5. 用 PBS 清洗载玻片以清除残留的血清(参见试剂准备)。 (注2)。 6. 将载玻片浸入含有 PBS 的比色皿中 5 分钟以清洗。更换 PBS 并重复清洗。 7. 使用提供的吸水纸小心地擦干载玻片。细胞制剂必须始终保持湿润。 8. 在每个孔中放入一滴试剂 D。将载玻片放入湿室中,在室温(15-30ºC)下孵育 30 分钟。 9. 清洗(见步骤6)并干燥(见步骤7)。 10. 在载玻片上滴几滴试剂 E,并在其上盖上盖玻片,注意避免形成气泡。
线粒体DNA是研究和诊断领域的广泛测试的遗传标记。尽管如此,对不同组织中其丰度和质量的了解仍然很少。为了获得有关mtDNA含量和质量的更深入的知识,我们研究了九个组织,包括血液,骨骼,脑,头发(根和轴),心肌,肝脏,肺,肺,骨骼肌,骨骼肌和颊粘膜,以及使用两个实时定量PCR的个体使用,具有不同的基于PCR的个体,具有不同的MTDNA和NDNA和NDNA的ndnna和NDNDNA。结果表明,nDNA的数量是估计个体组织中mtDNA量以及跨个体组织的较弱的替代物。尤其是头发显示出极大的变化,描绘了每个头发碎片的多个mtDNA分子的范围。此外,降解可能会导致PCR可用的片段更少。结果要求在下游基因分型测定之前平行确定mtDNA的数量和质量。
摘要:线粒体是一种产生能量的细胞内细胞器,含有线粒体 DNA (mtDNA) 形式的自身遗传物质,mtDNA 编码对线粒体功能至关重要的蛋白质和 RNA。一些 mtDNA 突变可导致线粒体相关疾病。线粒体疾病是一组无法治愈的异质性遗传疾病,其中突变的 mtDNA 通过母体卵细胞质从母亲传递给后代。线粒体置换 (MR) 是一种基因组转移技术,其中携带疾病相关突变的 mtDNA 被假定无病的 mtDNA 取代。这种疗法旨在防止已知致病的线粒体传给下一代。这里介绍了通过基因组编辑专门去除或编辑 mtDNA 疾病相关突变的概念证明。尽管在核移植过程中引入人类卵母细胞的线粒体 DNA 携带量很低,但线粒体 DNA 异质体的安全性仍然令人担忧。对于供体-受体线粒体 DNA 错配 (mtDNA-mtDNA)、受体 nDNA 与供体 mtDNA 混合导致的线粒体 DNA-核 DNA (nDNA) 错配以及线粒体 DNA 复制分离,尤其如此。这些情况可能导致线粒体 DNA 遗传漂变和回复到原始基因型。在这篇综述中,我们讨论了有关通过核移植预防线粒体疾病遗传的当前知识状态。
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非侵入性收集的粪便样品是组织样品的DNA的替代来源,当动物直接采样时,可以在野生动植物的遗传研究中使用。尽管存在几种粪便DNA提取方法,但它们的功效在物种之间有所不同。先前从野生粪粪(Dugong Dugon)粪便中扩增线粒体DNA(mtDNA)标志物的尝试有限,核标记(微片齿)未能成功。这项研究旨在通过修改其他大型草食动物的研究中使用的方法来建立一种从粪便粪便中对MTDNA和核DNA(NDNA)进行采样的工具。首先,开发了一种简化的,具有成本效益的DNA提取方法,该方法能够从大量的粪便中扩增线粒体和核标记。粪便DNA使用新的“高体积 - cetyltrimethyl溴化铵 - 苯酚 - 氯仿 -
非侵入性收集的粪便样品是组织样品的DNA的替代来源,当动物直接采样时,可以在野生动植物的遗传研究中使用。尽管存在几种粪便DNA提取方法,但它们的功效在物种之间有所不同。先前从野生粪粪(Dugong Dugon)粪便中扩增线粒体DNA(mtDNA)标志物的尝试有限,核标记(微片齿)未能成功。这项研究旨在通过修改其他大型草食动物的研究中使用的方法来建立一种从粪便粪便中对MTDNA和核DNA(NDNA)进行采样的工具。首先,开发了一种简化的,具有成本效益的DNA提取方法,该方法能够从大量的粪便中扩增线粒体和核标记。粪便DNA使用新的“高体积 - cetyltrimethyl溴化铵 - 苯酚 - 氯仿 -
简介:自 COVID-19 大流行开始以来,已报告 COVID-19 患者的临床表现范围广泛,从无症状感染到轻度或重度疾病和死亡。研究表明了几种可能影响 COVID-19 临床结果的因素。促炎状态和抗病毒反应受损被认为是重症 COVID-19 的主要促成因素。考虑到线粒体在调节对病原体的免疫反应、促炎信号传导和细胞死亡方面发挥着重要作用,它在 SARS-CoV-2 感染中受到了广泛关注。最近的研究表明,高水平的无细胞线粒体 DNA(cf-mtDNA)与 COVID-19 重症监护病房 (ICU) 入院和死亡风险增加有关。然而,关于 SARS-CoV-2 感染中 cf-mtDNA 的研究很少,主要集中于重症 COVID-19 病例。在本研究中,我们调查了 COVID-19 患者的 cf -mtDNA 拷贝数,并比较了无症状病例和有症状病例,并评估了临床价值。我们还确定了研究组中的 cf -核 DNA (cf -nDNA) 拷贝数和线粒体转录因子 A (TFAM) mRNA 水平。
摘要简介:原发性线粒体疾病(PMD)包括由核DNA(NDNA)或线粒体DNA(mTDNA)中的致病变异引起的大型且异构的遗传疾病。广泛采用下一代测序(NGS)已提高了mtDNA诊断的效率和准确性;但是,仍然存在一些挑战。涵盖的区域:在本综述中,我们简要总结了MTDNA分子诊断的现行状态,并考虑改善了整个基因组测序(WGS),生物信息学技术的含义以及对PMD诊断的长期读取测序的采用。专家意见:我们预计,从血液DNA中使用无PCR WG的诊断实验室将增加,而对于具有肌病性表现的成年人,来自肌肉DNA的WGS可能会变得更加广泛。改进的生物信息学策略将增强WGS数据询问,并在WGS数据中更准确地描绘mtDNA和NUMTS(核线粒体DNA片段),较高的覆盖范围均匀性,间接的间接测量值MTDNA拷贝数的测量值以及更准确的精确解释,并更准确地解释了杂型级别的大小列表。单独的采用诊断长阅读序列可以为复杂的LSR提供更大的分辨率和相位异质变体的机会。