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CREditing：克氏锥虫基因调节工具
克氏锥虫的基因操作仍然是一个挑战，主要是因为缺乏可用且有效的分子工具。CRE-lox 重组系统是一种位点特异性重组酶技术，是一种广泛用于实现染色体或游离 DNA 中的条件性靶向缺失、倒位、插入、基因激活、易位和其他修饰的方法。在本研究中，CRE-lox 系统经过改进，以扩展当前用于这种难以操作的寄生虫的基因工具箱。为此，我们评估了通过电穿孔直接蛋白质递送 CRE 重组酶是否可以改善克氏锥虫中 CRE 介导的重组。CRE 重组酶与克氏锥虫组蛋白 H2B 的 C 端融合，H2B 携带核定位信号并在原核系统中表达。融合蛋白经过亲和纯化后直接引入上鞭毛体和组织培养衍生的锥虫中。这可以控制基因表达，如通过打开先前转染到寄生虫中的串联二聚体荧光蛋白报告基因所证实的，在高达 85% 的寄生虫中实现了 CRE 介导的重组。进一步测试了该系统关闭基因表达、去除整合到基因组中的可选择标记以及有条件地敲除与耐药性有关的硝基还原酶基因的能力。此外，CREditing 还可以控制组织培养锥虫中的基因表达，而锥虫比上鞭毛体更难转染。本研究中显示的克氏锥虫基因组操作的重大进展可供其他人使用，以帮助通过获得或丧失功能的方法更好地了解这种寄生虫。 2020 澳大利亚寄生虫学会。由 Elsevier Ltd. 出版。保留所有权利。
目录
在使用溶剂输注加工（SIP）F.A.Aziz和M.M. salleh 3优化杜里奥·齐金斯（Durio Zibethinus）（榴莲）纤维增强复合材料作为汽车皮肤材料J.C.S. Aguilar和C.P. Lawagon 11自然杂交增强对UPE复合W.N. 机械性能的影响 Alrawie，Z.N.R. Alraziqi和Q.A. HAMAD 29通过用不同的硅烷偶联剂J.I. Abdulhameed，A.H。Ali和I.H. kara 39个人保护多层装甲的数值和实验研究A.Ehsan，A.O。 Samarmad和A.F. hamzah 47硬度和干燥滑动磨损的表征功能分级的材料，采用离心a.m. Abdulmajeed和A.F. hamzah 57填充物和纤维类型对身体装甲复合材料的行为的影响。 Alhaddad，J.J。 Dawood和F.M. 穆罕默德69玻璃纤维和添加剂高岭土的聚苯乙烯加固的增强机械，热和介电特性。 Kareem，M.A.I。 Alqadoori和M.M. isMail 79在轴向静态碎屑下使用天然和混合复合材料增强崩溃的可达参数。 Albahash，M.J。Sharba和B.A. HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.Aziz和M.M.salleh 3优化杜里奥·齐金斯（Durio Zibethinus）（榴莲）纤维增强复合材料作为汽车皮肤材料J.C.S.Aguilar和C.P.Lawagon 11自然杂交增强对UPE复合W.N.Alrawie，Z.N.R. Alraziqi和Q.A. HAMAD 29通过用不同的硅烷偶联剂J.I. Abdulhameed，A.H。Ali和I.H. kara 39个人保护多层装甲的数值和实验研究A.Ehsan，A.O。 Samarmad和A.F. hamzah 47硬度和干燥滑动磨损的表征功能分级的材料，采用离心a.m. Abdulmajeed和A.F. hamzah 57填充物和纤维类型对身体装甲复合材料的行为的影响。 Alhaddad，J.J。 Dawood和F.M. 穆罕默德69玻璃纤维和添加剂高岭土的聚苯乙烯加固的增强机械，热和介电特性。 Kareem，M.A.I。 Alqadoori和M.M. isMail 79在轴向静态碎屑下使用天然和混合复合材料增强崩溃的可达参数。 Albahash，M.J。Sharba和B.A. HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.Alrawie，Z.N.R.Alraziqi和Q.A. HAMAD 29通过用不同的硅烷偶联剂J.I. Abdulhameed，A.H。Ali和I.H. kara 39个人保护多层装甲的数值和实验研究A.Ehsan，A.O。 Samarmad和A.F. hamzah 47硬度和干燥滑动磨损的表征功能分级的材料，采用离心a.m. Abdulmajeed和A.F. hamzah 57填充物和纤维类型对身体装甲复合材料的行为的影响。 Alhaddad，J.J。 Dawood和F.M. 穆罕默德69玻璃纤维和添加剂高岭土的聚苯乙烯加固的增强机械，热和介电特性。 Kareem，M.A.I。 Alqadoori和M.M. isMail 79在轴向静态碎屑下使用天然和混合复合材料增强崩溃的可达参数。 Albahash，M.J。Sharba和B.A. HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.Alraziqi和Q.A.HAMAD 29通过用不同的硅烷偶联剂J.I.Abdulhameed，A.H。Ali和I.H.kara 39个人保护多层装甲的数值和实验研究A.Ehsan，A.O。