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将 Gαi3 鉴定为一种新型分子治疗剂……
本研究研究了G α i3在宫颈癌中的表达和潜在功能。生物信息学分析结合患者局部组织的结果表明，G α i3 在人宫颈癌组织和不同宫颈癌细胞中表达显著上调，并且与患者总体生存率和疾病特异性生存率较差相关。G α i3 的缺失导致显著的抗宫颈癌活性。在原发性或永生化宫颈癌细胞中，G α i3 shRNA 或 CRISPR/Cas9 引起的 G α i3 敲除/KO 在很大程度上阻碍了细胞增殖和迁移，并引发细胞凋亡。相反，异位 G α i3 过表达进一步增强宫颈癌的增殖和迁移。G α i3 沉默或 KO 后，原发性宫颈癌细胞中的 Akt-mTOR 活化显著降低，但在 G α i3 过表达后增强。进一步研究发现，在宫颈癌组织和细胞中，转录因子 GATA4 与 G α i3 启动子区的结合显著增强。GATA4 shRNA 可降低 G α i3 表达，而过表达 GATA4 后 G α i3 表达上调。体内实验中，G α i3 沉默或 KO 可显著抑制宫颈癌移植瘤的生长。在 G α i3 沉默/KO 宫颈癌移植瘤组织中检测到 G α i3 耗竭和 Akt-mTOR 失活。总之，上调的 G α i3 是宫颈癌的一个有价值的癌靶点。
小细胞肺癌
富含脯氨酸的15（PRR15）是一种主要以其在胎盘发育中的作用而闻名的蛋白质。这项研究研究了非小细胞肺癌（NSCLC）中PRR15的表达，功能明显和基础机制。与正常的肺实质相比，NSCLC组织中的PRR15表达显着升高，其表达较高与不良临床结局相关。单细胞RNA测序确认在恶性肿瘤细胞群中确认PRR15。PRR15的表达在NSCLC组织中升高，来自局部治疗的患者以及一组原发性和已建立的NSCLC细胞。PRR15使用SHRNA或CRISPR/CAS9介导的敲除的耗竭显着抑制了增殖和迁移，同时促进了各种NSCLC细胞的凋亡。相反，使用慢病毒构建体增强细胞增殖和迁移的异位PRR15过表达。机械研究涉及PRR15在Akt-MTOR信号通路的激活中。通过SHRNA或CRISPR/CAS9介导的敲除对PRR15表达的抑制导致AKT和S6K磷酸化降低，而PRR15过表达导致原代人NSCLC细胞中的Akt-S6K信号扩展。 使用异种移植模型的体内研究进一步验证了PRR15的致癌作用，这表明PRR15敲低抑制了肿瘤的生长并减弱了Akt-MTOR激活。 这些发现共同强调了PRR15作为NSCLC中新型的致癌驱动力和治疗靶标的潜力。通过SHRNA或CRISPR/CAS9介导的敲除对PRR15表达的抑制导致AKT和S6K磷酸化降低，而PRR15过表达导致原代人NSCLC细胞中的Akt-S6K信号扩展。使用异种移植模型的体内研究进一步验证了PRR15的致癌作用，这表明PRR15敲低抑制了肿瘤的生长并减弱了Akt-MTOR激活。 这些发现共同强调了PRR15作为NSCLC中新型的致癌驱动力和治疗靶标的潜力。使用异种移植模型的体内研究进一步验证了PRR15的致癌作用，这表明PRR15敲低抑制了肿瘤的生长并减弱了Akt-MTOR激活。这些发现共同强调了PRR15作为NSCLC中新型的致癌驱动力和治疗靶标的潜力。
使用扰动筛选对癌症中的合成致死相互作用进行通路驱动分析
当直接针对驱动基因不可行时，合成致死为开发有效的癌症治疗干预措施提供了一种有前途的方法。在本研究中，我们全面分析了大规模 CRISPR、shRNA 和 PRISM 筛选，以确定泛癌症和 12 种单独癌症类型中潜在的合成致死 (SL) 相互作用，使用一种新的计算框架，该框架利用关键驱动基因的生物学功能和信号通路信息来减轻不同癌细胞系中背景基因改变的混杂影响。这种方法已成功鉴定出几种假定的 SL 相互作用，包括泛癌症中的 KRAS-MAP3K2 和 APC-TCF7L2，以及肝癌、血癌、皮肤癌和胃癌中的 CCND1-METTL1、TP53-FRS3、SMO-MDM2 和 CCNE1-MTOR。此外，我们通过 PRISM 药物筛选提出了几种 FDA 批准的针对各种癌症类型的癌症靶向药物，例如用于治疗 VHL 突变肾癌的卡巴他赛和用于治疗 NRAS 或 KRAS 突变肺癌的阿来替尼。利用通路信息可以增强 shRNA 和 CRISPR 筛选的一致性，并提供临床相关发现，例如 SRC 抑制剂达沙替尼对 WNT 信号通路突变的结肠直肠癌患者的潜在疗效。这些分析表明，考虑信号通路信息可以识别更有希望的 SL 相互作用。
