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欧盟的双重税收（转让定价情况除外）
欧盟的双重税收（转让定价情况除外）1。常设机构a）PE问题：税务管理部门通常是PES的合格活动（即专员）。由于判例法不一致，从一个国家到另一个国家，有时甚至是矛盾的，它可能会在金额很大的情况下达成双重征税。ex：法国和英国与荷兰。PES和子公司之间税收处理的差异也在欧盟中出现。b）三角形情况：根据双边税制公约，PES不是居民：无法应用源国家和PE州之间签署的公约，并且与父母州的公约可能规定更高的预扣税。此外，即使PE可以根据特定条款受益于来源和居住国之间一致的双边税务公约，PE的州也不授予税收抵免：因此，除非该公约规定免除预扣税，否则不抑制双重税收。2）预扣税a）当纳税人遭受损失或扣留税款违反DTT时，无法从税收抵免或税收扣除中受益：某些国家授权将税收抵免携带。但是，在法国，由于没有税收抵免，因此不可能（仅允许使用相同性质的税收抵免（即公司税）和同年。此外，一些税务机关（例如法国）拒绝授予税收抵免，并有权扣除外国税收负担为一般费用。b）在源状态的总付款中征收预扣税，而无需考虑居住国的费用，而相应的税收抵免额为净收入。
2022 年全球核聚变设备调查
2.22. 阿尔万德 (伊朗原子能组织，伊朗伊斯兰共和国) ...................................................................................... 40 2.22.1. 简介 ...................................................................................................... 40 2.22.2. 目的 ...................................................................................................... 40 2.22.3. 主要特点 ............................................................................................. 40 2.23. 达马万德 (伊朗原子能组织，伊朗伊斯兰共和国) ............................................................................. 41 2.23.1. 简介 ...................................................................................................... 41 2.23.2. 目的 ...................................................................................................... 41 2.23.3. 主要特点 ............................................................................................. 41 2.24. IR-T1 (伊朗伊斯兰共和国伊斯兰阿扎德大学) ...................................................................................................... 42 2.24.1. 简介 ...................................................................................................... 42 2.24.2. 目的 ...................................................................................................... 42 2.24.3. 主要特点 ............................................................................................. 42 2.25. DTT (意大利 ENEA) ............................................................................................. 43 2.25.1. 简介 ...................................................................................................... 43 2.25.2. 目的 ...................................................................................................... 43 2.25.3. 主要特点 ............................................................................................. 43 2.26. FTU (意大利 ENEA) ............................................................................................. 44 2.26.1. 简介 ...................................................................................................... 44 2.26.2. 目的 ...................................................................................................... 