目的:研究二甲基亚硫氧化二甲基磺代(DMSO)作为牛胚胎发生中的冷冻保护剂和溶剂的作用,并特别关注其对早期和晚期发育阶段中基因表达的影响。方法:使用牛胚胎评估DMSO对凋亡和发育过程至关重要的基因表达的影响。基因表达分析以评估促凋亡和抗凋亡标志物的变化,以及对于生长和生存所必需的基因。结果:二甲基亚氧化二甲基以阶段特异性方式影响基因表达。在早期发育过程中,DMSO诱导促凋亡基因,BAX和下调抗凋亡基因BCl2的过表达,表明凋亡活性增加。此外,对生长和生存至关重要的GDF9和IGF1的表达也发生了变化,这表明干扰了关键发育途径。相反,晚期胚胎表现出较高的Bcl2和HspB1水平,这是抗凋亡活性的标志物,表明DMSO在胚胎发生的晚期阶段的调节作用更为复杂。结论:虽然DMSO作为冷冻保护剂有效,但其对基因表达的影响引起了人们对潜在发展后果的关注。这些发现突出了需要进一步研究,以更好地了解DMSO在辅助生殖技术(ART)的背景下的特定影响。关键词:基因表达,牛胚胎,胚胎发育,DMSO,凋亡
在研究2中,将含DMSO的和原始-XV冻结的细胞静脉注射与PBS进行了比较。在原始-XV冻结dmso-free Cryomedium中接种宿主的宿主的存活率和无XV的无DMSO冷冻膜的生存率为80%或更高,宿主没有异常观察。然而,豚鼠中含DMSO的冷冻膜中细胞的存活仅为33%,低于该研究的接受标准。因此,可以确定的是,原XV冻结无DMSO的冷冻膜通过静脉内给予豚鼠和断奶后小鼠被认为是无毒的。
(Å) 旋转 Pristine 52776 ± 0.24 90.00 ± 3.4 540 ± 5.14 旋转 1% DMSO 15098 ± 0.26 4.92 ± 4.8 168 ± 2.10 旋转 3% DMSO 11700 ± 0.13 200.00 ± 0.02 10000 ± 8.1 旋转 5% DMSO 7500 ± 0.03 12.00 ± 1.7 12 ± 0.03 喷雾 Pristine 100000 ± 596 9.00 ± 3.2 810 ± 8.3 喷雾 1% DMSO 29117 ± 754 4.46 ± 4.1 3416 ± 6.47 喷雾 3% DMSO 22788 ± 459 82.00 ± 1.59 9102 ± 4.89 喷雾 5% DMSO 15000 ± 0.03 50.00 ± 0.01 750 ± 0.01
(Å) 旋转 Pristine 52776 ± 0.24 90.00 ± 3.4 540 ± 5.14 旋转 1% DMSO 15098 ± 0.26 4.92 ± 4.8 168 ± 2.10 旋转 3% DMSO 11700 ± 0.13 200.00 ± 0.02 10000 ± 8.1 旋转 5% DMSO 7500 ± 0.03 12.00 ± 1.7 12 ± 0.03 喷雾 Pristine 100000 ± 596 9.00 ± 3.2 810 ± 8.3 喷雾 1% DMSO 29117 ± 754 4.46 ± 4.1 3416 ± 6.47 喷雾 3% DMSO 22788 ± 459 82.00 ± 1.59 9102 ± 4.89 喷雾 5% DMSO 15000 ± 0.03 50.00 ± 0.01 750 ± 0.01
如果将抑制剂化合物溶于水中,则使化合物的溶液比1倍测定缓冲液中的最终浓度高5倍(因为您将在25 µL反应中添加5 µL)。然后,从该溶液到您首选的浓度中的1倍测定缓冲液中进行一系列稀释液。如果将抑制剂化合物溶解在DMSO中,则比您要在DMSO中测试的最高浓度高100倍。然后在1倍测定缓冲液中进行20倍稀释(在此步骤中,化合物浓度比最终浓度高5倍,而DMSO浓度为5%)。然后,从该溶液到您首选的浓度中的5%DMSO中的5%的DMSO稀释。由于将5 µL的化合物溶液添加到25 µL反应中,因此所有反应中DMSO的最终浓度均为1%。3。准备DNA pol theta溶液。
使用该酶的浓度。应在将使用的DMSO的最终浓度下进行酶的初始滴定(请参见上面的注1)。可以使用5-10%(v/v)DMSO(最终浓度),但这将导致活动巨大损失。在存在DMSO的情况下,需要添加更多酶,以允许其抑制作用。例如,如果酶在5%DMSO的存在下仅具有50%的活性,则是两倍(即2U)将需要添加以获得完整的超螺旋。在这种情况下,可能需要添加更多的抑制剂才能获得50%的抑制作用。4)稀释缓冲液含有高浓度的甘油,因此添加了总稀释缓冲液
在多种血液系统恶性肿瘤中的体外细胞毒性测定:a)SU-DHL-4细胞毒性测定。在存在媒介物(DMSO)或TazeMetostat(500nm)的情况下预处理3天;与UTD,CART19,CART79B或CART22(E:t 0.06:1)共同培养 - 预处理后3天(72h)b)CellcyTex长期细胞毒性测定。在多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8266-GFP中,与250 nm tazemetostat或DMSO预处理3天的多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8266-GFP中的总荧光强度3天,然后与抗BCMA-CART-CART-CART细胞或UTD在0.5:1 e:t的情况下共同培养。c)AML细胞系(KG-1和THP-1)杀死测定法。kg-1和Thp-1细胞用5 um taz或DMSO预处理3天;然后将细胞与UTD或CART33共培养3天,在多个E:T比的TAZ/DMSO存在下。
A,BA/F3-ITD细胞和FLT3-ITD AML患者爆炸用Gilteritib和/或AZD1208或AZD1208或DMSO控制,以及C-MYC,MCL-1,P-GSK-3α,α,S9/S21),gsk-3α,gsk-3α,pranial pranial pranial pranial pranial pranial pranial pranial pration和β-3α,β-3α,prationβ和β-免疫印迹。A中的数据以b的形式显示。 c,BA/F3-ITD和MV4-11细胞和FLT3-ITD AML患者爆炸用Gilteritinib和/或AZD1208或DMSO对照进行处理,并具有A中的数据以b的形式显示。c,BA/F3-ITD和MV4-11细胞和FLT3-ITD AML患者爆炸用Gilteritinib和/或AZD1208或DMSO对照进行处理,并具有
迁移实验。(A)用DMSO和1b处理的MDA-MB-231细胞在零点(左图)和24小时后(右图)的划痕区域快照。绿线突出显示划痕造成的间隙。(B)条形图显示经1b处理后,MDA-MB-231细胞与未经处理的细胞对照(DMSO)相比,其划痕愈合百分比。误差线:± SD(n = 3);p ≤ 0.05,*(方差分析)。