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州：威斯康星州 - 美国陆军工程兵团，圣保罗
解释：审查区域包括一个划定的水生资源特征，在附图标记 MVP-2014-01202-SJW 上被标识为湿地 1（7,812 平方英尺）：第 1 页，共 2 页至第 2 页，共 2 页。湿地 1 最好被描述为一个孤立的湿草甸/浅沼泽型湿地，上面长满了芦苇、杂交香蒲和芦苇。湿地 1 位于农田的正东侧，位于曾经是森林高地的西边，近年来，为了建造粪坑，这片高地被砍伐，粪坑位于湿地 1 的正东侧。项目场地周围的土地由农田、南边的高地硬木森林和北边的农场基础设施组成。对国家湿地清单的审查未显示审查区域内有任何已绘制的湿地，而威斯康星州湿地清单确实表明在湿地 1 的确切位置内有一小片湿地。但是，这片湿地并未超出湿地 1 的划定边界。对 USGS 地形测绘的审查显示，该特征周围的区域相对平坦，地形断层与湿地 1 的划定边界一致。此外，NAIP 彩色红外图像显示湿地 1 划定边界内的清晰特征，不会延伸到其他位置。此外，威斯康星州 DNR Hillshade 测绘层清楚地显示了一个圆形图形，地形断层与湿地 1 划定边界一致，并且未延伸到该特征之外。地图上最近的支流（未命名）位于湿地 1 西北约 0.35 英里处，这两个特征之间有一个谷仓。这些特征之间没有地表或地下水文连接，也没有将此特征与下游支流连接的受限流动模式。最后，与上面提到的最近的支流没有生态联系，并且此特征没有通过自然或人造特征与美国任何水域隔开。
格式提出学期课程__2024- ...
6。分子生物学2学生对课程的描述必须了解剪接RNA的碱基，mRNA向蛋白质的翻译，遗传密码，原核生物和真核生物中的转录调节以及调节性RNA的多样性和功能。 div>教师或助手将在课程的主题，科学文章的讨论以及对主题的评论，评估活动（例如Kahout和类似的评估活动）上进行演讲。 div>该课程的另一个轴由学生的分子生物学方法的介绍组成。 div>每个学生在20到30分钟内提出了一种方法。 div>这旨在为学生提供基础，以了解分子生物学和基因组科学中最常见方法的概念和范围。 div>During previous courses the following methods were presented: electrophoresis & nucleic acid extraction, nucleic acid hybridization (retention supports, southern and northern type hybridations), DNA amplification (PCR, RT-PCR, real-time PCR), DNA sequencing (chemistry and enzymatic), recombinant DNA techniques (restriction, restriction, restriction, restriction Ligation, directed mutagenesis), new cloning systems (gateway, mole, ...), protein analysis (SDS-Page, Western blot), protein analysis II (Elisa, immunoprecipitation), immunohistochemistry, eukaryotic expression systems (transfection methods, stable transfections, transitional transfections), protein interactions- DNA (EMSA, Footprinting, CrossLinking), generation of genetic models （敲击，敲门，CRISPR/CAS9），干扰RNA，蛋白质 - 蛋白质相互作用系统（双杂种，一种杂种，蛋白质片段互补的测试），
crispr-介导的肉桂酸 - COA还原酶4的突变，在Allohexaploid oiled Crop Camelina sativa中揭示了其在抗性中的关键作用
背景：硬化菌核（SS）是一种广泛的宿主范围，可影响400多种植物物种。ss cys camelina sativa（CS）的茎腐病疾病是一种适用于低输入作物和工业油属性的Allohexaploid crucifer物种，适用于生物燃料和润滑剂。组织化学和分子研究已将C. sativa中的SS抗性与细胞壁木质化联系起来（Eynck等，2012），并报道了CSS抗性线CN114263中的Cinnamoyl-COA还原酶4（CSCCR4）基因的组成型表达。现代繁殖工作（例如基因编辑）需要改善商业线条，并限制农作物损失的风险，这对生产者来说是重要的。目的：为了研究单极生物合成的重要性以及CSCCR4在Camelina对SS耐药性中的作用，我们使用CRISPR/CAS9介导的基因编辑产生了CN114263 Camelina系的CSCCR4敲除突变体。材料和方法：三十T1植物是通过花卉浸入转化产生的，然后是草甘膦喷雾，该植物在筛选程序的第一步中使用，并通过PCR方法确认。使用数字液滴PCR（DDPCR）确定T1和T2祖细胞中T1和T2祖细胞中的T-DNA拷贝数变化T-DNA CNV，并且通过下降测定技术对T1和T2代的CSCCR4同源物的三个副本中的三个副本中的突变发生。为确保T2植物中的突变体是真实的，对其中三个的cas9/ grna特异性裂解点侧面进行了topo ta测序。在T2代生成中，筛选了CSCCR4基因中的潜在突变。结果：在T1代中，确认了25种植物，这些植物在相应的Camelina基因组中具有1至9个TNA拷贝。在CSCCR4的三个副本中证明了各种类型的突变，包括插入和缺失。实际上，CRISPR系统可以分别在编号T2-Plant 10，T2-Plant 15和T2-Plant 19的事件中删除一个，两或三个副本。T3-plant 19在上一代中所有版本的CSCCR4中表现出突变具有易感性的螺旋杆菌侵袭，并保留为实际CSCCR4突变体材料，以进一步研究骆驼 - 螺旋菌相互作用。CSCCR4中的突变是通过容易出错的非同源端连接（NHEJ）核DNA修复途径发生的。ss挑战早期开花的T3一代。与WildType对照母体CN114263相比，在CSCCR4位置217处的突变的T3植物在CSCCR4位置217处的过早停止密码子受到了损害。结论：使用DDPCR很容易识别T1和T2祖细胞中CSCCR4同源物中的T-DNA CNV和突变的发生。我们说明，CRISPR/CAS9介导的突变是一种体面的技术，可以用来加快突变线的发展，可以帮助您弄清CSCCR4基因在防御：sativa C. c. c. c.c。sativa中的活性，作为前瞻性石油种植作物的生物柴油生产。
