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用CRISPR-CAS12和CRISPR-Cas13
摘要：植物中的病毒感染威胁粮食安全。因此，需要简单有效的病毒检测方法，以采用可以防止病毒扩散的早期措施。然而，基于聚合酶链反应（PCR）扩增病毒基因组的当前方法需要实验室条件。在这里，我们利用了CRISPR-CAS12A和CRISPR-CAS13A/D系统来检测三种RNA病毒，即烟草的烟叶病毒，烟草蚀刻病毒和马铃薯病毒X，在Nicotiana Benthamiana植物中。我们应用了CRISPR-CAS12A系统来检测由PCR或等温扩增产生的病毒DNA扩增子，并且在混合感染的植物中也进行了多重检测。此外，我们调整了检测系统以绕过昂贵的RNA纯化步骤，并获得带有横向流条的可见读数。最后，我们应用了CRISPR-CAS13A/D系统直接检测病毒RNA，从而避免了进行前置步骤的必要性，并获得了随病毒载荷缩放的读数。这些方法允许在收获叶片后半小时内进行病毒诊断的性能，因此可能与可灭绝的应用有关。关键词：核酸检测，CRISPR诊断，多重诊断，植物病毒■简介
电穿孔后跨膜电压的长期变化受非选择性漏电流和离子通道活化之间的相互作用控制
电穿孔会导致细胞膜通透性暂时增加，并导致兴奋细胞和非兴奋细胞的跨膜电压 (TMV) 发生长时间变化。然而，这些 TMV 变化的机制仍有待完全阐明。为此，我们使用 FLIPR 膜电位染料将两种不同的细胞系暴露于单个 100 µ s 电穿孔脉冲后，在 30 分钟内监测 TMV。在表达极低水平内源性离子通道的 CHO-K1 细胞中，脉冲暴露后的膜去极化可以用非选择性漏电流来解释，这种漏电流一直持续到膜重新密封，使细胞能够恢复其静止的 TMV。在表达多种不同离子通道的 U-87 MG 细胞中，我们意外地观察到初始去极化阶段之后的膜超极化，但仅在 33 ◦ C 时发生，而在 25 ◦ C 时未发生。我们开发了一个理论模型，该模型得到了离子通道抑制剂实验的支持，该模型表明超极化在很大程度上可归因于钙激活钾通道的激活。离子通道激活与 TMV 和细胞内钙的变化相结合，参与各种生理过程，包括细胞增殖、分化、迁移和凋亡。因此，我们的研究表明离子通道可能是影响电穿孔后生物反应的潜在靶点。
1型糖尿病的儿童和青少年的地中海饮食依从性和血糖控制介导的植物免疫
了解CNC@PDA@Zn 2+诱导的NSLTP2定位变化的功能意义，我们测试了NSLTP2的抗病毒功能。虽然NBLTP1在TMV感染中的作用得到很好的特征，但我们系统地探索了NSLTP2在TMV感染中的作用。应力表达分析表明，在2 dpi的接种叶中，NSLTP2的表达与TMV-GFP显着增加，其表达在6 dpi的全身性叶片中也显着升高（图S7），这表明NSLTP2在抗病毒防御中的潜在作用。接下来，我们利用烟草病毒（TRV） - 介导的基因沉默来分析NSLTP2在TMV抗性中的作用。随后，本尼亚氏菌叶具有TRV1 + TRV2（TRV：00）或TRV1 + TRV2：NSLTP2：NSLTP2（TRV：NSLTP2）12天，RT- qPCR分析显示，NSLTP2在TRV中的NSLTP2表达显着 5b）。 然后，我们用TMV-GFP机械地接种了第6和7叶，并观察到在2、4和6 DPI下紫外线下的GFP运动以跟踪TMV分布。 如图所示 5A，在接种叶片的接种叶片中观察到GFP荧光信号，而QPCR分析表明，沉默的植物中TMV-GFP核酸水平明显高于对照组（图5b）。然后，我们用TMV-GFP机械地接种了第6和7叶，并观察到在2、4和6 DPI下紫外线下的GFP运动以跟踪TMV分布。如图5A，在接种叶片的接种叶片中观察到GFP荧光信号，而QPCR分析表明，沉默的植物中TMV-GFP核酸水平明显高于对照组（图5C）。 在4 DPI时，GFP信号出现在沉默的植物的全身叶子中，而在控制植物的全身叶子中未检测到GFP信号。病毒核酸的QPCR分析产生了相似的结果（图 5d）。 5e）。5C）。在4 DPI时，GFP信号出现在沉默的植物的全身叶子中，而在控制植物的全身叶子中未检测到GFP信号。病毒核酸的QPCR分析产生了相似的结果（图5d）。5e）。通过6 DPI，GFP信号在沉默的植物中更为明显，TMV-GFP在其全身叶片中显着积累（图这些结果表明NSLTP2沉默促进了TMV-GFP感染。随后，我们比较了