敲低胎盘主要的促进剂超家族域，含有2A的孕妇小鼠降低了胎儿脑的生长和磷脂docosahexaenoic Acid
摘要：简介：Docosahexaenoic Acid（DHA）是n -3长链多不饱和脂肪酸，对于胎儿发育至关重要，胎盘通过胎盘从母亲传输到胎儿。含有2A（MFSD2A）的主要促进剂超级家族型溶血磷脂酰胆碱（LPC）转运蛋白位于人胎盘的合成型胞植物细胞的基础质膜中，人胎盘的胎盘膜细胞和MFSD2A表达与人类表达的人类表达与昏迷的corn lumbilical Corncly lppc-lpc-lpc-dha相关。我们假设孕妇小鼠中MFSD2A的胎盘特异性敲低会减少胎儿脑中的磷脂DHA的积累。方法：用表达EGFP的慢病毒（E3.5）的小鼠胚泡（E3.5），该慢病毒含有靶向MFSD2A或非编码序列（SCR）的shRNA，然后转移到假孕妇中。在E18.5时，称重胎儿，并收集其胎盘，大脑，肝脏和血浆。MFSD2A mRNA表达通过QPCR在大脑，肝脏和胎盘中测定，以及通过LC-MS/MS量化磷脂DHA。结果：与SCR对照相比，在E18.5（n = 45，p <0.008）时，靶向MFSD2A的shRNA在E18.5（n = 45，p <0.008）时将胎盘mRNA MFSD2A的表达降低了38％。MFSD2a在胎儿脑和肝脏中的表达不变。胎儿脑体重减少了13％（p = 0.006）。体重，胎盘和肝脏重量不受影响。胎儿脑磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺DHA含量较低，胎盘特异性MFSD2A敲低的胎儿含量较低。这些数据提供了机械证据，表明胎盘MFSD2A介导LPC-DHA的母体 - 饮食转移，这对于大脑生长至关重要。结论：LPC-DHA转运蛋白MFSD2A表达表达的胎盘特异性减少导致胎儿脑体重降低，胎儿大脑中磷脂DHA含量降低。
全球利用RNA编辑技术治疗疑难杂症的现状
治疗方法（作用机制） 1）抑制产生毒性蛋白质的DNA/RNA（ASO、shRNA等）⇒Tofersen，一种用于治疗ALS的ASO（FDA于2023年批准） 2）编辑异常的DNA/RNA使其正常化（CRISPR系统，一项诺贝尔奖获奖技术）⇒镰状细胞病/β-地中海贫血的体外基因组编辑疗法（MHRA于2023年批准） 3）将DNA/RNA引入细胞以补充（过度表达）缺失的蛋白质⇒使用AAV9过度表达用于SMA的正常SMN基因（PMDA于2020年批准）
协议
体内-jetpei®是一种线性聚乙基亚胺（PEI），它辅助有效的核酸（DNA，SHRNA，siRNA，miRNA，miRNA，miRNA，寡核苷酸，…）使用各种递送途径递送到多种组织中：在静脉内施用后，将高水平的核酸输送到肺中。静脉注射后，其他器官，例如唾液腺，心脏，脾脏和肝脏也是针对的。此外，体内-Jetpei®是用于局部基因和siRNA递送的有效载体，例如在皮肤上肿瘤内或局部应用。使用体内-jetpei®的出版物可以在polyplus-transfection数据库中找到，可在https://www.polyplus-sartorius.com/polyplus-comes/polyplus-resource/cell-cell-transfection-database
Silening和Gene Edition
沉默和基因版是两个有前途的分子生物学工具，它们在功能基因组学研究中变得越来越重要。基因沉默作用于信使RNA（mRNA）的水平，并且可能是瞬态或稳定的，具体取决于所使用的分子类型。临时沉默通常是由小的干扰RNA（siRNA）介导的，后者与靶mRNA结合，并借助酶复合物RISC导致其降解，因此抑制了特定基因的表达，因为不会发生翻译过程（图1）。另一方面，稳定的沉默通常用作工具，作为一种短发夹RNA（SHRNA），通常由DNA载体编码，并通过质粒转染或病毒转导将其引入细胞中。DNA载体带有转录本信息以及选择标记（例如抗生素耐药性和/或荧光标记），使用了
CaMKKβ 调节增殖、细胞凋亡和糖酵解...
