fi g u r e 2 1,25(OH)2 D 3抑制成纤维细胞中衰老相关的介体和阻滞p38 MAPK。非元素和衰老成纤维细胞用10 nm 1,25(OH)2 d 3进行7天处理。(a)使用细胞仪珠阵列(n = 7)进行CCL2,IL-6和IL-8的定量。7天后计数非元素和衰老细胞的细胞数量,并根据其非年代对照组的细胞数成比例地调节衰老细胞上清液中的细胞数和浓度。(b)使用Western blot(c)(c)累积数据(n = 9)的Phosho-P38 MAPK(P-P38),总P38 MAPK和GAPDH的代表性印迹。数据表示为平均值±SEM,并使用单向方差分析和Dunn的多重比较测试进行比较。*p≤0.05; **p≤0.01; ***p≤0.001。
帮助研究人员完成资本采购流程,共同编写和编辑 15 份唯一来源和单一来源论证,并与大学设施部门合作准备设备安装空间,包括:手持式 X 射线荧光光谱仪、同位素比质谱仪、研究级荧光显微镜、超高效液相色谱质谱仪、多模协作机器人系统、一套学生级荧光显微镜、实验动物围栏、激光扫描共聚焦显微镜服务合同、物理系光学研究实验室的光学元件包、透射电子显微镜软件升级、电子背散射衍射检测器、蒙特克莱尔州立大学气象站、电感耦合光学发射光谱仪、离子色谱仪、Western Blot 系统、一套生物安全柜。• 与院长和大学设施部门合作,重新设计了 CCIS 的四楼
补充图 S1:U87-MG、U87-MG vIII 和 U251-MG 细胞中的 OPN 表达以及 OPN 耗竭对细胞活力的影响。OPN 表达 A. 和分泌 B. 分别通过蛋白质印迹法对总蛋白提取物进行量化,并通过 ELISA 对接种后 48 小时收集的条件培养基进行量化。C. 图表显示了在 OPN 抑制和无辐射的情况下,克隆形成试验期间的菌落数量。免疫印迹数据通过密度分析进行量化,并针对 β-肌动蛋白进行标准化。所有实验重复 3 次。数据以平均值 ± SEM 表示。***,P<0.001。**,P<0.01。
图1:LY3023414是一个能够增加NMD靶标转录的小分子。a)用于鉴定NMD抑制剂的HTS示意图。突变转录本在卡通中以较小的长度表示,仅出于说明目的。b)突变RNA相对于野生型读取的读数是HTS的前8个命中。虚线表示被视为命中所需的最小分数(> DMSO控制高于5标准偏差)。全屏结果如图S4所示。c)靶向的RNA测序结果,在10 µm下用HTS的8个最佳命中处理的等源性RPTEC敲除克隆的靶向结果。虚线表示相对的RNA表达水平为1,等于DMSO处理的井的相对RNA表达水平。仅在图S8中显示了未在任何线上验证的Ceritinib的数据。RPE TP53 224上的TP53 Western blot,其中包含纯合TP53突变,使用了在RPTEC等源性线中验证的四个命中化合物。e)用两个NMD抑制剂铅候选物处理后全长TP53α和同工型TP53β的Western印迹分析。tp53β(已知由NMD控制的表达)以及突变体TP53由LY3023414诱导,而全长诱导。请注意,RPE TP53 223是一种杂合基因敲除克隆,一个近乎野生型等位基因,而RPTEC TP53 588包含一个纯合TP53诱导突变。f)QPCR显示LY3023414治疗导致RPE1和RPTEC的母细胞系中NMD受控的TP53,TP53β的NMD控制替代转录物的表达增加。由学生的t检验确定的重要性。除非指示其他细胞暴露于5 µm的测试化合物16小时。
抽象背景:黑色素瘤是皮肤癌最具侵略性的形式。黑色素瘤干细胞(MSC)是黑色素瘤侵袭和转移的驱动力之一。因此,探索维持MSC茎的机制非常重要。在这项研究中,表征了从A375细胞系衍生的CD147阳性(CD147+)MSC。方法:从A375细胞中对侧种群(SP)和非SP细胞进行分选。进行了定量的实时聚合酶链反应和蛋白质印迹分析,以确定SP和非SP细胞中CD147的表达。随后,从SP细胞中分离出CD147+和CD147阴性(CD147-)细胞。通过球体形成,伤口 - 修复和Transwell分析,可以鉴定出CD147 +/-抗原呈现细胞的干细胞特征和转移潜力。Western印迹分析,以评估反式形成生长因子-BETA1(TGFβ1)和神经源性基因座缺口同源蛋白1(Notch1)信号通路的蛋白质水平。异种移植肿瘤实验,以研究体内CD147+细胞的肿瘤基因能力。结果:CD147在A375细胞系的SP细胞中高度表达。CD147+细胞在体外具有更强的球体形成,迁移和侵袭的能力。CD147+细胞中TGFβ1,Notch1,Jagged1和Hes1的蛋白质水平高于CD147-细胞。此外,CD147+细胞在体内显示出更强的致瘤和转移性潜力。©2024密码子出版物。由密码子出版。结论:A375细胞系的SP细胞表达了高水平的CD147,而CD147+ SP细胞POS具有更强的茎样特征和运动性,这与TGFβ和Notch途径的激活有关。