烟草镶嵌病毒，用于将药物靶向向表达前列腺特异性膜抗原
和药物输送。23,24在这里我们建立了这些设计概念，并开发了针对PSMA的TMV，以增强药物递送焦油焦油前列腺癌。特定的cally，我们使用了TMV的T158K突变体，25，它在外表面上呈现2130个反应性赖氨酸残基，而内部通道内衬有4260个谷氨酸残基。这允许将外部赖氨酸残基的主要胺用于N-羟氧化二酰亚胺（NHS）介导的生物结合，而内部谷氨酸的羧酸酯基团可以通过1-乙基-3--（3-二氨基甲基氨基氨基氨基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基酸）来解决带电的腔体，用于构成带正电的分子货物的凹入。Using a two-step bio- conjugation protocol (installation of an azide by conjugation of an NHS reactive linker to the surface lysines, followed by conjugation of an alkyne-terminated targeting ligand using copper-free click chemistry), we conjugated and displayed ((( S )- 5-amino-1-carboxypentyl)carbamoyl)- L -glutamic acid （DUPA），一种与PSMA结合的小靶向配体。26用近红外urophore cy5共价标记TMV通道，以启用纳米颗粒的成像和跟踪，或用抗肿瘤剂Mitoxantrone（MTO）（一种II型拓扑酶酶抑制剂）加载。27我们使用PSMA +和PSMA前列腺癌细胞在体外测试了焦油的特定城市和药物递送的效率。
烟草镶嵌病毒，用于将药物靶向向表达前列腺特异性膜抗原
和药物输送。23,24在这里我们建立了这些设计概念，并开发了针对PSMA的TMV，以增强药物递送焦油焦油前列腺癌。特定的cally，我们使用了TMV的T158K突变体，25，它在外表面上呈现2130个反应性赖氨酸残基，而内部通道内衬有4260个谷氨酸残基。这允许将外部赖氨酸残基的主要胺用于N-羟氧化二酰亚胺（NHS）介导的生物结合，而内部谷氨酸的羧酸酯基团可以通过1-乙基-3--（3-二氨基甲基氨基氨基氨基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基甲基酸）来解决带电的腔体，用于构成带正电的分子货物的凹入。Using a two-step bio- conjugation protocol (installation of an azide by conjugation of an NHS reactive linker to the surface lysines, followed by conjugation of an alkyne-terminated targeting ligand using copper-free click chemistry), we conjugated and displayed ((( S )- 5-amino-1-carboxypentyl)carbamoyl)- L -glutamic acid （DUPA），一种与PSMA结合的小靶向配体。26用近红外urophore cy5共价标记TMV通道，以启用纳米颗粒的成像和跟踪，或用抗肿瘤剂Mitoxantrone（MTO）（一种II型拓扑酶酶抑制剂）加载。27我们使用PSMA +和PSMA前列腺癌细胞在体外测试了焦油的特定城市和药物递送的效率。
B.Sc. （植物学）教学大纲应用科学学院 2021 有关负责消费和生产的报告 b-tech（Phytopharmaceuticals）2022-2023 根据BSMA，ICAR M.Sc. ... IFAC赞助了三天通过无人机飞行和电动汽车的控制系统工程奇观的国家研讨会 2024-25 B.Sc. （动物学）教学大纲应用科学学院 课程结构和教学大纲B.Sc.（荣誉）... PG学位计划教学大纲，根据BSMA，ICAR 研究出版物和道德资源的研讨会...
