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Komagataella phaffii（毕赤酵母）作为一种强大的酵母...
Komagataella phaffii (K. phaffii) (Pichia pastoris)，也称为生物技术酵母，是一种在生物技术和制药行业中具有多种应用的酵母菌种。这种甲基营养酵母作为重组蛋白的生产平台引起了人们的极大兴趣。它具有许多优点，包括有效的分泌表达，便于纯化异源蛋白，细胞密度高，生长迅速，翻译后变化，以及整合到基因组中的稳定基因表达。在过去的三十年里，K. phaffii 还被精炼为一个适应性强的细胞工厂，可以在实验室环境和工业规模上生产数百种生物分子。事实上，迄今为止，使用 K. phaffii 表达方法已经生成了 5000 多种重组蛋白，占细胞总蛋白的 30% 或总释放蛋白的 80%。除了已获得许可的 300 多种工业工艺外，K. phaffii 还用于制造 70 多种商业产品。其中包括对工业生物技术有用的酶，包括木聚糖酶、甘露聚糖酶、脂肪酶和植酸酶。其他是生物制药，包括人血清白蛋白、胰岛素、乙肝表面抗原和表皮生长因子。与其他表达系统相比，这种酵母还被认为是合成亚单位疫苗的特殊宿主，而亚单位疫苗最近已被替代疫苗类型所取代，例如灭活/杀死和减毒活疫苗。此外，通过多层次优化方法，如密码子偏好、基因剂量、启动子、信号肽和环境因素，可以实现重组蛋白的高效生产。因此，尽管 K. phaffii 表达系统高效、简单且工艺流程明确，但仍需确定理想条件，因为这些条件会根据目标蛋白而变化，以确保最高的重组蛋白生成量。本综述介绍了 K. phaffii 表达系统、其在工业和生物制药蛋白质生产中的重要性，以及一些高效蛋白质生产的生物加工和遗传改造策略。K. phaffii 最终将继续作为一种强大的表达系统在研究领域和工业应用中做出贡献。
毕赤酵母基因组 DNA 提取的优化...
基因组 PCR 是分子生物学的基础，包括两个关键步骤：DNA 提取和扩增。酵母 DNA 提取的主要挑战是细胞壁的破坏，这直接影响提取效率。在本研究中，我们使用了文献中报道的几种酵母基因组提取方法，例如玻璃珠法 [7] 、LiAc [8] 和 NaOH 法 [9] 。NaOH 法利用强碱性环境溶解和变性蛋白质，破坏细胞和核膜，并使核酸酶失活，从而无需影响其一级结构即可释放 DNA。另一方面，LiAc 法使用 LiAc 和 SDS 暂时透化酵母细胞，使 DNA 自由通过。SDS 是一种阴离子洗涤剂，可去除污染蛋白质，而乙醇可沉淀和浓缩 DNA。LiCl 遵循与 LiAc 类似的原理。玻璃珠法是一种物理方法，通过高速摇晃过程中的机械摩擦破坏细胞壁。本研究还测试了一种能够水解真菌细胞壁的酶 Lyticase，并优化了直接基因组提取的方案。
将核酸外切酶与 Cas9 融合可增强毕赤酵母中的同源重组
HR 比 NHEJ 慢得多，NHEJ 可以从 DSB 事件中拯救更多细胞。NHEJ 几乎不需要或根本不需要末端切除来直接重新连接 DSB 末端。相比之下，HR 需要短距离切除和长距离切除 DSB 以及供体来实施修复过程。此外，其他蛋白质也可能是 HR 修复途径的限制因素 [18, 19]。我们在此发现，在同时删除两个基因和整合多个片段期间，将 MRE11 与 CAS9 融合可提高 CFU 数量
通过培养基修改增加pichia pichia pichia pichia pichia grargine的产生
摘要。胰岛素是管理糖尿病的主要药物，特别是对于1型糖尿病患者。使用Pichia Pastoris产生一种长效的胰岛素类似物胰岛素甘醇蛋白是生物制药制造方面的显着进步。这项研究旨在提高Pichia Pastoris中胰岛素的产量。评估了这些培养基和维生素对细胞生长和胰岛素表达水平的影响。研究结果表明，在最小培养基（MM）和½基底盐培养基（BSM）中添加维生素会增加胰岛素甘眼产生。这项研究强调了维生素在最大化pichia Pastoris胰岛素产生的效率方面的关键作用。在MM和½BSM培养基中添加维生素可增强胰岛素的产生。
重组人乳头瘤病毒双价（16、18 型）疫苗（毕赤酵母）