44 2.26.3.主要特点 ................................................................................................ 44 2.27. LATE（日本京都大学） ...................................................................... 45 2.27.1. 简介 ................................................................................................ 45 2.27.2. 目的 ................................................................................................ 45 2.27.3. 主要特点 ............................................................................................. 45 2.28. PLATO（日本九州大学） ...................................................................... 46 2.28.1. 简介 ................................................................................................ 46 2.28.2. 目的 ............................................................................................................................. 46 2.28.3. 主要特点 .............................................................................. 46 2.29. QUEST（日本九州大学） .............................................................. 47 2.29.1. 简介 .............................................................................................. 47 2.29.2. 目的 .............................................................................................. 47 2.29.3. 主要特点 ...................................................................................... 47 2.30. HYBTOK-II（日本名古屋大学） ............................................. 48 2.30.1. 简介 .............................................................................................. 48 2.30.2. 目的 .............................................................................................. 48 2.30.3. 主要特点 ...................................................................................... 48 2.31. TOKASTAR-2（日本名古屋大学） ............................................. 49 2.31.1. 简介 .............................................................................................. 49 2.31.2.目的 ................................................................................................ 49 2.31.3. 主要特点 ...................................................................................... 49 2.32. JT-60SA（日本国立量子放射科学技术研究所） ........................................ 50 2.32.1. 简介 ............................................................................................. 50 2.32.2. 目的 ............................................................................................. 50 2.32.3. 主要特点 ............................................................................................. 50 2.33. TST-2（日本东京大学） ............................................................. 51 2.33.1. 简介 ............................................................................................. 