微生物世界简介模块：微生物营养，生长和代谢。病毒在疫苗生产，研究，医学和诊断中的作用，作为植物疾病的因果生物的经济重要性。细菌在其在农业和工业中的作用（发酵和医学）的经济意义。模块-II病毒：发现，生理化学和生物学特征；分类（巴尔的摩），一般结构，与病毒和王室的特殊参考；复制（一般帐户），DNA病毒（T-Phage），裂解和溶菌循环； RNA病毒（TMV）。练习：1。裂解和溶血周期的线图/照片2。 div>电子显微照片/病毒模型 - T-Phage and TMV，模块-IIII细菌：发现，一般特征；类型-Archaebacteria，Eubacteria，无壁形形式（支原体和球体体）；细胞结构；营养类型；繁殖 - 植被，无性和重组（共轭，转化和转导）。练习：3。细菌的电子显微照片，二进制裂变，结合内孢子，根结节4。革兰氏染色。 5.孔雀石绿（从土壤细菌中取出的内孢子）染色。 6。 根结节细菌的研究革兰氏染色。5.孔雀石绿（从土壤细菌中取出的内孢子）染色。6。根结节细菌的研究
病毒-LMS -Apada印度尼西亚
•烟草摩西疾病阻碍烟草植物的生长，并给叶子带有镶嵌色彩•在1800年代后期，研究人员假设，小于细菌的粒子引起了该疾病•1935年，温德尔·斯坦利（Wendell Stanley）在1935年，温德尔·史丹利（Wendell Stanley）证实了这一假设，通过结晶的传染性粒子，现已闻名为tobacco Mosaic Mosaic Virus（TMV）
TS 176 - RPF补充剂（纤维蛋白原胰蛋白酶抑制剂
通过加入10毫升无菌蒸馏水来补充1个小瓶的含量。将小瓶倒置慢慢地慢慢地避免了两到三次避免起泡。或者，可以用无菌玻璃棒或搅拌器轻轻搅拌1-2分钟来溶解内容物。未获得立即溶解。保持其站立1-2个小时以更好地溶解。轻微的颗粒物，不会影响补充剂的性能参数。无菌添加90毫升无菌的补充剂，熔融TM 358 -Baird Parker琼脂碱基 / TMV 358- Baird Parker琼脂基地（VEG。）< / div>/ TM 1579-贝尔德·帕克琼脂基地（RPF）（ISO 6888-1＆2＆2：1999） / TM 2300 -RPF琼脂基地（ISO 6888-2：1999）冷却至48°C。与烧瓶同时轻轻旋转烧瓶，从烧瓶的侧面缓慢加入补充剂，以均匀地混合补充剂。倒入无菌培养皿中，立即使用。
课程大纲 植物学学士
第一单元：微生物（15 讲）病毒——发现、一般结构、复制（概述）、DNA 病毒（T 噬菌体）；溶菌和溶原循环、RNA 病毒（TMV）；经济重要性；细菌——发现、一般特征和细胞结构；类型——古细菌、真细菌和支原体。繁殖——营养、无性和重组（接合、转化和转导）；经济重要性。第二单元：藻类（15 讲）一般特征；生态和分布；藻类组织和繁殖的范围；史密斯藻类分类；以下藻类的形态和生命周期：念珠藻、水绵、马尾藻和多管藻。藻类的经济重要性，特别涉及食品、生物肥料和医药。第三单元：真菌（15 讲）简介 - 一般特征、生态学和意义、叶状体组织范围、细胞壁组成、营养、繁殖、Ainsworth 分类和经济重要性（特别参考医学）；根霉（接合菌门）、青霉（子囊菌门）和蘑菇（担子菌门）的生命周期；共生群落 - 地衣：一般说明、繁殖和意义；菌根：外生菌根和内生菌根及其意义。第四单元：苔藓植物（15 讲）一般特征、叶状体组织范围。Riccia、Anthoceros 和 Funaria 的 Smith 分类（直至科）、形态、解剖学和繁殖（不包括发育细节）。苔藓植物的生态学和经济重要性（特别提到泥炭藓）。建议阅读：