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体内 CRISPR/Cas9 筛选确定 Pbrm1 是小鼠髓系白血病发展的调节因子
对于表观遗传汇集筛选，对具有强力霉素诱导的 Cas9 等位基因 (KH2/iCas9;杰克逊实验室，库存编号 029415) 的 8 至 12 周龄小鼠实施安乐死，并对总共 100 万个 Lin – Sca-1 + c-Kit + (LSK) 细胞进行分选并用含有表观遗传 sgRNA 文库的慢病毒进行体外转导 (补充表 1) 14，然后移植到 B6/129 受体小鼠中 (有关更多详细信息，请参阅补充材料)。简而言之，LSK 细胞在 96 孔圆底微孔板中培养，培养基为 StemSpan 无血清扩增培养基（StemCell Technologies），其中添加了 100 ng/mL 重组鼠干细胞因子 (rmSCF)、10 ng/mL rm 白细胞介素-11 (IL-11) 和 5 ng/mL rmFlt3l (R&D Systems)，并以低感染复数共转导，慢病毒表达 Tet2 sgRNA (Tet2_e10.1；完整序列见补充表 1) 和表观遗传 sgRNA 文库，以实现 ~50% 的感染效率。24 小时后，将培养的细胞汇集、洗涤
塔塔纪念中心高级...
电话号码：91-22-27405000/6068（该部门的授予学院）编号ACTREC/ADVT/182/2024 13/11/2024 ACTREC（2024）TATA纪念中心是造血干燥疗法造血细胞移植护理奖学金，是国家中心，该中心是在癌症中从事治疗，研究和教育的原子能量部门的行政责任。癌症的高级治疗，研究和教育中心（ACTREC）是塔塔纪念中心（TMC）的最先进的研发卫星。这是一家主要医院，拥有广泛的医学肿瘤学领域患者全部护理的设施，包括造血干细胞移植，手术和放射治疗。造血干细胞移植是血液恶性肿瘤最重要的癌症治疗方式之一。我们认为，造血干细胞移植护理的超级专业奖学金将帮助训练有素的护士对包括家人在内的患者护理充满信心和责任感。本课程的奖学金还将帮助其他地区和即将到来的将军和癌症医院，以适当地升级其人力，以应对接受化学疗法和造血干细胞移植的患者的挑战。
sgk1抑制作用减弱了...
该梅奥诊所机构审查委员会的书面知情同意书后，生成患者特定的IPSC - 批准的研究（09-006465），IPSC是从4个诊断为LQTS的4个无关患者的外周血单核细胞中产生的；每个在KCNQ1中都有不同的LQTS促性致病变体（c.760g。a，p.v254m），kcnh2（c.1810g。a，p.g604s）或scn5a（c.3965c。t，P.P1332L和C.4868G。A，P.R1623Q）。使用细胞收益2.0 sendai重编程试剂盒（Thermo Fisher Scientifuc，MA; MA; A16517）通过sendai病毒转导重编程，通过仙台病毒转导编程。在感染后21天内采摘10个菌落，并在克隆上扩展以进行进一步分析。crispr（定期间隔短的短质体重复序列）/cas9基因编辑/变体校正，等源性对照（IC）IPSC线是由Applied Stemcell（Milpitas，CA）设计的。所有IPSC克隆均被确定以表达TRA-1-60，SSEA-3，OCT4和Nanog多能标记，并具有正常的核型。通过sanger测序确定了患者衍生的IPSC线中的杂合致病变异和IC线中特定变体对野生型的遗传校正。
通过引入造血祖细胞的无馈膨胀步骤
EB培养基是基于Stapel培养基（31，32）（表1）。要生成EB，使用细胞释放缓冲液（1/1000 EDTA/PBS）将IPSC细胞145酶脱离，并通过使用EB介质（表1）吸管以147天0-1（表2）来收集细胞146的团块146。通过70 µm大小的滤网将收集的细胞团过滤到50ml 148无菌管中。通过10ML血清学移液移除细胞团，并将其轻轻添加到超低149附件培养皿中（Sigma Aldrich，CAT＃CLS3261），在37°C下保持在37°C，将5％CO2 150放置在轨道振荡器上（Scientififix，CAT＃NBT-101SRC）旋转32rpm。每100mm 151盘，将2至3×10 6个细胞用于EB形成。媒体更改策略，包括152个分化因子的细节，如表2所述。为了在EB组153步骤中提高细胞活力，将0.2 nm岩石抑制剂Y-27632（Stemcell Technologies，＃72307）添加到媒体154天0-1中，并从那时起停产。从第7天开始，IPSC衍生的造血细胞开始从胚胎体作为悬浮细胞出现。156