51 2.33.2. 目的 ............................................................................................. 51........................................................................... 48 2.31. TOKASTAR-2（日本名古屋大学） .............................................. 49 2.31.1. 简介 .............................................................................................. 49 2.31.2. 目的 .............................................................................................. 49 2.31.3. 主要特点 ...................................................................................... 49 2.32. JT-60SA（日本国立量子放射科学技术研究所） ............................................. 50 2.32.1. 简介 ............................................................................................. 50 2.32.2. 目的 ............................................................................................. 50 2.32.3. 主要特点 ............................................................................................. 50 2.33. TST-2（日本东京大学） ............................................................. 51 2.33.1. 2.33.2. 简介 ................................................................................................ 51 2.33.2. 目的 .............................................................................................. 51........................................................................... 48 2.31. TOKASTAR-2（日本名古屋大学） .............................................. 49 2.31.1. 简介 .............................................................................................. 49 2.31.2. 目的 .............................................................................................. 49 2.31.3. 主要特点 ...................................................................................... 49 2.32. JT-60SA（日本国立量子放射科学技术研究所） ............................................. 50 2.32.1. 简介 ............................................................................................. 50 2.32.2. 目的 ............................................................................................. 50 2.32.3. 主要特点 ............................................................................................. 50 2.33. TST-2（日本东京大学） ............................................................. 51 2.33.1. 2.33.2. 简介 ................................................................................................ 51 2.33.2. 目的 .............................................................................................. 51
支持 EPA 转录组评估产品 (ETAP) 转录组出发点开发的科学研究
