使用特殊配方的缓冲液MB1和裂解矩阵E与MP BioMedicals的FastPrep®仪器结合使用,可以在几秒钟内实现各种样品的有效裂解。在套件中提供的列MB和套件缓冲液旨在提供高产量和纯度的GDNA,并与QPCR,限制消化和测序等下游应用兼容。
图4。含有沙门氏菌和隐孢子虫的临床样品的QPCR结果。c t值,用于分离的核酸,而没有珠子珠子的基本工作流程(没有预处理)。错误条表示标准偏差。
NucleOmag®HMWDNA试剂盒设计用于从细胞,组织和植物材料中分离出高分子量DNA。此外,还显示了全血(EDTA),唾液,颊拭子以及细菌和酵母样品的兼容性。该程序基于在适当的缓冲液条件下核酸对顺磁珠的可逆吸附。样品裂解是使用裂解缓冲液HM1或HMB和蛋白酶K进行酶促的。用于将核酸与顺磁珠,结合缓冲液HM2和核瘤®B-珠的结合添加到转移和清除的裂解物中。磁分离后,使用洗涤缓冲液HM3,HM4和70%乙醇洗涤顺磁珠以去除污染物和盐分。使用冲洗缓冲液HM5去除以前的洗涤步骤的残留乙醇。接下来,高度纯化的DNA用洗脱缓冲液HM6洗脱,可直接用于下游应用。可以手动使用NucleOmag®HMWDNA试剂盒,也可以在标准的液体处理仪器和自动磁分离器上自动化。
潜在的指纹是一种常见的调查工具,不仅由警察部队,而且由军事法医专家使用。巴西军队内部进行的最常规法医调查之一是针对遗产的罪行,在该遗产中,指纹分析是识别肇事者的有效方法。对被污迹或不完整印刷的DNA分析可以是充分利用证据的补充方法。考虑到巴西军队中犯罪现场分析的背景,我们评估了使用氯化钠0.9%(NACL)作为从沉积在玻璃和金属表面上的指纹的DNA收集的擦拭解决方案,结合了裂解溶液方法,用于DNA提取。另外,我们比较了使用使用十二烷基硫酸钠2%(SDS)获得的结果,这是擦拭溶液的常见选择。这项研究中发现的数据表明,从两种测试溶液之间的潜在指纹中恢复DNA没有统计学上的显着差异。然而,将NaCl 0.9%用作与裂解解决方案相结合的收集解决方案的使用,其优势是较少的耗时和较低的成本。
NORGEN的纯化技术纯化基于使用Norgen专有树脂作为分离矩阵的自旋色谱柱色谱法。该过程为头发样品提供了简单简便的线粒体DNA隔离方案。首先,将DTT,蛋白酶K和裂解添加剂A添加到发轴上,并在55°C下孵育30分钟。完全溶解了头发轴一旦通过离心去除任何未消化的头发。然后收集清洁上清液,并添加异丙醇和裂解缓冲液B。然后将裂解物加载到自旋柱上。Norgen的自旋柱以取决于离子浓度的方式结合核酸,因此只有DNA才能与柱结合,而蛋白质和其他污染物则在流通中除去或保留在树脂顶部。然后使用提供的洗涤溶液A洗涤结合的DNA,并使用洗脱缓冲液B洗脱纯化的DNA。纯化的mtDNA(以及基因组DNA如果使用毛根)不含所有抑制剂,可用于包括PCR和测序在内的敏感下游应用中。
NucleOmag®HMWDNA试剂盒设计用于从细胞,组织和植物材料中分离出高分子量DNA。此外,还显示了全血(EDTA),唾液,颊拭子以及细菌和酵母样品的兼容性。该程序基于在适当的缓冲液条件下核酸对顺磁珠的可逆吸附。样品裂解是使用裂解缓冲液HM1或HMB和蛋白酶K进行酶促的。用于将核酸与顺磁珠,结合缓冲液HM2和核瘤®B-珠的结合添加到转移和清除的裂解物中。磁分离后,使用洗涤缓冲液HM3,HM4和70%乙醇洗涤顺磁珠以去除污染物和盐分。使用冲洗缓冲液HM5去除以前的洗涤步骤的残留乙醇。接下来,高度纯化的DNA用洗脱缓冲液HM6洗脱,可直接用于下游应用。可以手动使用NucleOmag®HMWDNA试剂盒,也可以在标准的液体处理仪器和自动磁分离器上自动化。