Samarmad和A.F.hamzah 47硬度和干燥滑动磨损的表征功能分级的材料，采用离心a.m. Abdulmajeed和A.F.hamzah 57填充物和纤维类型对身体装甲复合材料的行为的影响。Alhaddad，J.J。 Dawood和F.M. 穆罕默德69玻璃纤维和添加剂高岭土的聚苯乙烯加固的增强机械，热和介电特性。 Kareem，M.A.I。 Alqadoori和M.M. isMail 79在轴向静态碎屑下使用天然和混合复合材料增强崩溃的可达参数。 Albahash，M.J。Sharba和B.A. HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.Alhaddad，J.J。 Dawood和F.M.穆罕默德69玻璃纤维和添加剂高岭土的聚苯乙烯加固的增强机械，热和介电特性。 Kareem，M.A.I。Alqadoori和M.M. isMail 79在轴向静态碎屑下使用天然和混合复合材料增强崩溃的可达参数。 Albahash，M.J。Sharba和B.A. HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.Alqadoori和M.M.isMail 79在轴向静态碎屑下使用天然和混合复合材料增强崩溃的可达参数。Albahash，M.J。Sharba和B.A. HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.Albahash，M.J。Sharba和B.A.HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能 Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S. 的兼容性表征 Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.HASAN 87纳米石墨烯K.A.增强聚合物的增强机械性能Handoul和A.A. Taher 99基于PMMA/DPET的聚合物混合D.S.Saleem，M。Alzuhairi和N.A.H.nassir 107使用纳米石墨烯洛杉矶MADI和A.S.改善纤维预压力复合材料的拉伸和弯曲性能Alithari 117
用双标记的自我快速，全细胞DNA-Paint成像...
1。Schnitzbauer，J。等。用DNA-Paint的超分辨率显微镜。nat。原始。12.6，1198-1228（2017）。 2。 Reinhardt，S。C.等。 Ångström-分辨率荧光显微镜。 自然617.7962，711-716（2023）。 3。 Jungmann，R。等。 用DNA-Paint和Exchange-Paint多路复用3D细胞超分辨率成像。 nat。 方法11.3，313-318（2014）。 4。 Auer，A。 使用基于FRET的探针快速，无背景的DNA绘制成像。 纳米lett。 17.10，6428-6434（2017）。 5。 Chung，K。K.等。 荧光DNA-Paint，可更快，低背景超分辨率成像。 nat。 方法19.5，554-559（2022）。 6。 Knemeyer，J。P。等。 基于染料二聚化的自淬灭DNA探针，用于鉴定分枝杆菌。 int。 J. Environ。 肛门。 化学。 85，625-637（2005）。 7。 Kessler，L。F.等。 自淬灭的荧光团二聚体，用于DNA涂料和st型显微镜。 angew。 化学。 int。 ed。 Engl。 E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。12.6，1198-1228（2017）。2。Reinhardt，S。C.等。Ångström-分辨率荧光显微镜。自然617.7962，711-716（2023）。3。Jungmann，R。等。 用DNA-Paint和Exchange-Paint多路复用3D细胞超分辨率成像。 nat。 方法11.3，313-318（2014）。 4。 Auer，A。 使用基于FRET的探针快速，无背景的DNA绘制成像。 纳米lett。 17.10，6428-6434（2017）。 5。 Chung，K。K.等。 荧光DNA-Paint，可更快，低背景超分辨率成像。 nat。 方法19.5，554-559（2022）。 6。 Knemeyer，J。P。等。 基于染料二聚化的自淬灭DNA探针，用于鉴定分枝杆菌。 int。 J. Environ。 肛门。 化学。 85，625-637（2005）。 7。 Kessler，L。F.等。 自淬灭的荧光团二聚体，用于DNA涂料和st型显微镜。 angew。 化学。 int。 ed。 Engl。 E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。Jungmann，R。等。用DNA-Paint和Exchange-Paint多路复用3D细胞超分辨率成像。nat。方法11.3，313-318（2014）。4。Auer，A。使用基于FRET的探针快速，无背景的DNA绘制成像。