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FUT8 指导的 N-糖核心岩藻糖基化受糖结构和蛋白质环境调控
摘要：FUT8 是一种必需的 α -1,6-岩藻糖基转移酶，可使 N-糖链最内层的 GlcNAc 发生岩藻糖基化，这一过程称为核心岩藻糖基化。在体外，FUT8 表现出对双触角复合 N-糖寡糖 (G0) 的底物偏好，但 N-糖链所附着的底层蛋白质/肽的作用仍不清楚。在这里，我们用一系列 N-糖寡糖、N-糖肽和 Asn 连接的寡糖探索了 FUT8 酶。我们发现底层肽在少甘露糖（低甘露糖）和高甘露糖 N-糖链的岩藻糖基化中发挥作用，但对复合型 N-糖链不起作用。使用饱和转移差异 (STD) NMR 光谱，我们证明 FUT8 可识别 G0 N-糖链的所有糖单元和大多数氨基酸残基 (Asn-X-Thr)，这些残基可作为寡糖基转移酶 (OST) 的识别序列。在存在 GDP 的情况下观察到最大的 STD 信号，这表明 FUT8 必须先与 GDP-β-L-岩藻糖 (GDP-Fuc) 结合才能最佳地识别 N-糖链。我们利用 CHO 细胞的糖基化能力基因工程来评估 FUT8 在具有一组特征明确的治疗性 N-糖蛋白的细胞中对高甘露糖和复合型 N-糖链的核心岩藻糖基化。这证实了核心岩藻糖基化主要发生在复合型 N-糖链上，尽管显然只发生在选定的糖基位点上。消除细胞中复合型糖基化能力（KO mgat1）表明，当转化为高甘露糖时，具有复合型 N-糖的糖基位点会失去核心岩藻糖基化。然而有趣的是，对于在有效获取四天线 N-糖方面并不常见的促红细胞生成素，在高甘露糖 N-糖上，三个 N-糖基化位点中有两个获得了岩藻糖基化。对几种蛋白质晶体结构的 N-糖基化位点的检查表明，核心岩藻糖基化主要受 N-糖的可及性和性质的影响，而不是受底层肽序列的性质的影响。这些数据进一步阐明了细胞体外和体内不同的 FUT8 受体底物特异性，揭示了促进核心岩藻糖基化的不同机制。关键词：FUT8、核心岩藻糖基化、N-糖基化、STD NMR、酶动力学、高甘露糖N-聚糖、复合N-聚糖、寡甘露糖型N-聚糖■ 引言
半导体材料的摄影
半导体是在照明下与光发射二极管（LED）或其他光源产生的人造光合成的精细有机分子合成的。[3-5]无论尺度及其介导的反应如何，从非常一般的角度来看，光催化剂都可以通过光诱导的电子转移（PET）从一种试剂流动到另一种试剂，如图1所示。Assuming that a reaction mixture is composed of an n-type semiconductor that has a potential of the valence band ( E VB , V vs reference electrode (RE)) more positive than the oxidation potential of the electron donor ( E (D • + /D), V vs RE) and a potential of the conduction band ( E CB , V vs RE) more negative than the reduction potential of the electron acceptor ( E (A/A • − ），v vs re），相应PET的驱动力（δg0，eV）可以通过公式表示[6,7]
解释了CDK介导的细胞周期控制中的冗余：统一连续性和定量模型
摘要：在真核生物中，Cyclin依赖性激酶（CDKS）是DNA复制和有丝分裂的必需的，并且在整个细胞周期中，依次激活了不同的CDK-循环蛋白复合物。普遍认为，特定的复合物需要遍历G1中细胞周期的承诺，并分别促进S期和有丝分裂。因此，根据一个流行的模型，几十年来一直占据了领域的流行模型，在细胞周期的每个阶段，针对不同底物的独特CDK – cyclin compleces固有的特定座位生成了事件的正确顺序和时间。但是，编码细胞周期蛋白和CDK的基因敲除的结果不支持此模型。通过许多最近的工作验证的替代性“定量”模型表明，CDK活性的总体水平（具有相反的磷酸酶输入）决定了S期和有丝分裂的时间和顺序。我们通过建议将细胞周期分为离散阶段（G0，G1，S，G2和M）的细分被过时且有问题，从而进一步采用了该模型。相反，我们恢复了细胞周期的“连续性”模型，并提出与定量模型的结合更好地定义了理解细胞周期控制的概念框架。
