烟草变换。 div>生成转基因线T0。 div>该试验的烟草线对象是由K326商业品种的烟草植物的CRISPR/CAS9技术产生的。 div>为此,由烟草植物的农杆菌根源介导的,具有相应的转化载体,其中包含DSRED和NPTII蛋白的转录单位(选择标记物)(选择标记),CAS9蛋白的转录单位,以及用于辅助辅助的转录单元的转录单位,以辅助构图。 div>
摘要 帽结合蛋白 eIF4E 通过与 eIF4G 相互作用构成 eIF4F 复合物的核心,该复合物在 mRNA 的环化及其随后的帽依赖性翻译中起关键作用。除了在 mRNA 翻译起始中的基本作用外,还描述或提出了 eIF4E 的其他功能,包括充当前病毒因子和参与性发育。我们使用 CRISPR/Cas9 基因组编辑生成了甜瓜 eif4e 敲除突变株系。编辑在甜瓜中有效,因为我们在 T0 代就获得了第一个 eIF4E 外显子中单核苷酸纯合缺失的转化植物。分离 F2 代的编辑和非转基因植物接种了摩洛哥西瓜花叶病毒 (MWMV);纯合突变植物表现出病毒抗性,而杂合和非突变植物被感染,这与我们之前对 eIF4E 沉默植物的结果一致。有趣的是,T0 和 F2 代的所有纯合编辑植物都表现出雄性不育表型,而与野生型植物杂交则恢复了育性,表明雄性不育表型的分离与 eif4e 突变的分离之间存在完美的相关性。对甜瓜雄花沿连续发育阶段的形态学比较分析表明,小孢子母细胞和绒毡层在减数分裂后发育异常,突变体和野生型的绒毡层降解时间明显不同。RNA-Seq 分析确定了花粉发育中的关键基因,这些基因在 eif4e/eif4e 植物的花中下调,并表明 eIF4E 特异性 mRNA 翻译起始是甜瓜雄配子形成的限制因素。
在过去几年中,在植物中使用基于RNA的CAS9基因组编辑的进展一直很快。基因组编辑的理想应用是基因靶向(GT),因为它允许广泛的精确修饰。但是,这仍然是不具备的,尤其是在关键农作物中。在这里,我们使用Planta策略描述了CAS9目标位置的成功,可遗传的基因靶向,但使用小麦矮人病毒复制品未能实现相同的方法,以增加维修模板的拷贝数。没有复制子,我们能够删除目标基因的150 bp的编码顺序,同时将框架内麦克利融合在一起。从14种原始转基因植物开始,两家植物似乎具有所需的基因靶向事件。从其中一种T0植物中,确定了三个独立的基因靶向事件,其中两个是可遗传的。当包括复制子时,产生了39种T0植物,并显示为修复模板的高拷贝数。然而,尽管与非修复策略相比,T1筛选的17条线没有引起显着或可遗传的基因靶向事件。调查表明,复制子方法创建的高拷贝数量的高拷贝数导致假阳性PCR结果,在序列水平上与GT研究广泛使用的连接PCR屏幕中的真实GT事件无法区分。在成功的非修复方法中,在T1中获得了可遗传基因靶向事件,随后,发现T-DNA与靶向基因座有关。因此,靶标和供体位点的物理接近可能是成功基因靶向的一个因素。
利用选择标记鉴定转化植物,并筛选 T-DNA 拷贝数。通过扩增子测序鉴定编辑的 T0 植物(Clement 等人,2019 年;Illumina MiSeq 系统指南,2018 年;Illumina MiSeq 系统指南,2019 年),自交,并通过扩增子测序分析所得的 T1 植物以确认编辑。进行了额外的 PCR 检测,以确认不存在 T-DNA 插入物和质粒骨架(Applied Biosystems 用户公告 #2)。选择包含所需编辑但没有 T-DNA 或质粒骨架的纯合 T1 植物 P227933.30 进行延续,并将其命名为 GM200007。T1 植物不含外来 DNA,在 [ ] 基因中含有纯合缺失。表 1. 用于创建 GM200007 大豆的转化载体 F137620 的遗传元件