纳米lett。17.10，6428-6434（2017）。5。Chung，K。K.等。 荧光DNA-Paint，可更快，低背景超分辨率成像。 nat。 方法19.5，554-559（2022）。 6。 Knemeyer，J。P。等。 基于染料二聚化的自淬灭DNA探针，用于鉴定分枝杆菌。 int。 J. Environ。 肛门。 化学。 85，625-637（2005）。 7。 Kessler，L。F.等。 自淬灭的荧光团二聚体，用于DNA涂料和st型显微镜。 angew。 化学。 int。 ed。 Engl。 E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。Chung，K。K.等。荧光DNA-Paint，可更快，低背景超分辨率成像。nat。方法19.5，554-559（2022）。6。Knemeyer，J。P。等。基于染料二聚化的自淬灭DNA探针，用于鉴定分枝杆菌。int。J. Environ。肛门。化学。85，625-637（2005）。 7。 Kessler，L。F.等。 自淬灭的荧光团二聚体，用于DNA涂料和st型显微镜。 angew。 化学。 int。 ed。 Engl。 E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。85，625-637（2005）。7。Kessler，L。F.等。 自淬灭的荧光团二聚体，用于DNA涂料和st型显微镜。 angew。 化学。 int。 ed。 Engl。 E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。Kessler，L。F.等。自淬灭的荧光团二聚体，用于DNA涂料和st型显微镜。angew。化学。int。ed。Engl。 E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。Engl。E202307538（2023）。 8。 Bollmann，S。等。 有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。 物理。 化学。 化学。 物理。 13.28，12874-12882（2011）。 9。 nat。 10。 nat。E202307538（2023）。8。Bollmann，S。等。有机荧光团的二聚体形成在变性条件下报告了生物分子动力学。物理。化学。化学。物理。13.28，12874-12882（2011）。9。nat。10。nat。Mortensen，K。I.，Churchman，L。S.，Spudich，J.A.和Flyvbjerg，H。单分子跟踪和超分辨率显微镜的优化定位分析。方法，7.5，377-381（2010）。Helmerich，D。A.等。 照片处理指纹分析绕过10 nm的分辨率障碍。 方法19.8，986-994（2022）。 11。 Huisken，J。等。 通过选择性平面照明显微镜在实时胚胎深处的光学切片。 科学305.5686，1007-1009（2004）。Helmerich，D。A.等。照片处理指纹分析绕过10 nm的分辨率障碍。方法19.8，986-994（2022）。11。Huisken，J。等。通过选择性平面照明显微镜在实时胚胎深处的光学切片。科学305.5686，1007-1009（2004）。
肿瘤内PAN-ERBB针对头颈部鳞状细胞癌的CAR-T：T4免疫疗法研究的临时分析
抽象背景局部先进/复发性的头部和颈部鳞状细胞癌（HNSCC）与显着的发病率和死亡率有关。为了靶向该癌症中上调的ERBB二聚体表达，我们开发了一种基于CD28的自体嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）方法，称为T4免疫疗法。患者衍生的T细胞是通过逆转录病毒转导向表达panerbb特异性的CAR和称为T1E28ζ的PanerBb特异性CAR和IL-4反应性嵌合细胞因子受体，4αβ的设计的，这使IL-4介导的在制造过程中富含转二的细胞。这些细胞引起针对HNSCC和其他癌的临床前抗肿瘤活性。在这项试验中，由于健康组织中低水平的ERBB表达，我们使用肿瘤内递送来减轻靶向外肿瘤毒性的明显临床风险。方法，我们进行了1期剂量降低3+3 HNSCC中肿瘤内T4免疫疗法的试验（NCT01818323）。使用2周的半闭合过程从40至130毫升的全血中制造了T-Cell批次。将单个汽车T细胞处理（以1-4毫升培养基中的新鲜产物配制为新的产品）被注入一个或多个目标病变。从1×10 7 -1×10 9 T4 + T细胞中升级的CAR T-细胞的剂量在没有事先淋巴细胞论的情况下升级。结果尽管大多数注册受试者的基线淋巴细胞减少症，但在所有情况下，靶细胞剂量都成功生产，产生高达75亿T细胞（67.5±11.8％的转透明），而没有任何批处理失败。频繁治疗的不良事件是肿瘤肿胀，疼痛，肾上腺素，发冷和疲劳。与治疗相关的不良事件均为2级或更低，没有剂量限制毒性（不良事件的常见术语标准v.4.0）。没有证据表明在肿瘤内递送后T4 + T细胞泄漏到循环中，并且注射放射性标记的细胞表现出
ErbB 靶向 CAR-T 治疗头颈部鳞状细胞...