我们从北京维通利华实验动物技术有限公司购买20只7周龄雄性BALB/c裸鼠。动物饲养在25±3 ℃、60%湿度、12 h光照/黑暗循环的受控环境中。小鼠自由进食和饮水。通过右大腿皮下注射shRNA转染HepG2细胞形成异种移植瘤。将小鼠分为两组（n=8）：对照组和CaMKK β -shNRA组。每5天测量一次肿瘤体积，直至30天。通过腹腔注射戊巴比妥钠（200 mg/kg体重）处死小鼠。收获肿瘤用于后续实验。所有动物实验均经川北医学院附属医院伦理委员会批准（编号2020053），并按照美国国立卫生研究院（NIH）的规定进行
隐形转基因使 CAR-T 细胞能够逃避宿主的免疫反应
摘要 背景 过继细胞疗法，例如嵌合抗原受体 (CAR)-T 细胞疗法，已改善血液系统恶性肿瘤患者的治疗效果。目前，FDA 批准的六种 CAR-T 细胞产品中有四种使用基于 FMC63 的 α CD19 单链可变片段（源自鼠单克隆抗体）作为细胞外结合结构域。临床研究表明，患者对自体 CAR-T 细胞的非自身 CAR 成分或同种异体 CAR-T 细胞的供体特异性抗原产生体液和细胞免疫反应，这被认为可能会限制 CAR-T 细胞的持久性和重复给药的成功率。 方法 在本研究中，我们实施了一种一次性方法，通过表达与抗原加工相关的转运蛋白的病毒抑制剂 (TAPi) 结合编码针对 II 类 MHC 转录激活因子 (CIITA) 的 shRNA 转基因，同时减少抗原呈递和两类主要组织相容性复合体 (MHC) 的表面表达，从而防止对工程 T 细胞的排斥。通过流式细胞分析和混合淋巴细胞反应试验在体外筛选出最佳组合，并在白血病和淋巴瘤小鼠模型中在体内进行验证。使用患者样本在自体环境中评估功能，并使用同种异体小鼠模型在同种异体环境中评估功能。结果 Epstein-Barr 病毒 TAPi 和靶向 CIITA 的 shRNA 的组合可有效降低 α CD19“隐形”CAR-T 细胞中的细胞表面 MHC I 类和 II 类，同时保留体外和体内抗肿瘤功能。使用先前接受自体 α CD19 CAR-T 细胞治疗的患者的 T 细胞进行的混合淋巴细胞反应试验和 IFN γ ELISpot 试验证实，表达隐形转基因的 CAR T 细胞可逃避同种异体和自体抗 CAR 反应，这在体内得到了进一步验证。重要的是，我们注意到接受过多次 CAR-T 细胞输注的患者中存在抗 CAR-T 细胞反应，而这种反应在体外用含有隐形转基因的自体 CAR 进行再刺激时会降低。结论总之，这些数据表明，所提出的隐形转基因可能会降低自体和同种异体细胞疗法的免疫原性。此外，患者数据表明，重复剂量的基于 FMC63 的自体 α CD19 CAR-T 细胞可显著增加这些患者的抗 CAR T 细胞反应。
原创 香叶基香叶基化通过YAP信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭
摘要：香叶基香叶基化（GGylation）是信号蛋白的一个脂质修饰过程，目前关于GGylation信号对胃癌细胞增殖和迁移的影响知之甚少。本研究发现，甲羟戊酸通路抑制剂阿托伐他汀和香叶基香叶基转移酶I抑制剂GGTI-298抑制GGylation可抑制胃癌AGS细胞的增殖和迁移。在寻找信号通路作用的过程中，我们观察到转录激活因子、hippo通路下游效应子YAP被GGylation抑制，通过检测其已知靶基因CYR61和CTGF的mRNA水平及其向细胞核的转位来评估。 shRNA敲低YAP对胃癌AGS细胞增殖和迁移的影响与抑制GGylation类似，提示GGylation信号通过激活YAP促进胃癌细胞增殖和迁移，本研究为胃癌治疗提供了一种潜在的新靶向途径。