环境产品声明是凝结的生命周期评估报告,通常报告产品级别的环境影响。EPA已经确定了概述构成强大,高质量EPD的期望,并解决ISO 21930:2017第5.5节和ISO 14025:2006第6.7.2节中概述的可比性和一致性方面。与美国EPA产品类别规则(PCR)并行,以支持低体现碳建筑材料的标签计划(EPA的PCR标准),数据质量和透明度的EPD标准旨在为EPDS提供指定实体和其他用户,并在要求提供高级EPD的单一要求的EPDS和其他要求。目前将标准作为一组要求起草,但未来的利益相关者的意见可能会导致类似于EPA PCR标准的方法,并且要求分为基线和领导标准。
ACC 美国心脏病学会 ACE 血管紧张素转换酶 ACE 2 血管紧张素转换酶 2 ADR 药物不良反应 AHA 美国心脏协会 ARNI 血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂 ARB 血管紧张素 II 受体阻滞剂 BIHS 英国和爱尔兰高血压学会 BP 血压 CCB 钙通道阻滞剂 CDS 社区药物计划 CKS 临床知识总结 CV 心血管 DBP 舒张压 DDD 规定日剂量 DPS 药物支付计划 ESC 欧洲心脏病学会 ESH 欧洲高血压学会 GMS 全科医疗服务 HSE 卫生服务执行官 ICGP 爱尔兰全科医师学会 LTI 长期疾病 MAP 平均动脉压 MMP 药物管理计划 mTOR 雷帕霉素哺乳动物靶点 NICE 国家健康与临床优化研究所 NSAID 非甾体抗炎药 PCRS 初级保健报销服务 RAAS 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 RAS肾素-血管紧张素系统 SBP 收缩压 SGLT2 钠-葡萄糖协同转运蛋白 2 SmPC 产品特性总结 WHO 世界卫生组织 致谢
使用引物211F(5'-TTTTTTTTTTCTAGTAGATTAGATTGRTTTYAT-3')和210r(5'-cacCAACTCTTTAAAATATC-3'')(5'-TTTTTTTTTTATATAGATTTTYAT-3'')扩增了线粒体细胞色素C氧化酶亚基II基因(mtDNA Cox2)。聚合酶链反应(PCR)以25μl的体积进行,含有0.5μl的每种底漆10μm,3μl的MGCL2 25 mm(Promega,USA),5μL的5×缓冲液(Promega),0.5μlDMSODMSO DMSO 0.3 mm,0.3 mm,0.5毫米,0.3毫米,DNTS 10毫升,Dnts 10 mm,dnts dnts dnts dnts dnts dnts dnts dnts dnts dnnt dnts dnts dnnt。 GO-TAQ聚合酶(5 U/μL)(Promega)和2μL的总DNA模板,添加超纯水以达到最终体积。PCR时间温度条件如下:94°C持续3分钟(初始变性),然后在94°C下34个循环30 s(变性),46°C 60 s(退火),72°C 90 s(扩展),持续90 s(扩展),在72°C下以72°C的降低。PCR。(2014)。
将生物的生物体视为转基因的生物(GMO),当将新的外国DNA片段或转基因插入以创建新的特征中时。生物技术领域目前正在快速发展,每天都会出现更多的特征和应用。由于对环境和生物体的关注,社会尚未接受这项技术。国家使用严格的生物安全方案来减少对此问题的恐惧,并使用多种机制检测DNA和GMO蛋白分子,以确保生物技术产品不含异物或以低于阈值的水平(如果存在)。基于这些样品中DNA和蛋白质的数量和质量,进行了这些检测。定量检测对于确定每个样品的转基因阈值至关重要。使用各种PCR(定性或定量)基于DNA的GMO检测是这些检测技术之一。确定在侧生物体中表达蛋白质多少的第二个最受欢迎的技术是基于蛋白质的检测。DNA微阵列,生物传感器,色谱和DNA测序均可用于查找GMO。准确和敏感的转基因生物检测技术的可用性使我们能够控制农作物,食物和成分来源中的转基因生物的存在。
