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DNA连接酶4抑制使前列腺癌敏感到体内免疫检查点阻滞
抽象背景/目标：前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤。DNA连接酶IV（LIG4）表达与前列腺癌患者的预后不良相关。Lig4连接DNA双链断裂，是这些遗传病变的必不可少的或修复。前列腺癌尚未表现出对抗PD − 1免疫疗法的临床显着反应。前列腺癌表达较低的PD − L1水平，并表现出有限的细胞毒性T淋巴细胞浸润。为了确定lig4对前列腺肿瘤发生的抑制作用，我们创建了一种在体内模型中进行的新基因设计。材料和方法：LIG4+/+; TAG和LIG4 +/-; TAG前列腺和肿瘤进行了组织病理学。用抗PD1抗体或免疫前IgG治疗前列腺肿瘤的单独组。Lig4和Pd -L1表达。通过免疫组织化学和免疫荧光显微镜确定DNA损伤修复蛋白，细胞衰老和细胞死亡标记的表达。通过SCA1/CD49 F流式细胞仪和肿瘤培养物分析了前列腺癌干细胞F疗法。pd- L1蛋白表达通过蛋白质印迹确定。结果：LIG4抑制作用诱导前列腺和癌症中的DNA双链断裂和细胞衰老，并显着降低了前列腺内上皮内肿瘤和肿瘤发生。Lig4抑制作用降低了干细胞培养物中的前列腺癌干细胞F racte and Proli fration。前列腺癌对Lig4抑制作用抗性抗肿瘤免疫反应，这是由于PD − L1表达增加而导致的。PD − 1抗体治疗。结论：抑制Lig4敏化前列腺癌对免疫检查点抑制。关键字：DNA损伤，衰老，编程的死亡受体1，凋亡，癌症干细胞。
使用 T4 DNA 连接酶 (M0202) 进行连接
3. 对于粘性末端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 10 分钟。 4. 对于平末端或单碱基突出端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 2 小时（或者，高温孵育）
使用 T4 DNA 连接酶 (M0202) 进行连接
3. 对于粘性末端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 10 分钟。 4. 对于平末端或单碱基突出端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 2 小时（或者，高温孵育）
连接酶介导的可编程基因组整合（L-PGI）
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2024年9月29日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.09.27.615478 doi：Biorxiv Preprint
扭曲工程T4 DNA连接酶
拥挤的药物可在提高速度和效率的可选努力中使用了粘性拥挤剂，例如聚乙烯甘油（PEG），以增加底物的局部浓度并推动反应前进。但是，这种拥挤的代理可能会增加变异性或对于自动分配系统而言很难使用。此外，在克隆反应中使用拥挤剂需要在转换之前进行纯化步骤，这增加了动手的时间和处理。我们研究了在0％，2.5％和5％PEG 8000的情况下，各个连接酶对CFDNA底物的疗效。我们引用了电文件图的痕迹以识别3个连续的峰：底物，底物 + 1个适配器和底物 + 2个双侧适配器。如图5所示，扭曲工程的T4 DNA连接酶可以将大部分底物转换为所需的双连接峰独立于拥挤剂输入。
Cullin环泛素连接酶在心脏发育中的新作用
摘要：心脏发育是一个时空调节的过程，从胚胎阶段延伸到产后阶段。这种高度精心策划的过程的破坏会导致先天性心脏病或使心脏疾病或心脏衰竭使心脏易受。因此，对控制心脏发育的分子机制有深入的了解，对开发各种心脏疾病的创新疗法具有很大的希望。尽管已经取得了心脏发育的新型转录和表观遗传调节剂的重大进展，但探索影响这一过程的翻译后机制却滞后。culling环E3泛素连接酶（CRLS）是最大的泛素连接酶家族，控制约20％的细胞内蛋白的泛素化和降解。新兴证据发现了CRL在调节广泛的细胞，生理和病理过程中的关键作用。在这篇综述中，我们总结了有关CRL对心脏形态发生和成熟的多功能调节的最新发现，并呈现未来的观点，以促进我们对CRLS如何管理心脏发育过程的全面理解。
E3泛素蛋白连接酶lincr放大了tlr- ...
摘要：通过激活诸如MAP激酶和NF-κB信号途径等细胞内信号传导途径的激活，类似Toll样受体（TLR）诱导先天免疫反应，并在针对细菌或病毒感染的宿主防御中起重要作用。同时，TLR信号的过度激活导致各种炎症性疾病，包括自身免疫性疾病。TLR信号传导以平衡最佳免疫反应和炎症。但是，其平衡机制尚未完全理解。在这项研究中，我们将E3泛素连接酶lincr/ neurl3识别为TLR信号传导的关键调节剂。在有效的细胞中，因激动剂诱导的TLR3，TLR4和TLR5引起的JNK和p38 MAPK的持续激活显然被减弱。与这些观察结果一致，TLR诱导的一系列炎性细胞因子的产生显着减弱，这表明LINCR通过促进JNK和P38的激活来积极调节先天免疫反应。有趣的是，我们进一步的机械研究确定了MAP激酶的负调节剂MAPK磷酸酶-1（MKP1），是LINCR的泛素化靶标。因此，我们的结果表明，通过平衡LINCR（阳性调节剂）和MKP1（阴性调节器），TLR可以激活MAP激酶途径，这可能有助于诱导最佳免疫反应。
使用固定的T4 DNA连接酶生成寡核苷酸探针最大程度地减少样品损失并节省时间
为了解决这个问题，并促进了对改良的寡核的快速，简单，高产的，荧光团的附件，我们在这里证明了固定的T4 DNA连接酶（IM T4 DNA连接酶，NEB＃M0569）的易于有效使用。目标寡聚包含一个昂贵且难以合同的环嘧啶二聚体（CPD）（2）我们附加了5´FAM荧光团以可视化相应酶促反应的修饰（图2，第2页）。采用相应片段的适当化学计量比，可以立即通过毛细管电泳进行筛查，从而可以立即进行纯化的无连接反应。重要的是要注意连接酶反应中3´的寡磷酸成分中5´磷酸盐的要求。可以化学引入磷酸盐或使用T4多核苷酸激酶（NEB＃M0201）添加。
使用固定的T4 DNA连接酶生成寡核苷酸探针最大程度地减少样品损失并节省时间
为了解决这个问题，并促进了对改良的寡核的快速，简单，高产的，荧光团的附件，我们在这里证明了固定的T4 DNA连接酶（IM T4 DNA连接酶，NEB＃M0569）的易于有效使用。目标寡聚包含一个昂贵且难以合同的环嘧啶二聚体（CPD）（2）我们附加了5´FAM荧光团以可视化相应酶促反应的修饰（图2，第2页）。采用相应片段的适当化学计量比，可以立即通过毛细管电泳进行筛查，从而可以立即进行纯化的无连接反应。重要的是要注意连接酶反应中3´的寡磷酸成分中5´磷酸盐的要求。可以化学引入磷酸盐或使用T4多核苷酸激酶（NEB＃M0201）添加。