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技术研究所
新药开发在此过程中很难耗时，涉及临床前测试，研究新药应用，临床试验和FDA批准的昂贵。脂质体和纽约人是纳米植物，已被广泛用作药物载体。这些囊泡系统中药物的包封具有多种优势，包括修饰亲脂性和亲水性，毒性降低，循环时间稳定性的增加以及药物吸收。通过使AA WICVCDTH羟基丙烷-β-螺旋可糖果蛋白DAACD络合AA构成AA的硫酸（AA）纳米含量及其衍生物的构成，并通过使用药物剂的Fischer反应来改进AA，以将二乙酯（DA）改进到二乙酯（DA）。AA AACD和DA与L-α-二硫硫酰磷脂酰胆碱/胆固醇和Tween 61/胆固醇的组成中掺入脂质体和噪声中。研究了与vincristine相比，使用MTT分析（HELA，KB和B 16 F 10）中的MTT分析，在纳米含量中使用MTT测定法。AACD与HELA，KB和B 16 F 10 AA中的AA相比，其效力最高，而比游离AA更有效，而不是Vincristine的脂质体。被捕获到双层囊泡时，DA和AACD比AA在杀死癌细胞方面更有效。AACD被夹杂在脂质体中，在HeLa细胞系中具有最高的抗增殖活性，其IC 50的效力比Vincristine和AA高。普通脂质体和新生组没有生长抑制作用。da证明了IC 50在Kb细胞系中的效力低了，而在Niosomes中的B 16 F 10 AACD中，IC 50的效力低于长文cristine。这项研究表明，通过衍生化和络合物以及双层囊泡的捕获可以增强其治疗功效。然而，与顺铂相比，使用SRB测定法在小鼠表皮细胞系（JB 6，正常细胞系）上掺入了小鼠表皮细胞系（JB 6，正常细胞系）上的纳米蛋白配方的细胞毒性。AA掺入的纳米孢子已证明在癌细胞系中具有抗增殖作用。此外，在纳米囊泡中掺入时，AA及其衍生物的安全性未显示对正常细胞系的毒性。
载药治疗诊断组合包被立方体可增强针对癌细胞的靶向性和疗效
摘要 立方体是纳米生物工程的产物，是一种自结构脂质纳米粒子，其作用类似于载药的诊断探针。本文，我们描述了一种制备组合载药立方体的简单方法，经原理验证，该立方体具有治疗癌细胞的作用以及诊断能力。抗癌药物顺铂和紫杉醇组合装载在立方体中。立方体上涂有一层聚-Ɛ-赖氨酸，这有助于避免药物最初的爆发性释放，并允许缓慢和持续释放以获得更好的疗效。用透射电子显微镜对立方体进行成像，并通过差示扫描量热法和X射线衍射图研究在体外分析其分散性。显微图像描绘了球形多角结构，很容易区分。分析表明，药物均匀分散在整个立方体中。通过 zeta 电位测量、体外释放和包封率研究进行了进一步表征。体外研究表明，立方体涂层最初成功地减少了药物的爆发性释放，并证实了随着时间推移，药物释放缓慢而持续。使用人肝癌 HepG2 细胞系评估了涂层、未涂层和空白立方体的细胞毒性比较，发现这些制剂完全无毒，与空白制剂相似。通过阻抗测量和荧光成像证实了立方体对 HeLa 细胞的治疗效果。此外，用涂层组合立方体处理的细胞阻抗降低证明了 HeLa 细胞的损伤，这通过荧光显微镜得到证实。
使用 24 孔板脂质体转染技术对含有 RNP 的永生化细胞系进行 CRISPR 编辑
本方案描述了如何将由纯化的 Cas9 核酸酶与化学修饰的合成单向导 RNA (sgRNA) 组成的核糖核蛋白 (RNP) 复合物递送至标准永生化细胞系（粘附或悬浮）。尽管针对 HEK293（人胚胎肾 293 细胞）进行了优化，但本方案可能适用于许多其他细胞系（例如 A549、U2OS、HeLa、CHO、MCF-7）。RNP 递送是使用 Lipofectamine™ CRISPRMAX™ 转染试剂完成的。化学修饰的 sgRNA 旨在抵抗核酸外切酶的降解并防止可能导致细胞死亡的先天性细胞内免疫级联。本方案可用于转染 EditCo 的多向导基因敲除试剂盒。
使用TMTPRO 32-PLEX试剂增强蛋白质定量和样品吞吐量，并从热科学轨道上的延伸支持特征延伸