缩写列表 ACC 美国心脏病学会 ACE 血管紧张素转换酶 ACE2 血管紧张素转换酶 2 ADR 药物不良反应 AHA 美国心脏协会 ARB 血管紧张素 II 受体阻滞剂 ARNI 血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂 AT 1 血管紧张素 1 型 BIHS 英国和爱尔兰高血压协会 BP 血压 CCB 钙通道阻滞剂 CDS 社区药物计划 CHMP 人用药品委员会 CYP 细胞色素 P450 DDD 规定日剂量 DPS 药物支付计划 EMA 欧洲药品管理局 ESC 欧洲心脏病学会 ESH 欧洲高血压学会 GMS 全科医疗服务 HPRA 健康产品监管局 HSE 卫生服务执行官 ICGP 爱尔兰全科医师学会 LTI 长期疾病 LVEF 左心室射血分数 MRA 盐皮质激素受体拮抗剂 MMP 药物管理计划 NICE 国家健康与护理研究所卓越 NSAID 非甾体抗炎药 NYHA 纽约心脏协会 PCRS 初级保健报销服务 RAS 肾素-血管紧张素系统 RAAS 肾素-血管紧张素-醛固酮系统 SGLT2 钠-葡萄糖协同转运蛋白 2 SmPC 产品特性摘要 WHO 世界卫生组织
生命科学系相信在生物技术的国际标准中,在生物成像,细胞生物学和诊断方面奠定了强大的基础。同等重点是培训和研究,这些培训和研究是希夫·纳达尔大学本科课程的知识分子。第四年的研究项目和“本科研究的机会”(我们);在他们的课程期间,主要的亮点是使我们的本科课程与众不同。学生有能力在哈佛医学院,耶鲁大学,马里兰州大学,苏塞克斯大学,范德比尔特大学,ICGEB,NIH,CIMAP和AIIMS的世界一流教师的帮助下面对和应对生物技术的挑战。学生在包括癌症生物学,血管生物学,疟疾,生物信息学,医学病毒学,工业生物技术,药物设计和药物开发在内的跨学科培训。工业合作有助于填补传统博士学位之间的差距。以及支持行业的专业人员,从而在学术界,行业和医院获得更多的工作机会。最先进的实验室具有世界一流的乐器,例如FACS ARIA,荧光显微镜,RT和正常PCR,动物和细菌细胞培养实验室,配备了生物安全罩和高端孵化器,振动器,摇动者,循环水循环水浴,液态氮气浴室,-70和-20 Freezers forzers forzers forzers。
图 1. APPEAL 克隆。A、从载体 pYJA5 中去除氨苄青霉素抗性基因 (AmpR)。sgRNA1-4 和甲氧苄啶抗性基因 (TmpR) 与三个不同的 PCR 扩增子融合。所有元件均经过 Gibson 组装以形成 4sgRNA-pYJA5 质粒,并用甲氧苄啶筛选转化子。描绘了 4sgRNA-pYJA5 全质粒和 4sgRNA 盒的详细结构。LTR,长末端重复;Ψ,包装信号序列;PB,piggyBac 转座子元件;PuroR,嘌呤霉素抗性元件;hU6、mU6、hH1 和 h7SK 是普遍表达的 RNA 聚合酶 III 启动子;sg,sgRNA。 B、转化大肠杆菌并进行甲氧苄啶筛选后,代表性 pYJA5 限制性片段、3 片段 PCR 和 APPEAL 克隆产物的单菌落 PCR。Bbs I 消化 pYJA5 产生约 1 千碱基 (kb) 的 AmpR 元件条带和约 7.6 kb 的线性化载体条带(左)。使用相应的 sgRNA 引物进行 PCR 后,三个扩增子在琼脂糖凝胶上分别显示预期的 761、360 和 422 bp 大小(中)。使用转化细菌平板中 APPEAL 克隆产物 4sgRNA 盒两侧的引物进行单菌落 PCR 始终产生预期大小(2.2 kb,右)。 C ,8 个具有不同 4sgRNA 序列的独立 APPEAL 实验中正确、重组和突变 4sgRNA 质粒的百分比(每个实验测试 ≥22 个菌落)。D ,四个 APPEAL 实验中正确、重组和突变 4sgRNA 质粒的百分比。每个点代表一个由八个菌落组成的独立生物复制品(n=24;平均值 ± SEM)。E ,高通量格式的 APPEAL 克隆时间线(h:小时;d:天)。
