直接从痰液中直接从痰液中检测到结核病检测的流线型护理点测试。 5,6,Padmapriya Banada 2,#,Yingda L. Xie 2,#,Cameron Myhrvold 1,7,8,9,#,#,†1普林斯顿大学分子生物学系,普林斯顿新泽西州,新泽西州普林斯顿大学,08544,美国08544,美国,美国2公共卫生研究所,新吉尔特吉尔特尔医学院,新吉尔斯医学院,新泽西州,新泽西州,新泽西州。 Epidemiology of Microbial Diseases, Yale School of Public Health, New Haven, Connecticut, United States of America 4 Pulmonary, Critical Care, and Sleep Medicine Section, Yale School of Medicine, New Haven, Connecticut, United States of America 5 Centro Internacional de Entrenamiento e Investigaciones Médicas (CIDEIM), Cali, Colombia 6 Universidad Icesi, Cali, Colombia 7 Department of Chemical and Biological工程,普林斯顿大学,新泽西州普林斯顿大学,美国08544,美国8 Omenn-Darling Bio Giogineering Institute,普林斯顿大学,新泽西州普林斯顿大学,新泽西州,08544,美国9美国,普林斯顿大学,普林斯顿大学,普林斯顿大学,新泽西州,新泽西作者同样贡献#这些作者同样贡献†相应的作者:cmyhrvol@princeton.edu摘要结核分枝杆菌(MTB)是对全球健康的主要威胁,每年造成超过100万人死亡。我们试图开发一种基于CRISPR的等温测定法,再加上兼容,直接的样品处理技术,用于护理点。为了阻止病例的潮流并最大程度地提高了早期干预措施的机会,迫切需要在资源不足的地区负担得起,简单的结核病诊断手段。在这里,我们将重组酶聚合酶扩增(RPA)与CAS13A和CAS12A相结合,以创建两个并行的单锅测定,它们检测MTB的两个保守元素(IS6110和IS1081)和一个内部对照人类DNA。这些测定显示与横向流相兼容,并且很容易冻干。我们的最终测定在痰液中的各种细菌载荷(10 5至10 2 CFU/mL)上表现出敏感性。对于M. Bcg的M. Bovis bcg的M. BCG,测定法检测限为69.0(51.0 - 86.9)CFU/ML的MTB菌株H37RV为MTB菌株H37RV和80.5(59.4 - 101.6)CFU/ML。我们的测定法没有针对广泛的细菌/真菌分离株的交叉反应性。对13个盲痰样品的临床测试显示,与培养物相比,100%(6/6)的灵敏度和100%(7/7)的特异性。我们的测定法在临床样品中表现出与微生物黄金标准,结核病培养以及对核酸最先进的GenExpert MTB/RIF Ultra的敏感性。这项技术以快速且强大的格式简化了从样品提取到测定读数的诊断,这使其成为结合放大和检测的第一个测试,同时与横向流动和冻干兼容。
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