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补充材料
手术获得的原发性肿瘤组织样品和相应的连续血样品，分别获得了体细胞突变筛查和ctDNA监测。使用三组结直肠癌患者（CRC）的三个不同平台对原发性肿瘤进行了测序分析。分别分析了11、27和14例患者的肿瘤样本，分别为1、2和3组。使用Clearseq综合癌症小组（Agilent Technologies，Inc.，Santa Clara，CA）使用Illumina HISEQ 2000 Sequencer（Illumina，Inc。，San Diego，CA）分析集1，该基因针对151个疾病相关的基因（Maintext的参考文献34）。 分别使用ION Proton™和ION S5™系统（Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA）分析了集2和3，其定制面板的靶向39个基因，这些基因经常在CRC中改变。 1集1样品在我们的先前研究中进行了分析，该研究考虑了原发性肿瘤的三个区域以及外周血单核细胞（PBMCS）（总共四个样品）的相应DNA，以评估肿瘤内遗传异质性对循环肿瘤DNA DNA（CTDNA）（CTDNA）（参考文本34）的影响。 在该研究中，结果表明，肿瘤遗传异质性并不是CTDNA分析的主要障碍，前提是从肿瘤的单个区域中选择具有足够变异等位基因频率（VAF）的体突变。 本研究中原发性肿瘤测序的最高优先级是检测一些具有高VAF的体细胞突变。集1，该基因针对151个疾病相关的基因（Maintext的参考文献34）。集2和3，其定制面板的靶向39个基因，这些基因经常在CRC中改变。1集1样品在我们的先前研究中进行了分析，该研究考虑了原发性肿瘤的三个区域以及外周血单核细胞（PBMCS）（总共四个样品）的相应DNA，以评估肿瘤内遗传异质性对循环肿瘤DNA DNA（CTDNA）（CTDNA）（参考文本34）的影响。在该研究中，结果表明，肿瘤遗传异质性并不是CTDNA分析的主要障碍，前提是从肿瘤的单个区域中选择具有足够变异等位基因频率（VAF）的体突变。本研究中原发性肿瘤测序的最高优先级是检测一些具有高VAF的体细胞突变。此外，三个肿瘤区域中通常检测到的突变仅限于一组基因，其中包括TP53，APC，KRAS，PIK3CA，FBXW7和BRAF。
补充表1
A.64/83（77.1％）临床医生同意延迟。 1）31/64（48.4％），17/64（26.6％）和16/64（25.0％）临床医生建议分别延迟4、8和6周，用于高风险复发的患者（淋巴结数≥4，TNBC或HER2阳性，Ki-67≥30％）。 2）19/64（29.7％），17/64（26.6％），10/64（15.6％）和10/64（15.6％）临床医生建议分别延迟8、12、4和6周，和8/64（12.5％）（12.5％）的直接内分泌风险（lumlimal 7 luminal a luminal a luminal a luminal a l lumallials a lumall fimall）nod nod nod nod nod nod nod， <20％）。 B. 19/83（22.9％）临床医生不建议术后辅助治疗延迟。 2。 在流行病期间，出于任何原因可以暂停术后化疗多长时间？64/83（77.1％）临床医生同意延迟。1）31/64（48.4％），17/64（26.6％）和16/64（25.0％）临床医生建议分别延迟4、8和6周，用于高风险复发的患者（淋巴结数≥4，TNBC或HER2阳性，Ki-67≥30％）。2）19/64（29.7％），17/64（26.6％），10/64（15.6％）和10/64（15.6％）临床医生建议分别延迟8、12、4和6周，和8/64（12.5％）（12.5％）的直接内分泌风险（lumlimal 7 luminal a luminal a luminal a luminal a l lumallials a lumall fimall）nod nod nod nod nod nod nod， <20％）。B.19/83（22.9％）临床医生不建议术后辅助治疗延迟。 2。 在流行病期间，出于任何原因可以暂停术后化疗多长时间？19/83（22.9％）临床医生不建议术后辅助治疗延迟。2。在流行病期间，出于任何原因可以暂停术后化疗多长时间？
补充材料
图 S2。反式配对切口方法导致人类 HSPC 中的 HDR 效率低下。(A) 使用 CRISPR/Cas9、单切口或反式配对切口方法在 HEK293T 细胞中将 T2A-mCherry 插入人类 B2M 基因座的靶向策略。使用没有 (pDonor) 或有 2 个靶序列 (TS) (pDonor-Nick 2) 的供体质粒。靶向 B2M 的常见 sgRNA 以红色表示。使用所示方法靶向 B2M 基因座六天后，对 mCherry + HEK293T 细胞的百分比进行 FACS 分析。图表总结了通过 FACS 测量的 mCherry + (HDR) HEK293T 细胞的频率。(B) 使用 CRISPR/Cas9、单切口或反式配对切口方法在人类 HSPC 中将 T2A- mCherry 插入人类 B2M 基因座。使用单链 (ss) AAV 和不含 (scAAV) 或含 2 个 TS 的自互补 (sc) AAV (scAAV-Nick 2 ) 作为供体模板。FACS 分析显示靶向三天后 mCherry + HSPC 的频率。条形图显示 HDR (mCherry + ) 效率。数据显示为四次独立实验的平均值 ± SD。
补充信息
名称t-测试注释RNP1：全长t（2）= 7.03，p = 0.0023显着不同的RNP1：GQ Stall t（2）= 18.39 = 18.39，p <0.001 p <0.001 rnp1：dcas9 stall t（2）= 22.13，p <0.001显着不同，p <0.001显着不同的rnp2：pefly rnp2：pull Rnp2：2）= 2） RNP2：GQ Stall t（2）= 22.47，p <0.001显着不同的RNP2：DCAS9 Stall t（2）= 15.14，p <0.001，p <0.001显着不同的RNP3：全长t（2）= 9.88，p <0.001显着不同（2）= 21.36，p <0.001显着不同的RNP4：全长t（2）= 16.93，p <0.001显着不同的RNP4：GQ Stall t（2）= 16.56 = 16.56，p <0.001显着不同的RNP4：DCAS9 Stall T（DCAS9 Stall T（2）= 20.27，P <0.001 = 20.27，p <0.001 = 20.001 = 2 Fulter T（2） p <0.001显着不同的RNP5：GQ失速t（2）= 24.08，p <0.001显着不同的RNP5：DCAS9 Stall t（2）= 18.06 = 18.06，p <0.001显着不同的RNP6：全长T（2）显着t（2）= 3.38，p <0.001显着不同的RNP6：p <0.001 = 0.001 = 0.001 = 12.59，= 1.59，= 12.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5。 RNP6：DCAS9 Stall t（2）= 28.39，p <0.001显着不同的RNP7：全长t（2）= 6.53，p = 0.0028显着不同的RNP7：GQ Stall t（2）= 20.38，p <0.001，P <0.001显着不同的RNP7：dcas9 stall talp7：dcas9 stall tall t dive <0.00.00.93 = 27.93