使用Proteome Discoverer 3.2软件和Sequest®HT搜索算法进行数据分析。肽的修饰包括用于HELA的氨基甲基甲基化（C）的动态修饰，用于蛋白质混合物的羧甲基化（C），TMTPRO标签（N-末端，K）和MET氧化。FDR阈值在渗透剂节点中设置为1％，以识别肽和蛋白质鉴定的高置信度。在报告基因离子量化器节点中指定了11 ppm的记者离子峰积分耐受性，并使用新的集成的报告频道控制通道范围的范围范围范围进行了剥离和非剥离的控制通道，对剥离和非置换通道组的归一化进行了归一化。
天蓝色影像系统
图 5. 使用 AzureRed 和化学发光 Western Blot 同时检测总蛋白。通过 SDS-PAGE 分离 2 倍连续稀释的 HeLa 裂解物并转移到 PVDF 膜上。半干转移完成后，用 AzureRed 总蛋白染料对膜进行染色。然后用 Azure 化学发光印迹封闭缓冲液封闭印迹，然后与小鼠抗 GAPDH 孵育。用 Azure 印迹洗涤缓冲液洗涤印迹 3 次，然后用 Azure 山羊抗小鼠 HRP 二抗孵育。用 Radiance ECL 底物检测化学发光信号。底物孵育后，对印迹进行成像以产生总蛋白染色和 GAPDH 蛋白的叠加。AzureRed 显示为绿色，GAPDH 显示为灰色。
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CRISPR/CAS9基因组编辑用于破坏HeLa细胞中的CXCR4基因座。CXCR4编码与CXCL12趋化因子相互作用的细胞表面趋化因子受体，并在免疫系统中起重要作用。在本实验中，使用指南IT SGRNA筛选试剂盒测试了针对CXCR4基因座的四个不同的SGRNA。简要地，使用指南SGRNA在体外转录试剂盒中合成了针对CXCR4基因的SGRNA。一个包含SGRNA靶序列的PCR片段与重组Cas9蛋白和每个SGRNA混合。通过琼脂糖凝胶电泳分析裂解反应。光密度法（Cong等，2013）表明SGRNA3的裂解效率最低（图2）。
鉴定潜在的治疗靶标，以发展疾病管理中的新治疗策略
通过在1993年发现MicroRNA（miRNA），Victor Ambros1及其来自哈佛大学的群体为实现了研究领域的新里程碑做出了贡献。lin-4，其中包括与秀丽隐杆线虫的LIN-14 mRNA的3'未翻译区域（UTR）中的重复序列基序互补的序列。之后，Lin-4被视为蠕虫遗传学领域的发现。另一方面，直到发现第二个称为let-7的miRNA直到发现miRNA在包括人类在内的所有动物物种中都高度保守。
与膜溶肽联合的策略
图 1. (A) 结合巨胞饮诱导肽（细胞摄取的生理刺激物）和膜溶解肽（破坏细胞质易位障碍的物理化学方法）用于细胞质生物活性货物的递送。(B) SDF-1α 衍生肽的序列。(C) 用 5 µM 肽和 1 mg/mL Dex70-FL 在 α-MEM(-) 中处理 30 分钟后诱导 HeLa 细胞对 Dex70-FL 的摄取。比较 SN21 与 (D) SDF-1α 和 (E) R8 或 TAT 诱导的 Dex70-FL 摄取。数据呈现为三个生物学重复的平均值 ± 标准误差 (SE)。单因素方差分析，然后进行 (C) Dunnett 事后检验和 (D, E) Tukey 事后检验。**，P<0.01； ***，P<0.001；ns，不显著
ANA屏幕定量ELISA分析套件
全身性自身免疫性疾病，例如全身性红斑狼疮，硬皮病，类风湿关节炎，sjögren综合征，皮肤肌炎，混合结缔组织疾病的特征是出现各种自身抗体的外观，这些自身抗体针对细胞核的组成部分。尽管尚未完全揭示某些自动抗体的显着性和病理相关性，但自动抗体的检测被广泛确定，并且在诊断系统性自身免疫性疾病中起着重要作用。anascreen允许在一个样品中检测到一个样品中的核和细胞质抗原的总自身抗体，作为诊断全身自身免疫性疾病的摘要参数。完整的HeLa核与重组蛋白和纯化的天然抗原的抗原结合可确保对ANA检测的最大敏感性和特异性。