利用选择标记鉴定转化植物,并筛选 T-DNA 拷贝数。通过扩增子测序鉴定编辑的 T0 植物(Clement 等人,2019 年;Illumina MiSeq 系统指南,2018 年;Illumina MiSeq 系统指南,2019 年),自交,并通过扩增子测序分析所得的 T1 植物以确认编辑。进行了额外的 PCR 检测,以确认不存在 T-DNA 插入物和质粒骨架(Applied Biosystems 用户公告 #2)。选择包含所需编辑但没有 T-DNA 或质粒骨架的纯合 T1 植物 P227933.30 进行延续,并将其命名为 GM200007。T1 植物不含外来 DNA,在 [ ] 基因中含有纯合缺失。表 1. 用于创建 GM200007 大豆的转化载体 F137620 的遗传元件