医学 - 抗衰老 - 临床和局限性 -
根据吉尔伯特（Gilbert）关于发育生物学的经典文本，衰老被定义为“……与生存和繁殖所必需的生理功能的时间相关的恶化。衰老的表型变化（影响物种的所有成员）不要与衰老疾病（例如癌症和心脏病（影响个体）混淆” [8]。“衰老”一词是由Hayflick和Moorhead在1961年引入的，仅表示旧[9]。根据国家癌症研究所的说法，衰老的特征是“……衰老的过程。在生物学中，衰老是一个细胞变化并永久停止分裂但不会死亡的过程。随着时间的流逝，大量的旧细胞可以在整个身体的组织中积聚。这些细胞保持活跃，并可能释放可能引起炎症和对附近健康细胞损害的有害物质。衰老可能在癌症和其他疾病的发展中发挥作用。”这也意味着一种非增殖但可行的状态，与G0静止和末端分化不同……对众多压力源的反应，包括暴露于遗传毒性，营养剥夺，缺氧，线粒体功能障碍和癌基因激活，这是由Gorgoulis等人定义的[10]。需要定义其他一些术语，以避免模棱两可的风险。
喹茜素诱导宫颈癌和前列腺癌细胞自噬、凋亡和有丝分裂灾难
癌症是社会面临的严重健康问题，其中宫颈癌和前列腺癌的死亡率很高。原因之一是常规化疗和放疗伴随的耐药现象和副作用。这需要不断开发替代治疗方法并寻找具有抗癌潜力的新化合物。一个例子是喹茜林，它已测试其抗癌潜力。MTT 测试显示喹茜林对 Hela 和 DU145 细胞系具有细胞毒活性。形态分析显示细胞凋亡的典型核变化，这通过膜联蛋白 V/PE 测试、caspases 3/7 的激活和 Bcl-2 蛋白表达的抑制得到证实。证实了线粒体膜通透性增加和 ROS 生成。还观察到细胞迁移受到抑制、G0/G1 期受阻、DNA 受损细胞数量增加以及有丝分裂灾难标志物增加，即微核和多核化，包括存在异常有丝分裂图。同时，观察到自噬增加，用氯喹预孵育细胞会抑制这一过程，这导致喹茜素对测试细胞的细胞毒性增加。喹茜素具有基于细胞凋亡和其他类型细胞死亡的多向作用。
原创文章 Elimusertib ATR 抑制剂对三阴性乳腺癌细胞中 ATR/Chk1 通路的抑制
摘要：目的：癌细胞基因组不稳定性是基于脱氧核糖核酸（DNA）损伤反应和修复机制的异常激活。近年来，针对毛细血管扩张性共济失调和Rad3相关（ATR）抑制的癌症治疗引起了人们的关注。在本研究中，我们首次旨在确定ATR抑制剂Elimusertib对三阴性乳腺癌（TNBC）的抗癌作用。方法：通过水溶性四唑1（WST-1）、膜联蛋白V、细胞周期和吖啶橙/碘化丙啶染色分析Elimusertib的细胞毒性和凋亡作用。此外，还评估了Elimusertib诱导的线粒体损伤和细胞内活性氧。此外，通过蛋白质印迹分析分析了ATR-检查点激酶1（Chk1）DNA损伤反应的抑制和凋亡的诱导。结果：我们的初步研究结果表明，Elimusertib 显著降低了 MDA-MB-231 TNBC 细胞的存活率，并对 MCF-10A 细胞产生毒性（P<0.05）。Elimusertib 通过间隙期 (G0)/生长 1 期 (G1) 积累、caspase-3 活性和线粒体损伤导致细胞凋亡。此外，Elimusertib 显著抑制了基于 ATR 的 DNA 损伤反应和介导的细胞周期检查点。结论：我们的研究结果表明 Elimusertib 抑制了 TNBC 细胞中基于 ATR 的 Chk1 通路。因此，Elimusertib 抑制 ATR 可能是一种潜在的治疗策略，尤其是在肿瘤蛋白 p53 (p53) 突变型 TNBC 患者中。
利用 CRISPR/Cas9 系统在多个优良品种中产生单性结实番茄植株
