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IDT_改进的 CRISPR-Cas9 HDR 方法，实现高效、高保真基因组编辑应用说明 (RUO21-0258_001 01/22)
gRNA（向导 RNA）：Cas9 使用的 CRISPR RNA（crRNA）包含 20 个碱基的原间隔元件和与 tracrRNA 互补的额外核苷酸。反式激活 CRISPR RNA（tracrRNA）与 crRNA 的互补区域杂交。组合的 crRNA 和 tracrRNA 与 Cas9 内切酶相互作用，激活编辑复合物以在目标基因组内的特定位点产生双链断裂。这 2 种天然 RNA 分子可以合成生成，用于基因组编辑实验。IDT 科学家已经修改了这些 RNA 的长度和组成，以优化基因组编辑效率，尤其是在与 CRISPR 核酸酶预先复合并以 RNP 形式递送到细胞时。或者，可以使用单向导 RNA（sgRNA）代替 crRNA 和 tracrRNA 的组合。sgRNA 包含通过发夹状环序列连接的 crRNA 和 tracrRNA 序列。向导 RNA（gRNA）可以是 crRNA：tracrRNA 复合物，也可以只是 sgRNA。
Alt-R™ HDR ENHANCER V2 提高效率... - NET
Alt-R HDR Enhancer V2 可提高脂质转染细胞的 HDR 效率。使用 0.75 μL Lipofectamine ® RNAiMAX ® 试剂（赛默飞世尔科技）将稳定表达 Cas9 的 HEK-293 细胞反向转染 gRNA 复合物（Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA 与 tracrRNA 复合），靶向人类基因组中的 SAA1、STAT3、SERPINC1 和 HPRT 38087（最终浓度 = 10 nM）和设计用于在 Cas9 裂解位点插入六个碱基的 Alt-R HDR 供体块（最终浓度 = 3 nM）。脂质转染后，立即将细胞培养在含有无处理（深蓝色）、DMSO（载体对照，浅蓝色）、30 μM Alt-R HDR 增强剂（深灰色）、0.5 μM Alt-R HDR 增强剂 V2（浅灰色）或 1 μM Alt-R HDR 增强剂 V2（绿色）的培养基中。24 小时后，移除旧培养基，并用不含 DMSO、Alt-R HDR 增强剂或 Alt-R HDR 增强剂 V2 的新鲜细胞培养基替换。脂质转染 48 小时后从每种样本类型中分离基因组 DNA，并通过 PCR 扩增目标编辑位点。使用 rhAmpSeq ™ CRISPR 分析系统对效率进行量化，该系统使用 NGS 分析来评估目标位置的 HDR 百分比。使用 rhAmpSeq CRISPR 分析工具分析了 NGS 读数。使用最终浓度为 1 μM 的 Alt-R HDR 增强剂 V2 实现了最高的 HDR。
系统分析CRISPR/Cas9技术中提高同源直接修复（HDR）效率的因素
事实证明，CRISPR/Cas9 细菌系统是多种生物体中基因操作的有力工具，但同源直接修复 (HDR) 序列替换的效率远低于随机插入/缺失创建。许多研究集中于使用双 sgRNA、细胞同步化循环和合理设计的单链寡 DNA 核苷酸 (ssODN) 递送来提高 HDR 效率。在本研究中，我们评估了这三种方法在提高 HDR 效率方面的协同作用。我们选择了 TNF α 基因 (NM_000594) 进行测试，因为它在各种生物过程和疾病中起着至关重要的作用。我们的结果首次展示了使用两个具有不对称供体设计和三重转染事件如何显著提高 HDR 效率，从不可检测的 HDR 事件提高到 39% 的 HDR 效率，并提供了一种促进 CRISPR/Cas9 介导的人类基因组编辑的新策略。此外，我们证明了可以使用 CRISPR/Cas9 方法编辑 TNF α 基因座，这是一个在未来安全地纠正每位患者的特定突变的机会。
通过1 NHEJ缺乏而不是Populus中的HDR因子过表达高效的CRIS介导的同源重组2 3 Ali Movahedi1§
Highly efficient CRISPR-mediated homologous recombination via 1 NHEJ deficiency rather than HDR factors overexpression in Populus 2 3 Ali Movahedi 1§* , Hui Wei 1§ , Zhong-Hua Chen 2 , Weibo Sun 1 , Jiaxin Zhang 3 , Dawei Li 1 , Liming 4 Yang 1* , and Qiang Zhuge 1* 5 6 1 College of Biology and the Environment,中国南部7号的可持续林业共同创新中心，森林遗传学与生物技术主要实验室，教育部，南京林业大学8号，南京210037，210037，9 2霍克斯伯里环境学院，霍克斯伯里环境学院，西悉尼悉尼大学，10佩里斯大学，新南威尔士州佩里斯2751，新南威尔士州2751，澳大利亚11 3 n and NANJ and nanj andial andical Instriciting andical Sciention and nan Junan Junlan andical Instriciting Synormitics Squartring Synormitics Squarnion，NAN NAN NAN NAN NAN SACEITIC 210046，中国13 14 15 *应将信件发送给Qiang Zhuge，Ali Movahedi和Liming Yang：生物学与环境学院16，南部17中国可持续林业中心共同创新中心，中国森林遗传学与生物技术的主要实验室，教育部，Nanjing 18 Forestry University，Nanjing 18 Forestry University，Nanjing University，Nanjing University，Nanjing 210037。