添加到1.5毫升管中。血液:在13,000rpm处离心血液样本约1分钟(到颗粒样品)。用牙签从乙醇中取出样品,然后将其印迹到组织中。几乎干燥后,将牙签转移到1.5ml管中,然后摇晃以脱落血液。取出牙签并放入消毒剂中。拭子:乙醇干燥并放入1.5毫升管中。从交换的末端扣下来,以便盖子可以关闭。羽毛:将1-3羽羽毛的鱿鱼切成小块,在无菌玻璃板上用无菌剃刀刀片切成小块,然后再添加到管中。如果羽毛很小并且尖端上存在血斑,则可以添加羽毛。
设计。我们为所有实验设置了阳性和阴性对照,并根据阳性和阴性对照的表现包括或排除数据点。我们使用 SPSS 来评估数据是否符合统计方法的假设,如果假设不满足,我们将调整为其他统计方法。生物复制是对生物学上不同的样本进行平行测量以捕获随机的生物学变异,这与技术复制不同,技术复制是对同一样本进行重复测量,代表多个独立测量。在免疫印迹、Southern 印迹和 GUIDE-seq 测定中,重复次数是指独立的细胞培养。对于体内和体外 RNA 焦点测量,重复次数是指
结果:慢性α -GPC治疗降低了淀粉样蛋白沉积物的积累,并导致了居民先天免疫细胞,星形胶质细胞和小胶质细胞的炎症反应的实质性平衡。特定的,荧光免疫组织化学和蛋白质印迹分析表明,α-GPC有助于减少皮质和海马反应性星形胶质细胞和促炎的小胶质细胞,同时同时增加抗抗毒素分子的表达。,而α -GPC有益地影响海马中的突触标记突触素。此外,我们观察到α -GPC可以有效地恢复认知功能障碍,这是通过新型对象识别测试来衡量的,其中与3XTGXG -AD AD无培养的小鼠相比,用α -GPC处理的3xTG -AD小鼠花了更多时间探索新的对象。
Ce´ line Delpech, 1 , 6 Julia Schaeffer, 1 , 6 Noemie Vilallongue, 1 , 6 Apolline Delaunay, 1 Amin Benadjal, 2 Beatrice Blot, 1 Blandine Excoffier, 1 Elise Plissonnier, 1 Eduardo Gascon, 3 Floriane Albert, 1 Antoine Paccard, 1 Ana Saintpierre, 1 Celestin Gasnier, 1 Yvrick Zagar, 2 Vale´ rie Castellani, 4 Stephane Belin, 1 Alain Che´ dotal, 2 , 4 , 5 和 Homaira Nawabi 1 , 7 ,* 1 格勒诺布尔阿尔卑斯大学,INSERM U1216,格勒诺布尔神经科学研究所,38000 格勒诺布尔,法国 2 索邦大学,INSERM,法国巴黎国家科学研究院,视觉研究所 3 法国马赛艾克斯大学,法国国家科学研究院,INT,蒂莫内神经科学研究所 4 法国里昂第一大学,MeLiS,法国国家科学研究院 UMR5284,INSERM U1314 5 法国里昂临终关怀院东部医院集团病理学研究所 6 这些作者贡献相同 7 主要联系人 *通信地址:homaira.nawabi@inserm.fr https://doi.org/10.1016/j.devcel.2024.09.005
数据可用性 图 1f、6e、i 和扩展数据图 2e 中呈现的细胞全图以及过滤的 SV 调用可在 doi: 10.5281/ zenodo.4533300 下获得。图 1c-e、4、6a-d、f、h 和扩展数据图 1b-f、h-j、2a-d、4、5c 和 6 的源数据随论文提供,包括扩展图 1c 中未处理的 Western blot。有助于图 1e、4、6c、h、扩展数据图 1d、2、5c 和 Look-Seq 实验(图 2、3、5、扩展数据图 3)分析的原始图像和视频因文件大小限制而未发布,但可根据合理要求提供。 CD34+ HSPC 衍生的 FISH 和 SKY 图像和分析(图 6d-g)由圣犹达细胞遗传学共享资源实验室生成,支持图 6d-g 中发现的衍生数据可应要求从通讯作者处获得。序列读取数据可在 Bioproject PRJNA676146 下的测序读取档案 (SRA) 中找到。