图5。集成的工作流解决方案,以支持过程开发和GMP环境。Resdnaseq定量SF9和杆状病毒DNA试剂盒是生物制药制造过程中杂质和污染物测试的集成工作流程的一部分。使用Applied Biosystems™PrepSeq™残留DNA样品制备试剂盒的使用Thermo Scientific™Pharma Flex™Flex 96深孔磁性颗粒处理器,可确保SF9和杆状病毒残留DNA的高恢复,并减少劳动力和较小的误差。Pharma Fisher Flex 96深孔磁性颗粒处理器可以一式三份处理多达24个样品,而使用手动方法一式三份的三个样本。RESDNASEQ试剂盒已在Applied Biosystems™7500快速实时PCR系统和Applied Biosystems™QuantStudio™5实时PCR系统上进行了验证。使用Applied Biosystems™Accuseq™实时PCR软件简化了数据分析,该软件提供了准确的定量和安全性,审核和电子签名功能,以帮助启用21 CFR第11部分的合规性。
*此程序专门适用于转染源自 Bac-to-Bac 系统 (Invitrogen) 的杆粒 DNA。我们使用的杆粒 DNA 通常使用标准小量制备程序生成,如 Bac-to-Bac 用户手册中所述。我们发现使用商用小量制备试剂盒或柱子没有好处。
仅用于研究使用。不适用于诊断程序。©2024 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。除非另有说明,否则所有商标都是Thermo Fisher Scientific及其子公司的财产。Taqman是在许可和许可下使用的Roche Molecular Systems,Inc。的商标。ext6773 0424
1. 每瓶接种 5x10 6 个 SF9 细胞,另留一个瓶作为阴性对照。2. 按照 A 部分中概述的方法,使用以下体积和量:10uL 杆状病毒 DNA(0.1ug/uL)2ug 质粒 DNA 1mL 转染缓冲液 B 5mL 未添加的 Grace 培养基洗涤液 1mL 转染缓冲液 A 5mL 未添加的 Grace 培养基洗涤液 7mL TMN/FH
1。Hong,M。Et。 al。,杆状病毒insect细胞系统的基因工程,以改善蛋白质的产生。 正面。 Bioeng。 Biotechnol。,2022。 2。 MA,H。等。 al。,Spodoptera frugiperda SF9细胞系是色夫病毒感染和病毒阴性细胞的异质种群:含有色齿病毒X基因变体和病毒阴性细胞Clone的细胞克隆的分离和表征。 病毒学,2019年。 3。 Brogee,P。,朝向C31INIT具有能力的SF9细胞系的发展。 UWSpace,2018年。 4。 Zitzmann,J。等。 al。,单细胞克隆可以选择更有生产力的果蝇Melanogaster S2细胞以进行重组蛋白表达。 生物技术。 REP。,2018。Hong,M。Et。al。,杆状病毒insect细胞系统的基因工程,以改善蛋白质的产生。正面。Bioeng。Biotechnol。,2022。2。MA,H。等。 al。,Spodoptera frugiperda SF9细胞系是色夫病毒感染和病毒阴性细胞的异质种群:含有色齿病毒X基因变体和病毒阴性细胞Clone的细胞克隆的分离和表征。 病毒学,2019年。 3。 Brogee,P。,朝向C31INIT具有能力的SF9细胞系的发展。 UWSpace,2018年。 4。 Zitzmann,J。等。 al。,单细胞克隆可以选择更有生产力的果蝇Melanogaster S2细胞以进行重组蛋白表达。 生物技术。 REP。,2018。MA,H。等。al。,Spodoptera frugiperda SF9细胞系是色夫病毒感染和病毒阴性细胞的异质种群:含有色齿病毒X基因变体和病毒阴性细胞Clone的细胞克隆的分离和表征。病毒学,2019年。3。Brogee,P。,朝向C31INIT具有能力的SF9细胞系的发展。UWSpace,2018年。4。Zitzmann,J。等。al。,单细胞克隆可以选择更有生产力的果蝇Melanogaster S2细胞以进行重组蛋白表达。生物技术。REP。,2018。REP。,2018。
仪器安全。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。82一般。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。82身体伤害。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 83电气安全。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。82身体伤害。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。83电气安全。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。83清洁和净化。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。84紫外线(UV)安全。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。84
ATCC衍生的SF9父母细胞系被解冻并传递,直到在适应SFRV减少的培养条件之前恢复到正常条件下恢复。通过在细胞颗粒和用过的培养基上进行基于反向转移酶(RT)PCR的测定法,常规监测培养物的生长和生存力,以及对SFRV信号的日志还原。降低SFRV 4周后,将所得培养物被镀至96孔板,而用过的培养基(未检测到RV信号后,确定的RV-无RV)用于促进克隆的生长。
类似的小分子CGMP是GC活性的产物,是动物中的另一个关键第二信使(16)。通过审查的序列分析,我们发现了一个相对保守的GC基序(17),与先前表征的AC基序(15)相邻,在TIR1/AFB的C末端区域(图1a)。为了测试TIR1/AFB生长素受体的潜在GC活性,我们使用了从SF9昆虫细胞中纯化的HIS-GFP-FLAG-TIR1,GST-AFB1以及GST-AFB5蛋白纯化了30
Novavax COVID-19 佐剂疫苗含有由杆状病毒感染的 Sf9(秋粘虫)昆虫细胞产生的重组 SARS-CoV-2 刺突蛋白和含有皂皮树(Quillaja saponaria Molina)皂苷的 Matrix-M TM 佐剂。其他成分包括胆固醇、磷脂酰胆碱、磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠二水合物、氯化钠、磷酸氢二钠七水合物、磷酸二氢钠一水合物、聚山梨醇酯 80 和注射用水。该疫苗还可能含有少量杆状病毒和昆虫细胞蛋白和 DNA。