摘要 背景 局部晚期/复发性头颈部鳞状细胞癌 (HNSCC) 与高发病率和高死亡率相关。为了针对这种癌症中上调的 ErbB 二聚体表达，我们开发了一种基于自体 CD28 的嵌合抗原受体 T 细胞 (CAR-T) 方法，称为 T4 免疫疗法。患者来源的 T 细胞通过逆转录病毒转导进行设计，以共表达称为 T1E28 ζ 的泛ErbB 特异性 CAR 和 IL-4 反应性嵌合细胞因子受体 4 αβ，这使得在制造过程中 IL-4 介导的转导细胞富集。这些细胞对 HNSCC 和其他癌症具有临床前抗肿瘤活性。在这项试验中，我们使用肿瘤内递送来减轻由于健康组织中低水平 ErbB 表达而导致的靶向非肿瘤毒性的重大临床风险。方法 我们进行了 HNSCC 肿瘤内 T4 免疫治疗的 1 期剂量递增 3+3 试验 (NCT01818323)。使用为期 2 周的半封闭过程，从 40 至 130 mL 全血中制造 CAR T 细胞批次。将单次 CAR T 细胞治疗（在 1-4 mL 培养基中配制为新鲜产品）注入一个或多个目标病变。5 个队列中的 CAR T 细胞剂量从 1×10 7 −1×10 9 T4 + T 细胞递增，且未进行淋巴细胞耗竭。结果 尽管大多数入组受试者均出现基线淋巴细胞减少，但在所有情况下均成功制造出目标细胞剂量，产生了多达 75 亿个 T 细胞（67.5±11.8% 转导），没有任何批次失败。治疗相关不良事件均为 2 级或以下，没有剂量限制性毒性（不良事件通用术语标准 V.4.0）。常见的治疗相关不良事件是肿瘤肿胀、疼痛、发热、发冷和疲劳。没有证据表明肿瘤内给药后 T4 + T 细胞泄漏到循环中，注射放射性标记细胞表明
从可解释的人工智能中了解 CRISPR-Cas9 sgRNA 效率的量子生物学见解
1 计算和预测生物学，生物科学，橡树岭国家实验室，美国田纳西州橡树岭 2 田纳西大学诺克斯维尔分校布雷迪森跨学科研究与研究生教育中心，美国田纳西州橡树岭 3 合成生物学，橡树岭国家实验室，美国田纳西州橡树岭 4 计算科学与工程，橡树岭国家实验室，美国田纳西州橡树岭 本稿件由 UT-Battelle, LLC 根据与美国能源部签订的合同编号 DE-AC05- 00OR22725 撰写。美国政府保留；并且出版商在接受文章发表时，承认美国政府保留非独占的、已付费的、不可撤销的全球许可，可以为美国政府的目的出版或复制本稿件的已出版形式，或允许他人这样做。能源部将根据能源部公共访问计划 ( http://energy.gov/downloads/doe-public-access-plan ) 向公众开放这些联邦资助研究的成果。摘要：CRISPR-Cas9 工具已经彻底改变了实验室的基因操作能力。经验法则仅针对少数模型生物建立，而 sgRNA 效率的机制基础仍然知之甚少。这项工作建立了一个使用量子化学张量生成的新特征集和新公共资源，用于解释和预测 sgRNA 效率。sgRNA 效率的特征工程是使用可解释的人工智能模型；迭代随机森林 (iRF) 执行的。通过对大肠杆菌 sgRNA 的位置特异性序列的定量属性进行编码，我们确定了细菌物种中 sgRNA 设计的重要性状。此外，我们还表明，将位置编码扩展到碱基对、二聚体、三聚体和四聚体序列的量子描述符可以捕获目标 DNA 局部和邻近核苷酸中复杂的相互作用。这些特征凸显了大肠杆菌和智人基因组之间 CRISPR-Cas9 sgRNA 动力学的差异。这些新颖的 sgRNA 编码极大地增强了我们对 CRISPR-Cas9 机制中涉及的复杂量子生物过程的理解。
用广义簇相关展开法对纺丝浴中氮空位中心进行纵向弛豫