ANOVA 方差分析 AIC 赤池信息准则 ATSDR 有毒物质与疾病登记署 BCTD 生物分子与计算毒理学部 BMD 基准剂量 BMD(L) 指 BMD 和/或 BMDL BMDL 基准剂量置信下限 BMDS 基准剂量建模软件 BMDU 基准剂量置信上限 BMR 基准响应 BOSC EPA 科学顾问委员会 CASRN 化学文摘服务注册号 CCCB 计算化学与化学信息学分会 CCED 化学特性与暴露分会 CCTE 计算毒理学与暴露中心 CDx 伴随诊断 CPAD 化学与污染物评估分会 CPHEA 公共卫生与环境评估中心 CPM 每百万计数 CTBB 计算毒理学与生物信息学分会 DNTP 美国国家毒理学计划分会环境健康科学研究所 DTT 国家环境健康科学研究所转化毒理学部，前身为国家毒理学计划部 (DNTP) DWS 饮用水标准 EPA 美国环境保护署 ECHA 欧洲化学品管理局 ENBS 采样的预期净效益 ETAP EPA 转录组评估产品 ETTB 实验毒代动力学和毒理动力学分部 FC 倍数变化 FDA 美国食品药品管理局 FDR 错误发现率 FIFRA 联邦杀虫剂、杀菌剂和灭鼠剂法案 GO 基因本体 ID 标识符 IRIS EPA 综合风险信息系统 KOW 正辛醇/水分配系数 LOAEL 最低可观察不良反应水平 MAQC 微阵列质量联盟 MRL 最低风险水平 mRNA 信使核糖核酸 (RNA) MSD 均方差 MAD 中位数绝对偏差 NAM 新方法 NASEM 美国国家科学、工程、和医学 NGS 下一代测序 NIEHS 国家环境健康科学研究所
lambda exoniclease
X8030测定SDS纯度特异性活性DS核酸内切核蛋白酶DNA污染单位测试了N/A N/A N/A 1500 1500规格> 99％80,000 U/mg NOCONCONION <10份蛋白质来源：从大肠杆菌中纯化的大肠杆菌菌株过表达外生核酸内核酸内核酸酶源于bactreperepteriperophage lambda。单位定义：1个单位定义为在37°C下30分钟内从双链底物中产生10 nmol的酸性脱氧核糖核苷酸所需的酶量。分子量：25.9 kDa质量控制分析：使用2倍连续稀释法测量单位活动。稀释液，并将其添加到含有1.1 kb triTID的DNA片段的50 µL反应中，并加入1x lambda Exo反应缓冲液。在37°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用TCA-PECICTITITART方法进行分析。蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。物理纯度，然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。大肠杆菌16S rDNA的污染是使用5 µL重复的酶溶液的重复样品，并在Taqman QPCR测定中筛选，以使用与16S RRNA locus相应的寡核苷酸引物，以存在污染的大肠杆菌基因组DNA。提供：25毫米Tris-HCl，50 mm NaCl，1 mm DTT，0.1 mm EDTA，50％甘油（25°C时pH 7.5）提供：10x lambda exo反应缓冲液（B8030）：670 mm glycine，25 mm mgcl 2（25 mm mgcl 2（pH 9.4）
轻度认知障碍的运动疗法：脑电图可提高效率
随着全球人口老龄化的发展，患有认知障碍的老年人比例也不断增加。轻度认知障碍（MCI）是正常衰老与早期痴呆之间的中间阶段，伴随部分认知功能的下降（Petersen，2004；Albert et al.，2011）。由于大约46%的患者在3年内发展为痴呆（Pal et al.，2018），因此迫切需要找到一种有效的治疗方法来延缓病情进展。但目前MCI患者的药物治疗尚无明确的标准（Teixeira et al.，2012；Chen et al.，2023），因此非药物疗法逐渐被使用来延缓MCI患者的认知能力下降（DCunha et al.，2018）。脑葡萄糖代谢率是改善认知能力的因素之一，代谢越慢，认知障碍越严重。现有文献强调，适度运动可以加速大脑葡萄糖代谢的速度，从而提高认知能力（Zhao and Xu，2021）。此外，MCI 患者可以从身体活动的恢复中受益，例如执行、记忆和独立功能（Nuzum et al.，2020）。近年来，随着神经科学和医学的快速发展，一些新的 MCI 非药物治疗方法被提出，如双任务训练 (DTT)（Norouzi 等，2019 年；Oliva 等，2020 年；Kannan 和 Bhatt，2021 年）、阻力运动（Hong 等，2018 年）、抗跌倒训练（Bhatt 等，2012 年）等。此外，基于脑电图 (EEG) 的运动疗法，如基于开环 EEG 的运动疗法（Amjad 等，2019b；Liao 等，2019 年）和基于闭环 EEG 的运动疗法（Cisotto 等，2021 年），在 MCI 的临床应用方面已显示出巨大的潜力。本文对MCI患者非药物治疗的相关文献进行了归纳和分析，包括运动治疗和基于脑电图的运动治疗，并在前人研究的基础上，关注脑电图信号是否真的能增强运动治疗的效果，最后对MCI患者基于脑电图的运动治疗的发展趋势提出了自己的看法，希望对未来提供有益的建议。
MAD7：IP友好CRISPR酶
细胞，并重悬于裂解中（20 mM Tris，500 mM NaCl和10 mM Imidazole，pH 8.0），并补充了“完整的蛋白酶抑制剂鸡尾酒”（Merck，CAT，CAT＃11697498001）。重悬于重悬酶后，苯并酶核酸酶（默克，CAT＃E1014-5KU，每40 ml裂解物10μl）和溶菌酶（默克，CAT＃10837059001，1 mg/ml裂解物），并加入冰上30分钟。细胞在Avestin乳液C-5均质器（15-20 kpsi）上被破坏，并通过离心（15,000 g，4°C，15分钟）去除不溶性细胞碎片。在10°C下进行所有随后的色谱步骤。清除的裂解物被加载在5 ml Histrap FF柱上（Cytiva，Cat＃17525501）。将树脂用10列的洗涤液（裂解效果）洗涤（但使用20 mM咪唑）洗涤，并用10列的洗脱体洗脱蛋白（裂解效果，但用250毫米咪唑）洗脱。馏分合并，并在透析中稀释至25 mL（250 mM KCl，20 mM HEPES和1 mM DTT和1 mM EDTT和1 mM EDTA，pH 8.0）。使用透析膜管透析在10°C下透析，使用分子量切割为6-8 kDa（光谱/POR标准级再生纤维素，宽23毫米）的透析膜管。1-2小时后，将透析液替换，透析继续过夜。第二天，将透析样品在10 mM HEPE（pH 8）中稀释了两倍（pH 8），并立即加载在5 mL HITRAP肝素HP柱（Cytiva，CAT，CAT＃17040601）上，并用Bu效率a（20 mM Hepes，150 mm Hepes，150 mm KCl，pH 8.0）。关注的分数被汇总并上升。将树脂用2柱体积洗涤，并使用bu虫B（20 mM Hepes，2m kcl，pH 8.0）的线性梯度在12柱体积上洗脱蛋白质。含量为2 mL；通过在120 mL SuperDex200凝胶滤光管（Cytiva＃28989335）上注射上浓缩样品，以50 mM磷酸钠，300 mM NaCl，300 mM NaCl，0.1 mm EDTA，pH 7.5 AS分离bu e e e e e e e e e e o 进行了最终的色谱步骤。进行了最终的色谱步骤。