摘要:下一代测序技术通过启用微生物组的社区级序列分析来推动人类微生物组研究的快速发展。尽管所有微生物组测序方法都取决于从样品中恢复DNA作为第一个关键步骤,但裂解方法可能是微生物组谱偏差的主要决定因素。基于温和的酶的DNA制备方法可保留DNA质量,但可以通过未能打开难以溶的细菌来偏向结果。诸如珠子跳动之类的机械方法也会偏向DNA恢复,因为打破较硬的细胞壁所需的机械能可以剪切更容易裂解的微生物的DNA,并且剪切可能会根据跳动的时间和强度而变化,从而影响重复性。我们引入了一种非机械,非酶,新型的新型快速微生物DNA提取程序,适用于16S基因基因基因的微生物组分析应用,以消除珠子的跳动。同时应用碱性,热量和洗涤剂(“快速”方案)在毫克量样品中提供了一致的在困难且易于裂解的细菌等于或更好的群体中,与现有方案相等或更好,从而产生足够的高素质DNA,用于全长长度16S RRNA基因PCR。使用包含困难和易于裂解细菌的模拟细菌群落评估了新型的“快速”方法。人类粪便样品测试将新型快速方法与标准的人类微生物组项目(HMP)方案进行了比较,该方案为肺癌患者和对照组的样品进行了比较。使用PACBIO平台上的V1V3和V4区域的V1V3和V4区域的16S rRNA基因测序分析了从两种方法中恢复的DNA。我们的发现表明,“快速”方案始终产生较高水平的公司物种,这些物种更准确地反映了细菌群落结构的特征,这通过模拟社区评估证实。新型的“快速” DNA裂解协议减少了珠子跳动和酶裂解方法常见的种群偏见,提供了改善微生物社区分析的机会,并结合了将样品输入减少到10毫克或更低的情况,并且可以启用快速传递和同时传递标准板格式中96个样品的裂解。与广泛使用的商业方法相比,这会导致样品处理时间的降低20倍,总体优势降低了2倍。我们得出结论,新型的“快速” DNA提取方案为16S rRNA基因扩增子测序的粪便提供了可靠的替代方法。
4. Arif, IA;Bakir, MA;Khan, HA;Ahamed, A.;Al Farhan, AH;Al Homaidan, AA;Al Sadoon, M.;Bahkali, AH 和 Shobrak, M. (2010) 一种从成熟椰枣树叶中提取 DNA 的简单方法:砂磨和裂解缓冲液成分的影响。《国际分子科学杂志》。11(9): 3149–3157。
摘要 蓟马是重要的农业害虫,通过取食和传播植物病毒对农作物造成广泛损害,造成了巨大的经济损失。有效的 DNA 提取对于分子鉴定和病毒检测至关重要,但由于其体积小、角质层坚硬以及受到植物衍生物质的污染,提取 DNA 往往具有挑战性。已经开发出各种 DNA 提取方法来应对这些挑战,包括碱裂解、酶消化、基于有机溶剂的方法和旋转柱技术。碱裂解法是一种快速且经济有效的解决方案,可产生适用于 PCR 等应用的 DNA,但可能需要额外的纯化才能进行灵敏的分析。酶消化使用蛋白酶 K 等试剂,可确保获得相对纯净的 DNA,这些 DNA 可以稳定地储存并可用于下游应用。基于有机溶剂的方法,例如 CTAB 与氯仿相分离和酒精沉淀,对于分离高质量 DNA 非常有效,尤其是在含有大量污染物的样品中。基于离心柱的商业试剂盒进一步简化了该过程,通过最大限度地减少杂质,提供具有极高纯度的 DNA,使其成为敏感和高通量应用的理想选择。DNA
本案与 Laboratory Corporation of America Holdings 诉 Ravgen, Inc. 案有关,案号 2023-1342, 2025 WL 32904(联邦巡回法院,2025 年 1 月 6 日)(“ Labcorp ”),涉及相关的美国专利 7,332,277,并于 2025 年 1 月 6 日由本法院作出判决。在该案中,我们确认了委员会支持针对重叠先前技术的类似权利要求。Ravgen, Inc.(“Ravgen”)拥有 '720 专利,该专利针对一种“快速、非侵入性地确定胎儿 DNA 序列的方法”,可用于“检测染色体异常”。'720 专利,第 1 栏,第 23-27 行。 '720 专利描述了一种向母体血液样本中添加阻碍细胞裂解的药剂的方法,以增加样本中无细胞胎儿 DNA 相对于无细胞母体 DNA 的百分比。同上,第 210 栏,第 19-24 行;同上,第 89 栏,第 35-37 行。说明书列出了各种药剂作为膜稳定剂、交联剂和细胞裂解抑制剂,包括甲醛和葡萄糖。同上,第 32 栏,第 65 行至第 33 栏,第 28 行。