甜罗勒(Ocimum Basilicum)是一种经济上重要的同二倍二磷脂(2n = 4 x = 48)草药,其全球产量受到质感生物营养性卵菌造成的质状疾病的威胁,peronospora belbahrii。通过CRISPR/CAS9的易感性诱变产生抗病品种,目前是维持偏爱性状的最有前途的策略之一,同时提高疾病抗性。先前的研究已经确定了拟南芥DMR6(抑制霉菌6)是降低霉菌造成的冰淇淋病原体透明质透明质球拟南芥拟南芥所需的S基因。在这项研究中,在流行的甜蜜罗勒品种基因诺植物中鉴定出了DMR6的甜罗勒同源物DMR6,发现存在于基因组中具有高拷贝数,并且在变体中具有多态性。生成了一个或两个靶向OBDMR6变体保守区域的单个指南RNA(SGRNA)的CRISPR/CAS9构建体,并用于通过农业细菌介导的转化来转化Genoveser。56 T0线,并通过使用CRISPR编辑(ICE)软件的干扰来分析OBDMR6片段的Sanger测序色谱图检测到OBDMR6的突变。在靶向位点中包含突变的54条线中,13个indel百分比大于96%,表明OBDMR6几乎完整的敲除(KO)。在从三个独立的T0线中得出的T1分离种群中鉴定出了由ICE确定的几乎完全的OBDMR6 KO的三个代表性转基因游离线。使用扩增子深测序确认突变。与野生型植物相比,对上述T1系的T2种子进行了疾病测定法显示,Sporangia的产生减少了61-68%,通过定量PCR(QPCR)确定的相对病原体生物量减少了69-93%。 这项研究不仅产生了无基因的甜罗勒品种,具有改善的霉菌耐药性,而且还有助于我们对甜质p的分子相互作用的理解。 belbahrii。疾病测定法显示,Sporangia的产生减少了61-68%,通过定量PCR(QPCR)确定的相对病原体生物量减少了69-93%。这项研究不仅产生了无基因的甜罗勒品种,具有改善的霉菌耐药性,而且还有助于我们对甜质p的分子相互作用的理解。belbahrii。
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51 岁的白人心理学家 S 女士因 eGFR 为 47 ml/min 和蛋白尿为 1.7 g/d 而就诊。既往病史包括高胆固醇血症、2005 年切除的黑色素瘤和复发性下腹部疼痛。对后者进行广泛检查并未发现特定原因;特别是,排除了乳糜泻和炎症性肠病。体重指数为 24.5 kg/m 2,她不吸烟,服用 12 mg 坎地沙坦后血压低于 130/80 mm Hg。肾活检显示 IgA 肾病(MEST 评分 M0、E0、S1、T0、C0)。坎地沙坦剂量上调至 36 mg/d,并添加 12.5 mg 氢氯噻嗪。血压降至 120/80 mm Hg 以下,4 个月后 eGFR 为 44 ml/min,蛋白尿降至 1.36 g/d。她接受了饮食咨询,并被建议从事耐力活动。
话语分析研究文档中的句子orga-nibibal,旨在揭示其潜在的结构信息。关于对话话语解析的现有作品主要使用仅编码模型和复杂的De-编码策略来提取结构。尽管大型语言模型(LLMS)的最新进展,但直接将这些模型应用于解剖学解析还是具有挑战性的。为了充分利用LLM中丰富的语义和话语知识,我们建议使用文本到文本范式将分析转变为一代任务。我们的方法是直觉的,不需要修改LLM体系结构。对STAC和Molweni数据集的实验结果表明,诸如T0之类的序列模型可以很好地表现。值得注意的是,我们改进的基于过渡的序列到序列系统在Molweni上实现了新的最新性能。此外,我们的系统可以生成更丰富的话语结构,例如图形,而以前的方法主要限于树木。1
研究所概况 伊法卡拉卫生研究所 (IHI) 是非洲领先的研究机构,在开发、测试和验证卫生创新方面拥有良好的记录。在研究、培训和服务的核心战略任务的推动下,该研究所的工作范围广泛,涵盖生物医学和生态科学、干预研究、卫生系统研究和政策翻译。 职位摘要 伊法卡拉卫生研究所正在寻找合格的研究人员加入 Transmission Zero 项目。该职位要求研究人员是分子生物学专家,专攻生物技术和相关研究,需要对分子生物学技术有深入的了解。在实习期间建立的能力和贡献将大大推动伊法卡拉卫生研究所 (IHI) 和坦桑尼亚的转基因研究进展,以控制和消除疟疾。Transmission Zero (T0) 是 IHI 的一项全球疟疾研究计划,旨在开发创新的基因工具来阻止疟疾在非洲的传播。 职责和责任