cas12b（A.酸性）重组
描述：重组A.酸性AAPCAS12B（V型CRISPR相关蛋白CAS12B），无标签。AAPCAS12B属于V型CRISPR效应器CRISPR-CAS12B/C2C1，对于广泛的应用，高温。物种：酸性酸性酸性构建体：CAS12B（全长）（酸性）浓度：0.20 mg/ml表达系统：大肠杆菌纯度：80％格式：水缓冲液溶液。以：50 mm磷酸钠，pH 7.5、300 mm NaCl，1 mM DTT和10％甘油MW：128 kDa GenBank登录：WP_067623834稳定性：至少在-80°C时至少6个月。存储：-80°C使用的说明：在冰上解冻，并在使用前轻轻混合。不要涡旋。在打开前进行快速旋转。等分的小容量，然后闪烁冻结以进行长期存储。避免多个冻结/解冻周期。测定条件：使用基于CRISPR的荧光记者测定法测量了不同量的AAPCAS12B活性，以获得最佳结果。使用RNA引导的DNA与CAS12结合，将靶DNA切割和不加选择的单链DNA侧支裂解激活。荧光信号的发射是由于裂解后ssDNA记者的降解所致。Active Cas12 was thawed on ice while 1X Endonuclease Buffer containing 10 mM Tris- HCl, pH 8.0, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl 2 , and 0.1 mg/ml BSA, guide RNA (custom designed crRNA), ds DNA activator (complementary sequence to crRNA and a PAM sequence specific for Cas enzyme) and FQ-ssDNA substrate （用荧光团和淬火器标记）平衡为室温。然后将板密封并在37°C下孵育10-30分钟。使用1X内核酸酶缓冲液制备了活性CAS12（4倍最终浓度）指南RNA（4倍最终浓度）和含有DS DNA激活剂和SSDNA报告基因（2倍最终浓度）的激活器/报告剂混合物（2倍最终浓度）。10 µL的4倍活性CAS12和10 µL的4倍引导RNA在室温下在固体黑色96井板的一半面积中预孵育10分钟。预孵育后，将20 µL的2倍激活剂/报告基因混合物添加到板上，并将其放置在振动孵化器上1分钟。然后将板平衡至室温，去除板密封剂，并在毫用读取器上读取荧光。阴性对照是通过用相等量的测定缓冲液代替酶工作溶液来测量的。应用程序：
CD44 和 CD221 定向磁性立方体将海伦林靶向递送至横纹肌肉瘤细胞
立方体的合成无功能立方体（Cub unfun ；由 GMO、尼罗河红和 F127 组成的空立方体）和空白立方体（Cub blank ；未经功能化的 PEG 化阳离子立方体，由 GMO、DSPE-PEG-Mal、DOTAP、尼罗河红和 F127 组成）的制备采用之前发表的方法并进行了一些修改 [1]。将 GMO、DSPE-PEG-Mal、DOTAP、尼罗河红、helenalin、SPION 溶解在乙醇中并充分涡旋混合（表 S1）。在 70 °C 的真空条件下在加热块中蒸发有机溶剂，然后在 N 2 气流下进一步干燥。将脂质混合物冷冻干燥过夜。然后将 2 微克/毫升 Pluronic F127（溶于 PBS）加入干脂质中，然后以 20 kHz 的频率进行超声处理，开启 5 秒，关闭 5 秒，持续 5 分钟。为了将未封装的化合物（如 helenalin 和 Nile Red）从立方相分散体中分离出来，使用 10 kDa MWCO Slide-A-Lyzer MINI 透析装置（Fisher Scientific Ltd，拉夫堡，英国）对溶液进行透析 2 小时。对于抗体结合，将 5 µg 抗 CD221 抗体与 50 ng Traut 试剂（Sigma Aldrich，吉林汉姆，英国）在磷酸盐缓冲液（0.1 M，2 mM EDTA，pH 8.0）中在室温（RT）下反应 1 小时进行硫醇化，导致 -SH 基团附着到完整的抗体上 [2]。或者，抗 CD221 抗体通过与 10 mM DTT 在室温下反应 2 小时在铰链区处被切割。反应结束后，通过 10 kDa MWCO 透析 2 小时从硫醇化抗体或半抗体中去除残留化学物质 [3]。纯化的硫醇化抗体或半抗体通过抗体的-SH 基团和立方体上的马来酰亚胺基团之间的硫醇-马来酰亚胺迈克尔反应过夜结合到 Cub 空白中，形成 Cub wh-Ab 或 Cub ha-Ab 。对于透明质酸 (HA) 结合，将不同体积的 1 mg/mL 透明质酸与 Cub 空白在室温下孵育 4 小时，产生 Cub 1-5%HA 。我们在溶剂蒸发之前将不同量的 SPION 掺入脂质混合物中，并通过超声处理生成 Cub 1-5%ION。通过将半抗体与 Cub 1%ION 结合，再与 HA 连接，合成三功能立方体 (Cub fun)。立方体中海伦那林的包封率 (EE) 是通过将载有海伦那林的立方体经 10 kDa MWCO 透析后用乙醇溶解，并通过液相色谱 (LC) 定量 NPs 中包封的海伦那林，然后将包封的海伦那林的量除以海伦那林的总量并乘以 100 来计算的。海伦那林的释放率是通过从 100 中减去 EE 来评估的。
硫四醇素在体内具有复杂的作用，但是RNA聚合酶II的直接抑制剂。
