o 第 4 类 – 上游运输和配送。HDR 的业务活动不产生任何重大排放。 o 第 5 类 – 运营过程中产生的废弃物 – HDR 过去没有计算过这些排放量。HDR 将从 2023 年开始估算高水平相关排放量。HDR 将从 2024 年开始根据办公室特定数据计算相关排放量。 o 第 9 类 – 下游运输和配送。此类别与 HDR 的业务活动无关。
图 2:在 K-562 细胞中通过电穿孔优化 HDR 介导的报告基因敲入。A. LMNA -EGFP 供体质粒单独电穿孔,浓度增加,显示非特异性 EGFP 表达量较低。Cas9 蛋白:crRNA:tracrRNA 电穿孔,LMNA -EGFP 供体质粒浓度增加,显示 EGFP 表达相关增加。B. 放大倍数增加后,HDR 介导的敲入样本中 EGFP 表达的定位与 LMNA 的预期一致,位于细胞核中,并与 Hoechst 染色共定位。C. HDR 介导的敲入细胞群的流式细胞术分析显示,随着 DNA 供体质粒数量的增加,EGFP 表达增加高达 32%。单独 DNA 供体质粒对照的相应分析显示所有剂量的 EGFP 表达均低于 0.5%(未显示数据)。
预印本(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。该版本的版权持有人于2023年12月13日发布。 https://doi.org/10.1101/2023.12.13.571396 doi:Biorxiv Preprint
多年来,专业摄像机中的图像传感器能够捕捉比 Rec. 709 更多的色彩和更高的动态范围。这些摄像机使用内部图像处理将输出色域和动态范围限制在广播行业标准 Rec. 709 范围内。最近,许多专业摄像机都采用了“log”、RAW 和 HLG 录制格式,这些格式既可以包含比 Rec. 709 色域更宽的色彩范围,又可以包含比 SDR 显示器上显示的更高的动态范围。随着 iPhone 12 及更高版本以杜比视界录制,HDR 捕捉不再仅限于专业摄像机的领域。
含有由 CRISPR/Cas9 系统产生的双链断裂 (DSB) 的 DNA 可以通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 途径进行修复 (1,2,3)。NHEJ 修复途径在切割位点引入非特异性插入或缺失,而 HDR 途径允许在 DSB 位点进行精确的基因编辑 (1,2,3)。靶向特异性 HDR 质粒为 DSB 提供 DNA 修复模板,当与 CRISPR/Cas9 KO 质粒共转染时,能够在发生 Cas9 诱导的 DNA 切割的位置插入特定的选择标记 (1,2)。HDR 质粒可以整合红色荧光蛋白 (RFP) 基因以直观地确认转染,并整合抗生素抗性基因 (嘌呤霉素) 以选择含有成功 CRISPR/Cas9 双链断裂的细胞。嘌呤霉素抗性和 RFP 编码基因两侧是两个 LoxP 位点,这些位点可被 Cre 载体识别,之后可利用该位点从基因组 DNA 中去除这些选择标记 (4,5)。
CRISPR 介导的基因组编辑已成为生物性状遗传修饰的有力工具。然而,开发基于同源定向 DNA 修复 (HDR) 的高效、位点特异性基因敲入系统仍然是植物面临的重大挑战,尤其是在杨树等木本植物中。本文表明,同时抑制非同源末端连接 (NHEJ) 重组辅因子 XRCC4 和过度表达 HDR 增强因子 CtIP 和 MRE11 可以提高基因敲入的 HDR 效率。使用这种方法,BleoR 基因被整合到 MKK2 MAP 激酶基因的 3' 端以产生 BleoR-MKK2 融合蛋白。根据 TaqMan 实时 PCR 评估的完全编辑核苷酸,与没有 HDR 增强或 NHEJ 沉默相比,当使用 XRCC4 沉默结合 CtIP 和 MRE11 过度表达时,HDR 介导的敲入效率高达 48%。此外,HDR 增强子过表达和 NHEJ 抑制的组合还提高了基因组靶向效率,使 CRISPR 诱导的插入和缺失 (InDels) 减少了 7 倍,从而对杨树中基于 MKK2 的盐胁迫反应没有功能性影响。因此,这种方法不仅适用于杨树和植物或农作物,也适用于哺乳动物,以提高 CRISPR 介导的基因敲入效率。
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可证(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。
CRISPR 介导的基因组编辑已成为生物性状遗传修饰的有力工具。然而,开发基于同源定向 DNA 修复 (HDR) 的高效、位点特异性基因敲入系统仍然是植物面临的重大挑战,尤其是在杨树等木本植物中。本文表明,同时抑制非同源末端连接 (NHEJ) 重组辅因子 XRCC4 和过度表达 HDR 增强因子 CtIP 和 MRE11 可以提高基因敲入的 HDR 效率。使用这种方法,BleoR 基因被整合到 MKK2 MAP 激酶基因的 3' 端以产生 BleoR-MKK2 融合蛋白。根据 TaqMan 实时 PCR 评估的完全编辑核苷酸,与没有 HDR 增强或 NHEJ 沉默相比,当使用 XRCC4 沉默结合 CtIP 和 MRE11 过度表达时,HDR 介导的敲入效率高达 48%。此外,HDR 增强子过表达和 NHEJ 抑制的组合还提高了基因组靶向效率,使 CRISPR 诱导的插入和缺失 (InDels) 减少了 7 倍,从而对杨树中基于 MKK2 的盐胁迫反应没有功能性影响。因此,这种方法不仅适用于杨树和植物或农作物,也适用于哺乳动物,以提高 CRISPR 介导的基因敲入效率。
HOT nAILES 旨在支持多个传统数字模块化无线电 (DMR) 模拟信道以及下一代 DMR 数字接口,提供更高性能、更小尺寸、重量和功率 (SWaP) 外形尺寸以及可扩展的频率覆盖范围,从 1.5 MHz 到 3 GHz。它还能够在不同的动态功率水平以及由于长期可靠性/可支持性/可维护性、老化和温度而变化的情况下保持高性能,同时支持跳频。HOT nAILES 提供的低热足迹和热密度将因较低的结温而显着提高可靠性。HOT nAILES 的线路可更换、基于单元的架构可实现可扩展性、可复制性和低维护成本 未来
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