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图1创建合成cAMP响应元件结合蛋白(CREB)响应启动子。(a)腺苷信号传导的描述。腺苷(红色球)结合腺苷受体A2AR/A2BR,该腺苷受体动员相关的G蛋白(绿色)激活腺苷酸环化酶(橙色受体),并将ATP转化为3'5'- 5'-循环腺苷单磷酸腺苷(Camp)。另外,福斯科蛋白(橙色球)可以直接激活腺苷循环酶。CAMP结合蛋白激酶A(PKA)与磷酸化的CREB,该CREB结合了Plindromic DNA基序“ TGACGTCA”,激活了基因表达。(b)启动子设计和筛选示意图。cAMP响应元件基序(CRE,突出显示的黄色)被克隆在3倍重复中,两侧是鸟嘌呤“ G”(带下划线),六个散布的填充核苷酸(N)。3x Cres(灰色正方形)放在核心启动子(蓝色箭头)上游的1-6个重复中。用高斯荧光素酶(GLUC)或绿色荧光蛋白(EGFP)定量启动子活性。(c,d)HEK293T细胞在96个井板中用指示的构建体(x轴)反向转染。转染后48小时,用车辆(DMSO,浅蓝色条)或20μm福斯科林(FSK,深蓝色条)将细胞介质更改为培养基。八个小时后,对培养基进行了采样并测试了GLUC活性(RLU)。条表示n = 3实验重复的平均值,误差线代表标准误差(SEM)。**通过方差分析(ANOVA)Tukey检验,与所有其他样本相比,表示P <0.01。(E,F)流式细胞仪启动子诱导。HEK293T细胞用96个井板中的指定构建体(x轴)反向转染。转染后48小时,细胞培养基被更改为未处理的培养基(浅蓝色条),或补充了0.750 m m m腺苷(ADO,深蓝色条)的培养基。八个小时后,将细胞胰蛋白酶胰蛋白酶进行胰蛋白酶,并将其重悬于FACS缓冲液中以进行流式细胞仪。y轴表示正向散射(FSC)单元的EGFP中位荧光强度。条代表n = 3实验重复的平均值,误差线代表SEM。(g)启动子对腺苷的剂量反应性。HEK293T细胞在96个井板上反向转染,并在传说中指示的构造,然后培养48小时。然后更改培养基以添加不同的腺苷浓度,在8小时后进行采样,并测试了GLUC活性(RLU)。**通过12倍-CRE_YB的ANOVA TUKEY测试代表P <0.01,与1 m m的所有其他样品相比。每个点表示n = 3实验重复的平均值,误差线为SEM。
4.2.1。基于中心的培训•在培训开学后的15天内提交开学报告。•在课程后与2名培训师进行20名学员的培训计划。•根据详细的培训计划实施培训计划。•维持有利于培训的环境,包括职业健康和安全•根据合同中规定的规定向受训人员提供旅行津贴。•进行和记录个人培训生的绩效评估•协助和合作所有利益相关者执行的监视和监督活动。•准备一项详细的OJT计划,以与提供OJT的行业的公司内部培训师进行协调。•在OJT期间,根据合同协议中提到的报告要求,分配OJT主管进行定期协调,监视和监督•提交进度报告和基于中心的培训完成报告。
邀请表达兴趣(EOI),以收集和加工香蕉相关的KWMC浪费在收入分享模型Koyambedu批发市场综合体(KWMC),这是亚洲最大的市场之一,目的是在1996年建立,目的是使中央商务区减弱。批发市场正运行于2016年成立的花,水果,蔬菜市场和粮食市场。Koyambedu批发市场位于钦奈地区的中心,并且可以通过所有运输方式可容易地使用居民和商人。
尼泊尔政府、城市发展部和地方基础设施发展部通过尼泊尔各地区的不同项目参与省级和地方公路网的道路和桥梁建设。尼泊尔宪法强调各级政府之间的合作、协调和共存。必须通过适当的干预措施来减少能力差距,以提高服务交付的有效性并加强省级和地方的相互依存关系。为了实现这一目标,地方基础设施部下属的所有七个省都已成立了地方基础设施发展项目办公室 (LIDPO)。