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图 1 - P-65 当前互连系统 ...................................................................... 8 图 2 - P-65 锚固系统的 3 x 3 布置 .............................................................. 20 图 3 - P-65 锚固系统的 3 x 3 布置 .............................................................. 20 图 4 - 底部电缆线 2 号与不明物体接触。图 5 - 3 号锚部分暴露 ...................................................................................... 24 图 6 - 3 号系泊缆绳的锚 ...................................................................................... 24 图 7 - 5 号缆绳的顶部电缆 ...................................................................................... 24 图 8 - 5 号系泊缆绳的锚 ...................................................................................... 24 图 9 - 6 号系统的锚 ............................................................................................. 24 图 10 - 6 号系统锚部分暴露 ............................................................................. 25 图 11 - 六个 P-65 立管连接透视图 ............................................................................. 26 图 12 - P-65 立管支撑细节 ............................................................................................. 26 图 13 - 将被拖曳并永久从 Enchova 油田移除的 P-65 平台 ............................................................................................................. 29 图 14 - 1 号绳索的钢缆进入导缆器滑轮........................................ 30 图 15 - 导缆器 \ 滑轮方向的全景图，无干扰........................................ 30 图 16 - 2 号绳索的钢缆进入滑轮........................................................ 30 图 17 - 导缆器 \ 滑轮方向的全景图，无干扰。 .................................. 30 图 18 - 钢缆从滑轮 3 号线路中退出 .............................................................. 30 图 19 - 钢缆从滑轮 3 号线路中退出 .............................................................. 30 图 20 - 钢缆从滑轮 6 号线路中退出 .............................................................. 31 图 21 - 朝向海床的全景，无干扰。 ......................... 31 图 22 - 1 号支撑的顶视图 .............................................................................. 31 图 23 - 根跨度 7361001B .............................................................................. 31 图 24 - 2 号支撑的顶视图 .............................................................................. 32 图 25 - 根跨度 C2511A05 ...................................................................................... 32 图 26 - 柔性管，海床方向 ...................................................................................... 32 图 27 - 柔性管，ZVM 方向 ...................................................................................... 32 图 28 - 3 号支撑的顶视图 ............................................................................. 33 图 29 - 根跨度 5000211 ..................................................................................... 33 图 30 - 柔性管道，海底方向 .............................................................................. 33 图 31 - 柔性管道，ZVM 方向 .............................................................................. 33 图 32 - 4 号支架的顶视图 .............................................................................. 33 图 33 - 根部部分 06378002 ................................................................................ 33 图 34 - 柔性管道，海底方向 ............................................................................. 34 图 35 - 柔性管道，ZVM 方向 ............................................................................. 34 图 36 - 5 号支架的顶视图 ............................................................................. 34 图 37 - 根部部分 0530901 ............................................................................. 34 图 38 - 柔性管道，海底方向（夹具） ............................................................. 34 图 39 - 柔性管道，ZVM 方向（夹具） ............................................................. 34 40 - P-65 / PCE-1 的 8'' OT 管道 (B) 的 R/F 法兰连接器 ............................................................................. 35 图 41 - 8” OT 跨越钢缆 ............................................................................................. 35