对于高纯度样品，NV 中心拥有很长的相干时间，通过动态解耦可以进一步延长到接近 1 秒[3,4]。它可由微波场进行相干控制，并且对外界电场和磁场高度敏感。这些优越的特性使 NV 中心成为量子信息处理 [5-10]、超衍射极限成像 [11] 以及电场和磁场 [12-14]、温度 [15]、应力 [16]、生物结构 [17] 和化学反应 [18] 的量子传感的有希望的候选材料。此外，NV 中心可以与其他类型的量子系统耦合，例如碳纳米管 [19]、通量量子比特 [20] 和压磁超晶格 [21]，可以构建有前途的混合量子器件 [22,23]。此类有吸引力的应用需要充分了解其退相干行为，包括横向和纵向弛豫[24-26]，以及广泛的物理参数，如温度、磁场、杂质类型和浓度。在用于多自旋浴动力学的量子多体理论中[27-30]，例如密度矩阵团簇展开[31-33]、对关联近似[34-36]和链接团簇展开[37]，由作者之一 WY 发展的团簇关联展开（CCE）[38-40]已成功用于描述在大失谐区域中中心自旋耦合到多自旋浴的纯失相过程[41]。利用CCE方法，理论上预测了量子自旋池中NV中心的异常退相干效应[42]，并通过实验验证了该现象[43]。有趣的是，NV中心的退相干曾被认为是实现量子计算的障碍[44,45]，但现在它已被用于探测遥远的核自旋二聚体[46]，并提出利用弱地磁场进行导航[40]。类似地，最近有研究表明，可以探索诸如NV中心之类的量子系统来获取玻色子池的信息[47]。
AXL和容易出错的DNA复制赋予耐药性，并提供治疗EGFR突变肺癌
抗生素耐药性细菌病原体是一个非常具有挑战性的问题。幽门螺杆菌是最广泛，最成功的人类病原体之一，因为它在世界一半的人群中分布，引起慢性和萎缩性胃炎，消化性溃疡，粘膜相关的淋巴样组织 - 淋巴瘤 - 淋巴瘤，甚至是胃腺癌。此外，它表现出对众多抗生素的抗性。幽门螺杆菌关键转录因子之一HP1043在调节必需细胞过程中起着基本作用。与其他细菌转录因子一样，HP1043不显示真核生物同源物。这些特征使HP1043成为发展新型抗菌策略的有前途的候选人。药物重新定位是药物开发中采用的相对较新的策略；测试对新目标的批准药物大大减少了此过程的时间和成本。组合的计算和体外方法进一步减少了要在体内测试的化合物的数量。我们的目标是确定能够防止HP1043结合DNA启动子的一部分。通过评估通过分子对接HP1043二聚体的结合能力在两个构象中，与DNA结合和未结合，从而达到了这一结果。采用包括MMGBSA分子动力学的临时管道，可获得七种药物。通过电泳迁移率转移测定法在体外测试了这些测定，以评估HP1043 - DNA相互作用。在其中，三个有希望的结果显示了HP1043的DNA结合活性的明显降低。总体而言，我们应用了一种计算方法，结合了结果的实验验证，以筛选幽门螺杆菌基本转录因子之一上的大量已知药物。这种方法允许快速减少测试的药物数量，并且药物重新定位方法大大降低了药物设计成本。鉴定的药物不属于同一药物类别，并且通过计算分析构成了不同的腔体，但都显示了DNA上HP1043结合活性的降低。
通过低温恢复实现高效的 CRISPR-Cas12f1 介导的多重细菌基因组编辑
CRISPR-Cas 系统是原核生物的一种免疫机制，可特异性识别和降解外源核酸，从基因上保护生物体 [1]。CRISPR-Cas 系统的功能分为用于靶核酸识别的向导 RNA (gRNA) 和用于切割的 Cas 核酸酶 [1]。该模块化系统通过修改 gRNA 上的靶标识别序列 (TRS) 来切割所需的核苷酸序列 [2]，从而实现跨各种生物体（包括微生物）的基因组编辑 [3, 4]。第 2 类 CRISPR-Cas 系统具有单个效应蛋白，主要用于基因组编辑。值得注意的是，大量研究集中在源自化脓性链球菌 (SpCas9) 的 Cas9 [5]。