电子邮件：qzhuge@njfu.edu.cn; 19 ali_movahedi@njfu.edu.cn; yangliming@njfu.edu.cn;传真：+86 25 85428701 20 21§这些作者同样作为第一作者22 23 22 23 24跑步标题：高效通过XRCC4 Poplar中的XRCC4缺乏效率25 26 26 27 27 27 27 28 29 28 29 30 31 32 33 33 34 35 33 35 36 37 37 38 39 39 38 39 38 39 39 38 39 38 39 38 39 38 39电子邮件：qzhuge@njfu.edu.cn; 19 ali_movahedi@njfu.edu.cn; yangliming@njfu.edu.cn;传真：+86 25 85428701 20 21§这些作者同样作为第一作者22 23 22 23 24跑步标题：高效通过XRCC4 Poplar中的XRCC4缺乏效率25 26 26 27 27 27 27 28 29 28 29 30 31 32 33 33 34 35 33 35 36 37 37 38 39 39 38 39 38 39 39 38 39 38 39 38 39 38 39
![[撤回]英国疫苗工作组2020成就和未来战略](/simg/5/5ac143b1947931c12079e253e324faf5a07f664e.webp)
[撤回]英国疫苗工作组2020成就和未来战略
在凯特·宾厄姆（Kate Bingham）的领导下仅六个月，VTF取得了巨大进展。英国已经命令4000万剂剂量的第一种疫苗，以表现出极大的临床结果，即辉瑞/Biontech疫苗。第三阶段的功效数据显示，这种疫苗在老年人中有效94％，这是保护的关键人群。这是VTF于2020年7月宣布的第一项疫苗供应协议，也是辉瑞/Biontech签署的第一笔交易。通过VTF的决定性和快速工作，英国是第一个从辉瑞/Biontech预订该疫苗的国家，预计总共获得4000万剂剂量，足以接种人口的三分之一，而大部分剂量在明年的前半年中预计。在英国药品和健康产品监管机构（MHRA）最近批准后，该疫苗的部署现在将于12月初在英国首次开始。
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3.1 主要特性 ................................................................................................................................................10 3.2 F LIGHT 控制器 ..............................................................................................................................................10 3.2.1 组件 ................................................................................................................................................10 3.2.2 传感器性能 ........................................................................................................................................10 3.2.3 估算算法 ........................................................................................................................................11 3.2.4 控制回路 ........................................................................................................................................11 3.3 F LIGHT 模式 .............................................................................................................................................12 3.3.1 精确悬停 .............................................................................................................................................12 3.3.2 精确返航 (RTH) .............................................................................................................................12 3.3.3 智能 RTH .............................................................................................................................................12 3.3.4 自动起飞 .............................................................................................................................................12 3.3.5 手动起飞 ................................................................................................................................................12 3.3.6 低空飞行 ................................................................................................................................................13 3.3.7 自动着陆 ................................................................................................................................................13 3.4 飞行模式 ................................................................................................................................................13 3.4.1 手动 ................................................................................................................................................13 3.4.2 自动 ................................................................................................................................................13
Combi‐CRISPR：NHEJ 和 HDR 的结合提供了……
摘要 CRISPR-Cas9 广泛用于小鼠和大鼠的基因靶向。非同源末端连接 (NHEJ) 修复途径在受精卵中占主导地位，可有效诱导插入或缺失 (indel) 突变，从而在靶位点敲除基因，而通过同源定向修复 (HDR) 的基因敲入 (KI) 则难以产生。在本研究中，我们使用双链 DNA (dsDNA) 供体模板与 Cas9 和两个单向导 RNA，一个用于切割目标基因组序列，另一个用于切割 dsDNA 质粒的侧翼基因组区域和一个同源臂，在 G0 幼崽中产生 20-33% 的 KI 效率。 G0 KI 小鼠在一个靶位点携带 NHEJ 依赖的插入/缺失突变，该突变设计在内含子区域，而在另一个外显子位点携带 HDR 依赖的各种供体盒（例如 EGFP 、mCherry 、Cre 和感兴趣的基因）的精确 KI，这些供体盒的长度从 1 到 5 kbp 不等。这些发现表明，这种由 CRISPR-Cas9 系统介导的 NHEJ 和 HDR 组合方法有助于在小鼠和大鼠中高效、精确地 KI 质粒 DNA 盒。
检测 HDR 后的有害靶向效应 - ...
CRISPR 基因组编辑是一种很有前途的转化研究工具，但可能会导致不良的编辑结果，既可能在编辑的位点上命中目标，也可能在其他基因组位点上脱靶。在这里，我们研究了通过同源定向修复 (HDR) 和使用非同源末端连接 (NHEJ) 的基因编辑插入疾病相关突变后，人类干细胞中有害的靶向效应 (OnTE) 的发生情况。我们在多达 40% 的编辑克隆中发现了逃避标准质量控制的大型单等位基因基因组缺失和杂合性缺失。为了可靠地检测此类事件，我们描述了简单、低成本且广泛适用的定量基因分型 PCR (qgPCR) 和基于单核苷酸多态性 (SNP) 基因分型的工具，并建议将它们用作编辑后的额外质量控制。这将有助于确保编辑位点的完整性并提高 CRISPR 编辑的可靠性。
EBU Tech 3375 - 通过 3G-SDI 接口进行 HDR 和宽色域视频的信号传输和传输
3. 10 位透明基础设施 强烈建议实施者/广播者确保辅助数据和信号（见表 1）在整个制作链中不被改变。此外，制作链中的设备应适当处理信号。否则，必须手动验证每个制作步骤（正确设置色彩空间、色彩矩阵、传递函数）。
神经传感器：利用可编程传感器学习 HDR 成像和视频压缩感知的像素曝光
摘要——相机传感器依靠全局或滚动快门功能来曝光图像。这种固定功能方法严重限制了传感器捕捉高动态范围 (HDR) 场景和解决高速动态的能力。空间变化像素曝光已被引入作为一种强大的计算摄影方法，用于光学编码传感器上的辐照度并通过计算恢复场景的附加信息，但现有方法依赖于启发式编码方案和庞大的空间光调制器来光学实现这些曝光功能。在这里，我们引入神经传感器作为一种方法，以端到端的方式与可微分图像处理方法（例如神经网络）联合优化每像素快门功能。此外，我们展示了如何利用新兴的可编程和可重新配置的传感器处理器直接在传感器上实现优化的曝光功能。我们的系统考虑了传感器的特定限制来优化物理上可行的光学代码，我们在模拟和真实场景实验中评估了其快照 HDR 和高速压缩成像的性能。