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1。底漆设计和反应设置我应该如何设计序列底漆？引物应至少长18个碱基，以确保良好的杂交尝试达到约55-60°C的T mGC含量应约为50-55％。较高的GC内容可能会导致变性不完整避免二级结构（作为发夹），尤其是在3'末端避免使用四个或更多一个基础的串链•可以避免可以混合形成二聚体的底漆不应避免使用替代性混合杂交站点。是的，重要的是考虑退火温度与底漆匹配。一般规则是，循环方案中的退火温度低于底漆的熔化温度（T m）。t m（大约）=（no a/t x 2） +（g/c x 4的否）通常，将退火温度为50-55°C，从标准引物中给出良好的序列。是否有可能减少测序预混合的量？是的，预用含有剩余的试剂。首先做出第四季度大小的反应。如果序列结果良好并且信号峰很强，则可以进一步稀释该试剂盒。始终使用套件中包含的稀释缓冲液，并将最终体积保持在20µL。保持DNA和底漆不变。请注意，仅当您使用相同类型的模板和底漆进行序列时，建议这样做。如果您使用新底漆或在DNA模板准备中进行更改，请返回到套件的第四季度稀释度并检查序列的结果。
DNA测序
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