然而，Cas9 蛋白的异源表达可能导致细胞毒性或异常生长 [6, 7]。因此，内源性 CRISPR-Cas 系统 [8]、Cas9 直系同源物 [9] 和 Cas12 或 Cas13 [10] 被用作编辑工具，以提供与靶细胞更好的兼容性。此外，广泛使用的 SpCas9 的尺寸较大（4.1 kb；1,368 aa），这带来了挑战，特别是在包装到空间有限的病毒载体中时 [11]。微型 CRISPR-Cas12f1 系统因其解决这一挑战的潜力而备受关注。Cas12f1 直系同源物由约 500 aa 的单个多肽组成，这比 Cas9 的长度短得多 [12]。已知 Cas12f1 核酸酶形成二聚体，每个单个 RuvC 结构域切割靶 DNA 的两条链 [13, 14]。 Cas12f1 核酸酶在基因组中用于单基因编辑已被报道在多种生物体中，包括大肠杆菌 [15, 16]、炭疽芽孢杆菌 [17]、肺炎克雷伯菌 [18]、小鼠 [19] 和人类 [20, 21]。最近，在天蓝色链霉菌中证实了 Cas12f1 介导的两个基因同时缺失 [22]。然而，Cas12f1 在精确的多重基因组编辑中的应用尚未有记录。在本研究中，我们尝试使用 CRISPR-Cas12f1 系统在大肠杆菌中进行单核苷酸水平的多重基因组编辑。采用了两种策略——调节细胞恢复温度和修改 gRNA，并评估了它们对多重基因组编辑效率和准确性的影响。
CD22 CAR T细胞相关的血液学毒性，内皮激活以及与神经毒性的关系
ABSTRACT Background Hematologic toxicities, including coagulopathy, endothelial activation, and cytopenias, with CD19-targeted chimeric antigen receptor (CAR) T- cell therapies correlate with cytokine release syndrome (CRS) and neurotoxicity severity, but little is known about the extended toxicity profiles of CAR T-cells targeting alternative antigens.该报告表征了CD22 CAR T细胞后观察到的血液学毒性及其与CRS和神经毒性的关系。方法我们回顾性地表征了与CRS在1期抗CD22 CAR T细胞研究中的血液学毒性相关的儿童和年轻人，患有复发/难治性CD22+血液学恶性肿瘤。其他分析包括血液学毒性与神经毒性的相关性以及探索淋巴细胞淋巴病毒细胞增多毒性毒性（HLH）对骨髓恢复和细胞质的影响。凝血病被定义为出血或异常凝血参数的证据。血液学毒性通过不良事件的常见术语标准v.4.0分级。在接受CD22 CAR T细胞的53例患者中，有43名（81.1％）患者完全缓解了CD22 CAR T细胞。十八（34.0％）患者经历了凝血病，其中16例患有轻度出血（通常是粘膜出血）的临床表现，这些表现通常是在CRS分辨率后逐渐减弱的。三个具有血栓性微血管病的表现。单细胞分析表明，与CD19表达相反，CD22不在少突胶质细胞前体细胞或神经血管细胞上，而是在成熟的少突胶质细胞上可见。患有凝血病的患者具有较高的铁蛋白峰，D-二聚体，凝血酶原时间，国际标准化比率（INR），乳酸脱氢酶（LDH），组织因子，凝血酶原片段F1+2和溶剂血管细胞粘附分子 - S-VCAM-1（S-VCAM-1）。尽管HLH样毒性和内皮激活的发生率相对较高，但总体神经毒性通常比CD19 CAR T细胞报道的严重程度不高，从而促使其他分析以探索中枢神经系统（CNS）中CD22的表达。最后，在获得的人中