抗 HPV 16 个月 7 265 264 99.62 (97.92, 99.99) 8571.45 (7437.30, 9878.50) 个月 12 265 265 100.00 (98.62, 100.00) 1577.93 (1408.00, 1768.40) 个月 24 242 242 100.00 (98.49, 100.00) 1916.92 (1668.50, 2202.40) 个月 36 235 235 100.00 (98.44, 100.00) 1161.28 (1007.80, 1338.10) 个月48 206 203 98.54 (95.80, 99.70) 762.37 (650.37, 893.66) 抗 HPV 18 第 7 个月 263 262 99.62 (97.90, 99.99) 5825.80 (5087.20, 6671.70) 第 12 个月 263 262 99.62 (97.90, 99.99) 3111.29 (2687.00, 3602.60) 第 24 个月 242 241 99.59 (97.72, 99.99) 1371.08 (1168.70, 1608.50) 第 36 个月 235 235 100.00 (98.44, 100.00) 1069.23 (903.80, 1264.90) 第 48 个月 206 201 97.57 (94.43, 99.21) 742.13 (625.20, 880.91) PPS 人群由接种 3 剂疫苗且在第 1 剂之前对相关 HPV 类型血清呈阴性的个体组成。采用基于假病毒的中和试验 (PBNA) 进行抗体检测；针对 HPV 16 和 HPV 18 的中和抗体的阳性截止值为 1:40。
SARS -COV -2尖峰mRNA疫苗序列在19次疫苗接种后长达28天，在血液中循环
严重的急性呼吸道综合征II型（SARS-COV-2）变体的出现导致了现有疫苗和抗体的保护下降，并且迫切需要采取广谱疫苗接种策略，以减少对预防和控制PANDECOGIC的压力。在这项研究中，SARS-COV-2β变体的受体结合结构域（RBD）通过糖化酵母平台成功表达。要采用更广泛的疫苗接种策略，以1：1的比例与Al（OH）3和CpG双佐剂混合了RBD-Beta和RBD-wild类型，用于对BALB/C小鼠进行免疫。这种二价疫苗刺激了强大的共轭抗体滴度和更广泛的中和抗体滴度。这些结果表明，RBD-BETA和RBD-WILD类型的二价疫苗可能是可能的广谱疫苗接种策略。
公共卫生和空中喷涂的监管含义
31。Zhang M.等。 “氧化石墨烯会诱导质膜损伤，活性氧的积累和脂肪酸谱在Pichia Pastoris变化”。 生态毒理学与环境安全132（2016）：372-378。Zhang M.等。“氧化石墨烯会诱导质膜损伤，活性氧的积累和脂肪酸谱在Pichia Pastoris变化”。生态毒理学与环境安全132（2016）：372-378。
引用Ruan S，He C，Wang A，Lin Y和Liang S（2025）在Pichia Pastoris中建立和应用RNAi系统。正面。 Bioeng。生物技术
（www.pichia.com），在这种酵母中成功表达了5000多种不同的蛋白质（Schwarzhans等，2017）。在P. p. p. p. p. p. p. p. p. p. opterer工程中的典型策略包括启动子工程（Nong等，2020; Lai等，2024; Zhou等，2023），信号肽修改（Lie等，2015），拷贝数的增加（Liu等，2020年； putteas et ease; wang al。 2019年），以及伴侣因子的引入（Zheng等，2019;Raschmanová等，2021）。 但是，基因组中的直接基因敲除可以导致P. P. P. P. P. p. p. pastoris代谢途径内的特定功能的丧失，从而破坏其整体代谢网络。 相比之下，利用合成生物学工具调节基因表达可能比传统的敲除或过表达方法更有效。 基因表达调节是许多细胞过程的基础（De Nadal等，2011； Nielsen和Keasling，2016年）。 当前，微生物中基因调节的主要工具是定期间隔短的短质体重复序列（CRISPR）系统的。 但是，使用CRISPR进行基因激活或抑制通常需要在CRISPR系统中蛋白质失活，添加激活或抑制域，以及仔细选择合适的SGRNA靶位点。 因此，CRISPR系统相对复杂且耗时。 此外，CRISPR的应用还受到宿主细胞接受度，异物蛋白质表达效率和目标位点选择准确性等因素的影响，这使得优化过程更加繁琐。在P. p. p. p. p. p. p. p. p. p. opterer工程中的典型策略包括启动子工程（Nong等，2020; Lai等，2024; Zhou等，2023），信号肽修改（Lie等，2015），拷贝数的增加（Liu等，2020年； putteas et ease; wang al。 