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用于超低剂量 CRISPR/Cas9 基因编辑的脂异肽复合物
评估了含有琥珀酰四乙烯五胺 (Stp) 和脂氨基脂肪酸 (LAF) 的双 pH 响应异种肽载体用于基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑。使用三种不同的基因组靶标（Pcsk9、eGFP、mdx 外显子 23），在三种不同的报告细胞系中筛选了不同的载体拓扑结构、LAF/Stp 比率的变化和 LAF 类型作为 Cas9 mRNA/sgRNA 多聚复合物。鉴定出一种 U 形和三种束 (B2) 形脂异种肽，它们表现出显著的效率。在亚纳摩尔 EC 50 浓度分别为 0.4 nM sgRNA 和 0.1 nM sgRNA 的顶级 U 形和顶级 B2 载体中，即使在全 (≥ 90%) 血清中孵育后，仍观察到顶级载体的基因组编辑效力。多聚复合物与单链 DNA 模板共同递送 Cas9 mRNA/sgRNA，用于同源性定向基因编辑，导致报告细胞中 eGFP 转化为 BFP 的比例高达 38%。顶部载体被配制成多聚复合物或脂质纳米颗粒 (LNP)，随后用于体内给药。制剂在 4 ◦ C 下储存时表现出长期的物理化学和功能稳定性。重要的是，静脉内注射多聚复合物或 LNP 介导肌营养不良蛋白基因的体内编辑，触发肌营养不良蛋白表达的心肌、骨骼肌和脑组织中 mRNA 外显子 23 剪接调节。
脂质纳米颗粒在CRISPR技术中的应用
群集，定期间隔短的短篇小说重复（CRISPR）基因组编辑是最受欢迎的基因编辑技术之一，其简单，便利性和效率。如今，CRISPR-CAS9技术已用于农业，医学，生物学和许多其他领域，用于筛选靶基因，创建模态动物和基因治疗。 但是，在CRISPR-CAS9的临床应用之前，仍然存在障碍，运输需要安全有效的交付系统。 研究表明，使用脂质纳米颗粒（LNP）作为载体，基于脂质纳米颗粒的递送是一种很好的运输方法。 lnp是一种vesica样球，由装饰有信号蛋白及其货物的脂质壳组成。 LNP提高了CRISPR-CAS9系统的稳定性和免疫原性，并具有易于生产和高可修改性的优点，使其成为未来具有很高潜力的理想载体。 本综述介绍了LNP的四个基本组成部分：可局部的阳离子脂质，聚乙烯甘油（PEG）脂质，Zwitterionic磷脂和胆固醇。 This review focuses on the applications of LNP, including lipid-encapsulated gold nanoparticles, biocompatible monosized lipid-coated stellate mesoporous silica nanoparticles (LC-MSNs), biodegradable lipid and messenger RNA Nanoparticles, Mulberry leaf lipid nanoparticles, phenylboronic acid-derived lipid nanoparticles,脂质聚合物杂化纳米颗粒与超声介导的微生物破坏，阳离子脂质辅助的PEG-B-PLGA纳米颗粒，多价N-乙酰乳糖胺 - 脂肪胺 - 脂肪纳米颗粒等如今，CRISPR-CAS9技术已用于农业，医学，生物学和许多其他领域，用于筛选靶基因，创建模态动物和基因治疗。但是，在CRISPR-CAS9的临床应用之前，仍然存在障碍，运输需要安全有效的交付系统。研究表明，使用脂质纳米颗粒（LNP）作为载体，基于脂质纳米颗粒的递送是一种很好的运输方法。lnp是一种vesica样球，由装饰有信号蛋白及其货物的脂质壳组成。LNP提高了CRISPR-CAS9系统的稳定性和免疫原性，并具有易于生产和高可修改性的优点，使其成为未来具有很高潜力的理想载体。本综述介绍了LNP的四个基本组成部分：可局部的阳离子脂质，聚乙烯甘油（PEG）脂质，Zwitterionic磷脂和胆固醇。This review focuses on the applications of LNP, including lipid-encapsulated gold nanoparticles, biocompatible monosized lipid-coated stellate mesoporous silica nanoparticles (LC-MSNs), biodegradable lipid and messenger RNA Nanoparticles, Mulberry leaf lipid nanoparticles, phenylboronic acid-derived lipid nanoparticles,脂质聚合物杂化纳米颗粒与超声介导的微生物破坏，阳离子脂质辅助的PEG-B-PLGA纳米颗粒，多价N-乙酰乳糖胺 - 脂肪胺 - 脂肪纳米颗粒等需要在LNP和CRISPR系统中进行进一步的研究，以优化临床应用的输送特性。关键字：CRISPR，脂质纳米颗粒，载体，基因编辑。