Thiolutin has complex effects in vivo but is a direct inhibitor of RNA Polymerase II in 1 vitro 2 Chenxi Qiu 1,6 , Payal Arora 1,2 , Indranil Malik 1,7 , Amber J. Laperuta 3,8 , Emily M. Pavlovic 4,9 , Scott 3 Ugochukwu 5 , Mandar Naik 1,10 , Craig Kaplan 2 4 5 1 Department德克萨斯州A＆M大学生物化学与生物物理学，德克萨斯州大学站6 77843，美国7 2宾夕法尼亚州匹兹堡大学生物科学系15260，美国8 3 Stevenson大学，Stevenson University，Stevenson，Stevenson，Stevenson，Stevenson，MD 21153，MD 21153，M. 9 4 44 HAM HAM HAM HAM MARCOS，SAN RICHOND，美国4774，4774，10 55.4774，10 55.47344，10 55.47344.4774 78666美国11 6现在的地址：哈佛医学院，马萨诸塞州波士顿，马萨诸塞州02115，美国12 7现在的地址：生物技术系印度印度技术研究所海得拉巴，海得拉巴13号，桑加里德迪，塔兰加纳，印度TERANGANA，印度14 8现在地址：生物科学系：匹兹堡，匹兹堡，帕特斯堡，帕特斯堡，帕特斯堡，帕特斯堡，帕特斯堡，帕特斯堡，1522117，922117， Duluth，MN 55812，USA 17 10当前地址：分子药理学，生理学和生物技术部，布朗大学18号，普罗维登斯，RI 02912，美国19 20 21摘要22硫醇素是一种自然产物转录抑制剂，具有未解决的作用方式。硫醇蛋白23和相关的二硫代吡咯酮纯霉素螯合Zn 2+和先前的研究得出结论24，RNA聚合酶II（POL II）在体内抑制是间接的。在这里，我们提出了化学遗传学25和生化方法，以研究硫醇蛋白在糖疗法中的作用方式26酿酒酵母。我们识别出改变对硫四醇素敏感性的突变体。31抑制作用需要MN 2+，并且由于多余的DTT消除了其32个影响，因此需要适当的硫醇素。我们提供了遗传证据27硫醇素在体内引起硫氧还蛋白的氧化，并且硫醇素都诱导氧化28胁迫，并与包括Mn 2+和Cu 2+在内的多种金属在功能上相互作用，而不仅仅是Zn 2+。29最后，我们在体外表现出直接抑制RNA聚合酶II（POL II）转录起始，以支持经典研究，硫四醇素可以直接在体外抑制转录。易于停止，如果绕过抑制作用，可以在体外观察到缺陷。33硫四列霉素对体内POL II占用率的影响广泛，但主要影响与34个先前的TOR途径抑制和胁迫诱导的观察结果一致，这表明硫四醇素的使用35在体内应限于其作用模式的研究，而不是作为实验工具。36 37
碱基编辑酶 APOBEC3A 以低效率和高选择性催化 RNA 中的胞嘧啶脱氨
A3A 和 eA3A 表达。A3A 表达构建体 (Addgene #109231) 之前已有描述，可用于纯化 A3A 作为融合蛋白 (MBP-A3A-His)，可进一步加工以生成分离的 A3A 结构域。32,33 对于 eA3A (A3A-N57G)，N57G 突变是通过 Q5 定点诱变 (New England Biolabs, NEB) 引入的。A3A 和 eA3A 构建体的细菌表达之前已有详细描述。 33 将纯化的 MBP-A3A-His、MBP-eA3A-His 或分离的 A3A 在 50 mM Tris-Cl（pH 7.5）、50 mM NaCl、10% 甘油、0.5 mM DTT 和 0.01% Tween-20 中透析过夜，并使用 BSA 标准曲线确定蛋白质浓度。基于 SwaI 的脱氨酶对 ssDNA 和嵌合底物的活性。5'-荧光素 (FAM) 荧光标记的底物 S35-dC 或具有单个靶核糖胞嘧啶的匹配底物（在其他 DNA 骨架中）（S35-rC）由 Integrated DNA Technologies (IDT) 合成，以及相关产品对照（S35-dU 和 S35-rU）。在最佳 A3A 反应条件（最终为 20 mM 琥珀酸：NaH 2 PO 4：甘氨酸 (SPG) 缓冲液 pH 5.5，0.1% Tween-20）下，用 6 倍稀释的未标记 A3A（从 1 µM 到 4 pM）处理 100 µM 寡核苷酸。反应在 37 ˚C 下进行 30 分钟，然后终止（95 ˚C，10 分钟）。然后加入 200 nM 互补链并退火。加入 SwaI (NEB)，在室温下消化过夜。加入甲酰胺上样缓冲液，样品加热变性（95 ˚C，20 分钟），然后在 50 ˚C 下在 20% 变性 TBE/尿素聚丙烯酰胺凝胶上运行。使用 Typhoon 成像仪（GE Healthcare）上的 FAM 滤光片对凝胶进行成像。使用 ImageJ 中的面积量化工具进行定量分析。720 碱基对 ssDNA 底物的合成。为了生成 ssDNA，使用 720 bp gBlock 基因片段 (IDT) 作为模板 (补充图 2a)，并使用 Taq 聚合酶 (NEB) 进行扩增，采用指数后线性 (LATE) PCR 反应方案，该方案采用相对于磷酸化的反向引物过量的正向引物。32 对反应物进行纯化 (NucleoSpin、Fisher)，然后在 37 ˚C 下用 核酸外切酶处理 1 小时以降解磷酸化链，然后进行热失活 (90 ˚C，10 分钟)。然后将产物在 2% 琼脂糖凝胶上运行，并使用凝胶 DNA 回收试剂盒 (Zymoclean) 回收 ssDNA。通过乙醇沉淀进一步纯化 ssDNA，并使用 Qubit ® 荧光计 (ThermoFisher) 测量其浓度。对于一个重复，ssDNA 以大分子寡核苷酸 (IDT) 的形式获得，并通过乙醇沉淀进一步纯化。720 聚体 RNA 底物的合成。使用 720 bp 基因块 (IDT) dsDNA 作为模板，在推荐条件下使用 TranscriptAid Enzyme Mix (ThermoFisher) 通过体外转录生成 RNA，并在 37 ˚C 下孵育两小时。然后通过苯酚-氯仿提取和乙醇沉淀纯化 RNA。将样品重新悬浮在无核酸酶的水中，并进一步用 MspI、XbaI 和 AclI 限制性酶 (NEB) 处理以消化任何剩余的 DNA 模板。在 37 ˚C 下孵育 1 小时后，使用 RNA Clean and Concentrator-5 试剂盒 (Zymo Research) 纯化 RNA。为了进一步确保完全去除模板 DNA，在 37 ˚C 下用 DNase I (Ambion) 处理 RNA 30 分钟。重复纯化 (RNA Clean and Concentrator-5)，并使用 Qubit ® 荧光计测量纯化 RNA 的浓度。通过“预测二级结构网络”预测 720 聚体中几个中尺度区域的二级结构