Micro-Tom 芽的突变率为 100%，而 AC 芽的突变率仅为 42.9%。与 Micro-Tom 不同，AC 编辑植物未报告产生单性结实果实（Tran 等人，2021 年；Ueta 等人，2017 年）。表 1 和表 2 表明，在测试的 ET 系群体中，转化和编辑效率都存在很大差异。虽然其中一些系具有相同的亲本来源，但它们的外来构建体采用潜力水平并不相同。值得注意的是，在 ET5 和 ET8 等优良系中，使用 pANT1ox 质粒和 pEG-IAA9 的转化效率密切相关（表 1 和补充表 1）。ET5 平均每个外植体呈现 16.88 个紫色斑点，21% 的 pEG-IAA9 转化植物具有 T-DNA 插入。ET8 中的这些数字分别为 14.32 和 33.33%。这两个品系对外来基因转化反应良好，是用作遗传改造技术材料的最佳 F8 ET 品系。在这两个品系中，ET5 表现出更高的编辑效率，表现为 G0 群体中单叶和无籽植物的数量（表 1）。然而，ET8 的高生产力和存活率有利于该品系保持和转移编辑的等位基因到下一代（表 3）。对于商业基因组编辑番茄的产生，ET8 是最佳推荐选择，它提供了高产量、高转化效率和低果实开裂率等有益特性（Nguyen 等人，2023 年）。
高氧对胎儿皮质神经干细胞细胞周期阶段长度有持续时间依赖性的影响
胎儿神经干细胞 (NSC) 在生理上存在于低氧条件下（1% – 5% 的组织 pO 2 ），但通常被转移并维持在 21% pO 2 的大气氧水平（高氧）下以进行体外研究。这些改变的氧条件会导致 NSC 发生适应性变化，从而使体外数据的解释变得复杂。然而，潜在的适应动力学在很大程度上仍然是个谜。在这里，我们研究了短期高氧效应（3% pO 2 中 5 天，随后在 21% pO 2 中 2 天），并与持续高氧效应（21% pO 2 中 7 天）和生理氧对照（3% pO 2 中 7 天）进行了比较。我们利用皮质 NSC 通过流式细胞术和累积 BrdU 掺入测定法来分析细胞周期阶段。在持续高氧条件下培养时，NSC 的细胞增殖严重减少，但短期高氧后没有变化。随后通过流式细胞术进行的细胞周期分析表明，在持续和短期高氧条件下，NSC 明显从 G0/G1 期转向 S 期或 G2/M 期。然而，虽然短期高氧显著缩短了细胞周期，但在持续高氧条件下，细胞周期却增加了。总之，我们的结果证明了生理氧对体外扩增 NSC 的有益作用，并揭示了短期高氧与持续高氧相比的不同作用。
去泛素化酶抑制剂PR-的抗肿瘤作用...
摘要：软骨肉瘤是一种治疗选择有限的难治性癌症，治疗方法缺乏重大进展。然而，PR-619 是一种新型去泛素化酶抑制剂，已证明在各种恶性肿瘤中具有抗肿瘤作用。本研究旨在研究 PR-619 对软骨肉瘤的体内和体外影响。使用了两种人软骨肉瘤细胞系 SW11353 和 JJ012。使用 MTT 测定法评估细胞活力，而流式细胞术可以检测细胞凋亡和细胞周期进程。进行了蛋白质印迹分析以评估细胞凋亡、细胞应激和内质网 (ER) 应激。此外，使用异种移植小鼠模型检查了 PR-619 的体内抗肿瘤作用。结果表明，PR-619 通过激活 caspase、PARP 切割和 p21 诱导细胞毒性、细胞凋亡和细胞周期停滞在 G0/G1 期。此外，PR-619 通过激活 IRE1、GRP78、caspase-4、CHOP 和其他细胞应激反应（包括 JNK 激活）增加了多泛素化蛋白的积累和 ER 应激。体内分析表明，PR-619 在异种移植小鼠模型中有效抑制肿瘤生长，且毒性极小。这些发现为 PR-619 在人类软骨肉瘤中的抗肿瘤作用和诱导细胞和 ER 应激提供了证据，表明其有可能成为人类软骨肉瘤的一种新治疗策略。
鉴定大脑中新的睫状信号通路和对神经系统疾病的见解
两种DNA修复途径，非同源末端连接（NHEJ）和替代末端连接（A-EJ），参与V（d）J重组和染色体易位。先前的研究报告了染色体易位的不同修复机制，NHEJ主要参与小鼠的人类和A-EJ。nhej取决于DNA-PKC，这是突触形成和下游成分激活的关键伴侣。虽然DNA-PKC抑制作用促进了具有小鼠微论的染色体易位，但其在人类中的同义效应尚不清楚。我们发现人类细胞中的部分DNA-PKC抑制会导致易位增加，并持续参与抑制的NHEJ。相比之下，完全增加了微学介导的末端连接（MMEJ），因此完全增加了DNA-PKC，从而弥合了人与小鼠之间的两种不同的易位机制。与先前关于KU70缺失的研究类似，G1/G0相小鼠祖细胞B细胞系中的DNA-PKCS缺失显着损害V（d）J重组，并由于编码失调和信号终端连接而产生了更高的易位速率。遗传DNA-PKC抑制完全抑制了NHEJ的参与，其表型上的修复类似于KU70缺乏的A-EJ。相比之下，我们发现在产生与Lig4缺乏相关的近乎异常的MMEJ时，DNA-PKCS所需的DNA-PKC。我们的研究强调了DNA-PKC抑制非法染色体重排，同时也有助于这两种物种的MMEJ。