靶向脂质体药物输送：当前应用和挑战概述
摘要：在药物开发中，活性物质在体外表现出功效但在体内缺乏特异性达到其目标的能力的情况并不少见。因此，靶向药物递送已成为制药科学的主要关注点。自 1995 年 Doxil ® 获批以来，脂质体已成为靶向药物递送领域的领先纳米颗粒。它们的低免疫原性、高多功能性和有据可查的疗效使其在临床上用于治疗多种疾病。话虽如此，每种疾病都伴随着一组独特的生理状况，每种脂质体产品的配制都必须考虑到这一点。脂质体有多种不同的靶向技术，可根据应用采用。被动技术（例如聚乙二醇化或增强渗透和保留效果）可以改善一般药代动力学，而主动技术（例如将靶向分子结合到脂质体表面）可以带来进一步的特异性。本综述旨在总结目前靶向脂质体在疾病治疗中的策略。
多组分脂质乳液对极低出生体重婴儿脑容量的影响
在生命的早期优化营养的早期营养中的抽象目的是衰减早产的不良神经系统后果并有可能改善神经发育结果的关键机会。我们假设在肠胃外营养（PN）中使用多组分脂质乳液（MLE）与在极低的出生体重（ELBW）婴儿中等效年龄（TEA）的脑磁共振上的小脑脑磁共振上的较大体积有关。研究设计，我们分析了妊娠28周的早产儿和/或出生体重<1,000 g在我们以前的试验中随机分配的一群早产儿中的大脑磁共振成像（MRI），以接受MLE或大豆基脂质乳液（SLE）。该研究的主要结果是小脑体积（CEV），该小脑体积（CEV）是在茶中获得的MRI。次要结果包括总脑体积（TBV），上重量，脑干量和CEV校正了在TEA上获得的MRI评估的TBV。然后分析了34名婴儿的茶中的MRI：MLE组中的17个，SLE组为17。两个研究组之间进行MRI的月经后年龄（PMA）是可比的。MLE组中的CEV以及经PMA校正的CEV均高于SLE组。在考虑的其他大脑体积之间没有发现差异。结论我们的结果表明，在PN中使用MLE可以促进ELBW婴儿的CEV生长，并在TEA时以MRI价值促进。
化学修饰的 AsCas12a 向导 RNA 可改善不同组织中脂质纳米颗粒介导的体内基因编辑
（Cytiva）。LNP 货物是编码工程 AsCas12a 核酸酶和 gRNA 的 mRNA，重量比为 1:1。通过 RiboGreen 测定法（ThermoFisher Scientific）评估 LNP 的包封率大于 80%，多分散性指数 (PDI) <0.2，通过 Zetasizer 分析（Malvern Panalytical，型号 ZSU3205）评估平均直径大小 <105 nm。• 细胞培养处理：用指定浓度的包封 AsCas12a mRNA 的 LNP 处理细胞，并在转染后 72 小时分离 gDNA。原代人肝细胞 (PHH) 的转染包括重组人载脂蛋白 E。进行基于扩增子的下一代测序 (NGS) 以确定编辑百分比。 • 小鼠眼内体内编辑：通过前房内注射将 LNP 递送至每只 hMYOC Y437H（具有 Y437H 突变的人类肌动蛋白基因）敲入小鼠的一只眼中。注射后一周，解剖眼球，从前房分离 mRNA。采用基于转录本的 RT-ddPCR 检测来测量剩余 hMYOC mRNA 的程度。 • 小鼠肝脏内体内编辑：通过尾静脉静脉注射将 LNP 递送至 hMYOC Y437H 小鼠。注射后一周，解剖肝脏，分离 gDNA，并进行基于扩增子的 NGS 以确定编辑百分比。 • 体外结合亲和力测量：将标记的未修饰的向导与重组工程 AsCas12a 和浓度不断增加的修饰“测试”向导混合，在室温下孵育 3 小时，然后在硝酸纤维素印迹膜 (Cytiva) 和 Hybond N+ 膜 (Cytiva) 上进行双重过滤分离。在每个膜上定量荧光标记的未修饰向导，并计算结合的未修饰向导的百分比。标记的未修饰向导的结合百分比降低是由于来自修饰的“测试”向导的结合竞争。
细菌膜脂蛋白肽酶的环状肽抑制剂的计算设计