摘要:法国小鼠诊所 (Institut Clinique de la Souris; ICS) 已生产出 2000 多个用于 C57BL/6N 小鼠“点菜”诱变的靶向载体。尽管大多数载体已成功用于小鼠胚胎干细胞 (ESC) 中的同源重组,但少数载体在多次尝试后仍无法靶向特定位点。我们在此表明,将 CRISPR 质粒与与之前失败的质粒相同的靶向构建体进行共电穿孔可以系统地获得阳性克隆。然而,必须仔细验证这些克隆,因为大量克隆(但不是全部)显示靶向质粒在位点处发生串联。详细的南方印迹分析可以表征这些事件的性质,因为标准的长距离 5′ 和 3′ PCR 无法区分正确和错误的等位基因。我们表明,在 ESC 扩增之前进行简单且廉价的 PCR 可以检测和消除带有串联体的克隆。最后,尽管我们只测试了小鼠 ESC,但我们的结果强调了任何结合使用 CRISPR/Cas9 和环状双链供体的转基因细胞系(如已建立的细胞系、诱导性多能干细胞或用于体外基因治疗的细胞系)存在错误验证的风险。我们强烈建议 CRISPR 社区在使用 CRISPR 增强任何细胞类型(包括受精卵母细胞)中的同源重组时,使用内部探针进行南方印迹。
APA 年度绩效评估 ADP 年度发展计划 CFMS 计算机财务管理系统 CTS 投诉追踪系统 DLI 支出挂钩指标 DLR 支出挂钩结果 EHS 环境健康与安全 ESFPs 环境与社会联系人 ESMF 环境与社会管理框架 ESSA 环境与社会系统评估 FABS 财务会计与预算系统 FD 财务部 FY 财政年度 GDP 国内生产总值 GIS 地理信息系统 GoPb 旁遮普邦政府 IDAMP 综合发展与资产管理计划 IPC 期中付款证书 IPF 投资项目融资 IS 机构强化 LG 与 CDD 地方政府和社区发展部 M&R 维护与修复 MACs 最低准入条件 MC 市政公司/委员会 MO (F) 市政官员(财务) MO (I) 市政官员(基础设施) MO (P) 市政官员(规划) MO (R) 市政官员(监管) NOC 无异议证书 OSR 自有收入来源 O&M 运营与维护 P for R 结果计划 PAD 计划评估文件PBG 基于绩效的拨款 PCP 旁遮普城市计划 PCR 聚合酶链反应 PLGB 旁遮普地方政府委员会 PLGA 旁遮普地方政府法案 PM 绩效衡量 PMDFC 旁遮普市政发展基金公司 PMS 绩效管理系统 PPRA 公共采购监管局 PURR 旁遮普城市改革路线图 SLG 地方政府秘书 SOP 标准操作程序 TOR 职权范围 ULG 城市地方政府 VO 变更令 WB 世界银行
图 1. CRISPR-Cas9 RNP 促进 C. higginsianum 中与供体 DNA 的同源重组。(a)CRISPR-Cas9 RNP 介导的 HDR 示意图。首先,将重组 Cas9 蛋白(橙色)和针对目的基因 (GOI) 的合成 gRNA(洋红色)在体外混合以形成 RNP。其次,用 RNP 和供体 DNA 转化 C. higginsianum 原生质体,其中供体 DNA 具有选择标记 NPTII,两侧是两个同源臂。最后,通过结合选择培养基和基于 PCR 的筛选来分离用选择盒替换 GOI 的菌株。(b)URA3 敲除的构建设计。供体 DNA 具有选择标记,即 NPTII 表达盒,两侧是 0.5 kb 的同源臂,以浅灰色框表示。箭头表示扩增 ura3 基因组中特异性存在的“片段 1”和“片段 2”的引物。(c)转化子数量和 URA3 敲除率。左图显示每板转化子数量,右图显示每板 URA3 敲除率(n =5)。“-gRNA”和“+gRNA”分别代表不含和含 gRNA 的结果。星号表示统计差异(p < 0.001,Welch t 检验)。通过 PCR 筛选评估 URA3 的敲除,如 (d) 所示。(d)ura3 突变体的 PCR 筛选。使用 (b) 中所示的引物组,在含有 500 µg/ml G418 的 MA 上使用每个菌落进行 PCR。显示了从 -gRNA 和 +gRNA 转化子中随机选择的七个菌落的结果。 C. higginsianum 肌动蛋白基因 (CH63R_04240) 的 238 bp 片段被指定为肌动蛋白。凝胶左侧的数字表示 DNA 大小标记 (bp) 的位置。
