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拥挤的药物可在提高速度和效率的可选努力中使用了粘性拥挤剂,例如聚乙烯甘油(PEG),以增加底物的局部浓度并推动反应前进。但是,这种拥挤的代理可能会增加变异性或对于自动分配系统而言很难使用。此外,在克隆反应中使用拥挤剂需要在转换之前进行纯化步骤,这增加了动手的时间和处理。我们研究了在0%,2.5%和5%PEG 8000的情况下,各个连接酶对CFDNA底物的疗效。我们引用了电文件图的痕迹以识别3个连续的峰:底物,底物 + 1个适配器和底物 + 2个双侧适配器。如图5所示,扭曲工程的T4 DNA连接酶可以将大部分底物转换为所需的双连接峰独立于拥挤剂输入。

扭曲工程T4 DNA连接酶

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