摘要：对抗多药革兰氏阴性细菌的新抗生素仍然存在至关重要的需求，这是一种继续影响死亡率的主要全球威胁。脂蛋白信号肽酶II是革兰氏阴性细菌的脂蛋白生物合成途径中必不可少的酶，使其成为发现抗菌药物发现的有吸引力的靶标。尽管已经鉴定出了LSPA的天然抑制剂，例如环状双肽球霉素，稳定性和生产困难限制了它们在临床环境中的使用。我们利用计算设计生成球霉素的稳定的新循环肽类似物。只需要合成和测试12种肽，以产生有效的抑制剂，避免准备大型图书馆和筛选运动。在针对Eskape-E病原体的微稀释测定中，最有效的类似物比球霉素表现出比球霉素相比或更好的抗菌活性。这项工作将计算设计作为对抗抗生素耐药性的一般策略。
STEM00008 Lipofectamine™ Stem 试剂
膜过滤测试的生物负载估计样品中可存活的需氧微生物总量，结果以菌落形成单位 (CFU) 表示。在胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA) 上孵育 3 – 5 天后评估细菌生长情况，在 Sabouraud 葡萄糖琼脂 (SDA) 上孵育 5 – 7 天后评估真菌生长情况。
脂质纳米颗粒有效地提供了基本编辑器ABE8E，以进行col7a1校正，以疾病性表皮溶液bullosa成纤维细胞Invitro
到编辑脂质纳米颗粒（LNP）已被广泛批准，并在全球范围内用于传递mRNA。lnps可以包装并传递mRNA编码的基因编辑器，包括腺嘌呤碱基编辑器，它们将T碱基对转换为无需双重DNA断裂或供体DNA的G C C碱基对（Gaudelli等，2017）。腺嘌呤基本编辑器是一种潜在的治疗方法，用于遗传性疾病营养不良的表皮溶液Bullosa（DEB）。deb是由COL7A1的致病变异引起的，导致功能障碍或不存在VII型胶原蛋白（C7），这是固定纤维的主要组成部分，它们粘附了皮肤E表皮连接，从而使皮肤稳定性（Bardhan等，2020）。目前无法治愈DEB；然而，W 90％的Col7a1变体是单核苷酸变体，c> t单核苷酸变体可用于W 60％的变体（Clinvar数据库； 2023年8月访问）。这些变体是由腺嘌呤碱基编辑器定位的；我们的小组和其他人已经证明了腺嘌呤基本编辑器在恢复病原变体和恢复C7表达方面的实用性（Osborn等，2020; Sheriff等，2022）。在这项研究中，我们首先探讨了新型LNP的使用，以mRNA格式传递ABE8E（Richter等，2020），其单一指定RNA（SGRNA）针对致病性C.5047 c> t col7aa1 col7a1 col7a1变体在患者锻造的纸张中
脂质体的综合综述：作为一种新型药物输送系统
希腊语“Lipos”表示脂肪，“Soma”表示身体，两者组合形成球形同心囊泡，称为脂质体。脂质体是圆形囊状磷脂分子。它包裹水滴，特别是以人工形式将药物运送到组织膜中。脂质体是一种纳米颗粒（尺寸为 100 纳米）[1]。脂质体于 1961 年由 Bangham 首次描述，这是一次偶然的发现，他将磷脂酰胆碱分子分散在水中，在此期间他发现该分子形成封闭的双层形状，具有水相部分，水相部分被脂质双层包裹[2]。脂质体很有用，因为它们可作为多种药物的载体，具有潜在的治疗或其他特性。各种载体（如纳米颗粒、微粒、多糖、凝集素和脂质体）可用于将药物靶向特定部位。脂质体药物输送因其在药物输送、化妆品和生物膜结构等各个领域的贡献而受到人们的关注 [3] 。脂质体是一种微小的气泡（囊泡），其膜由磷脂双层组成。膜通常由磷脂制成，如磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱。磷脂是两亲性的，其极性头部为亲水性，烃尾为疏水性 [4] 。
通过靶向 LXR 信号的表面工程脂质纳米粒子增强 CAR 巨噬细胞的胞吐作用
清除死亡细胞或胞吞作用是解决炎症不可或缺的一部分。然而，动脉粥样硬化斑块的炎症微环境经常影响凋亡细胞和驻留吞噬细胞的生物学，导致胞吞作用功能障碍。为了解决这个问题，开发了一种嵌合抗原受体 (CAR) 巨噬细胞，它可以靶向和吞噬表达 CD47 的抗吞噬凋亡细胞。在正常和炎症情况下，CAR 巨噬细胞表现出相当于抗体阻断的活性。CAR 巨噬细胞的表面用针对肝脏 X 受体通路的活性氧 (ROS) 响应性治疗性纳米颗粒进行修饰，以提高其细胞效应活性。CAR 和纳米颗粒工程激活脂质通量泵的结合增强了细胞碎片清除并减少了炎症。进一步表明，未分化的 CAR-M 可以在微制造的血管系统内迁移。研究还表明，我们的 CAR 巨噬细胞可以充当嵌合开关受体 (CSR)，以抵抗免疫抑制炎症环境。开发的平台有可能为下一代心血管疾病疗法的进步做出贡献，进一步的研究包括体内实验。