基因表达估计值）与 29 个神经母细胞瘤细胞系 195 中的 CX-5461 log 10 (IC 50 )（y 轴）之间的相关性。196