2019年），以及伴侣因子的引入（Zheng等，2019;Raschmanová等，2021）。但是，基因组中的直接基因敲除可以导致P. P. P. P. P. p. p. pastoris代谢途径内的特定功能的丧失，从而破坏其整体代谢网络。相比之下，利用合成生物学工具调节基因表达可能比传统的敲除或过表达方法更有效。基因表达调节是许多细胞过程的基础（De Nadal等，2011； Nielsen和Keasling，2016年）。当前，微生物中基因调节的主要工具是定期间隔短的短质体重复序列（CRISPR）系统的。但是，使用CRISPR进行基因激活或抑制通常需要在CRISPR系统中蛋白质失活，添加激活或抑制域，以及仔细选择合适的SGRNA靶位点。因此，CRISPR系统相对复杂且耗时。此外，CRISPR的应用还受到宿主细胞接受度，异物蛋白质表达效率和目标位点选择准确性等因素的影响，这使得优化过程更加繁琐。在基因激活中，需要引入其他转录激活剂，而在基因抑制中，抑制因子必须进行精确设计和交付，以确保特定的调节。因此，尽管具有强大的基因调控能力，但CRISPR系统的操作复杂性和时间成本很高（Casas-Mollano等，2020； Chen等，2020）。相比，RNA干扰（RNAi）直接靶向RNA，影响蛋白质翻译，并为基因调节提供了更简单的方法。RNAi是一种由双链RNA（DSRNA）激活的基因沉默途径（Drinnenberg等，2009），由核糖核酸酶III（RNAseIII）酶处理，该酶加工成小型小型干扰RNA（sirnas）。dicer是一种酶，可将双链RNA裂解成小siRNA片段。这些siRNA随后引导参与RNA裂解的Argonaute蛋白靶向和裂解转录本，有效地沉降基因表达（Wang等，2019）。RNAi系统及其基本组件（dicer，argonaute和sirnas）通过简单的质粒转化步骤提供了一种更直接和灵活的方法来沉默基因。这减少了时间和精力，从而促进了各种菌株基因抑制策略的快速发展（Crook等，2014）。本报告详细介绍了P. P. P. P. P. rnai系统的第一个建立。可以创建这样的系统的假设是基于观察结果，即引入Argonaute蛋白和siRNA到P. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. p. apastoris。基因修饰的P. p. p. p. p. p. press这表明在P. Pastoris基因组中编码丁香样蛋白的基因的潜在存在。这项研究成功地证明了通过引入Hairpin RNA通过RNAi系统抑制单基因（增强的绿色荧光蛋白（EGFP））和双基因（EGFP /组氨酸（His））。
在Pichia Pastoris中有效产生的针对SARS-COV-2和新兴变体的二价亚基疫苗训练的免疫力在...
哺乳动物先天免疫反应具有称为“受过训练的免疫力”的一种记忆力（1）。训练免疫在疫苗功效中发挥的作用仍然未知。然而，受过训练的免疫力介导活衰减疫苗的非特异性保护作用，例如BCG疫苗对结核病的疫苗（2-5），已知可降低婴儿的全因死亡率（6-9）。发生这种情况是因为疫苗会诱导单核细胞的表观遗传和代谢重新布线，这使它们在随后刺激时会以增强的方式响应（2、3、10）。重要的是，这种作用超出了疫苗接种后的免疫激活的短时间框架，并且归因于骨髓造血干细胞壁细胞的变化，这导致粒细胞增强和髓样细胞的增强，这些细胞表现出表观遗传和代谢为训练的免疫疗法（5，11）。在COVID-19疫苗的随机临床试验中的比较表明，与基于mRNA的疫苗相比，基于腺病毒载体的疫苗可能具有非特异性保护作用，从而显着降低了全因死亡率和非covi剂，非促疾病的死亡率（12）。
Abdala COVID-19 疫苗的结构和功能糖基化
Abdala 是一种由毕赤酵母生产的 COVID-19 疫苗，基于 SARS-CoV-2 刺突的受体结合域 (RBD)。Abdala 目前已获准在多个国家使用，临床试验证实了其在预防重症和死亡方面的安全性和有效性。尽管毕赤酵母被用作基于蛋白质的疫苗的表达系统，但酵母糖基化在免疫原中仍然基本未被表征。在这里，我们表征了 N-糖结构及其在 Abdala 上的附着位点，并展示了与等效的哺乳动物衍生 RBD 相比，酵母特异性糖基化如何降低与 ACE2 受体和受体结合基序 (RBM) 靶向抗体的结合。受体和抗体结合的减少归因于 N-糖基化导致的构象动力学变化。这些数据强调了糖基化在疫苗设计中的关键重要性，并展示了单个糖如何通过蛋白质结构动力学影响宿主相互作用和免疫识别。