背景:肠道菌群是一个复杂的生态系统,在人类健康和疾病中起着至关重要的作用。但是,肠道菌群与烧伤引起的肠道损伤之间的关系尚不清楚。肠粘膜层对于维持肠道稳态和提供针对细菌侵袭的生理障碍至关重要。本研究旨在研究肠道菌群对烧伤后肠道粘液的合成和降解的影响,并探索烧伤损伤的潜在治疗靶标。方法:采用了修改的组织病理学分级系统来研究烧伤损伤对小鼠结肠组织和肠道粘液屏障的影响。随后,使用16S核糖体RNA测序分析燃烧后第1至10天的肠道菌群的变化。基于此,对在第1、5和10天收集的样品进行了宏基因组测序,以研究与粘液相关的微生物群的变化并探索潜在的潜在机制。结果:我们的发现表明粘液屏障被破坏,小鼠烧伤后第3天发生细菌易位。此外,从烧伤后的第1到第3天,小鼠中的肠道菌群显着破坏,但随着疾病的进展,逐渐恢复到正常。特别是,在燃烧后的第1天,与粘蛋白降解相关的共生和致病细菌的丰度显着增加,但第5天的丰度恢复了正常。相反,与粘蛋白合成相关的益生菌丰度在相反的方向上发生了变化。进一步的分析表明,在烧伤损伤后,能够降解粘液的细菌可能利用糖苷水解酶,叶叶菌和内膜分解粘液层,而合成粘液的细菌可能通过促进短链脂肪酸的产生来帮助恢复粘液层。结论:烧伤损伤导致肠结肠粘液屏障和肠道菌群的营养障碍。一些共生和致病性细菌可能通过糖苷水解酶,叶酸,内膜等参与粘蛋白降解。益生菌可以提供短链脂肪酸
样品比比利时(p = 1.3 x 10 -5,p = 2.0 x 10 -4),智利(p = 4.0 x 10 -4,p = 1.5 x 10 -2)和166
使用博物馆标本用于微生物进化生态学研究的研究仍然是一个未充分利用的研究维度,具有重要潜力。尽管存在这种潜力,但在方法论和分析中仍然存在广泛采用此类研究的博物馆标本的障碍。在这里,我们假设样本类型(博物馆或新鲜)和测序策略(中等深度shot弹枪元基因组或16S rRNA基因)之间的分类预测和相关多样性将存在显着差异。与博物馆和新鲜样品中的16S rRNA基因测序相比,shot弹枪宏基因组学的预测多样性较高,博物馆标本中这种差异更大。广泛证实了这些假设,新鲜样品中发现的最高多样性是使用REP200参考的shot弹枪测序,其中包括病毒和微核素,然后是WOL参考数据库。在博物馆特殊的情况下,测序策略之间的社区多样性指标也有很大差异,而alpha-doverity Ace差异显着大于对新样本进行的相同比较。beta多样性结果的变化更大,并且依赖于所使用的参考数据库。综上所述,这些发现存在多样性结果的重要差异,并迅速考虑了未来的实验和下游分析,旨在纳入博物馆标本中的微生物组数据集。
鸟类肠道菌群一直是最近关注的主题,对诸如家禽行业,微生物生态学和保护等各种领域的潜在影响。粪便微生物群经常用作肠道菌群的非侵入性代理,但是从鸟类粪便中提取高质量的微生物DNA经常被证明具有挑战性。在这里,我们旨在评估两种DNA保存方法(95%乙醇和rnalater)和五种提取方法(Indispin病原体试剂盒,Qiaamp PowerFecal ProFecal Pro DNA Kit,Microgem Prepgem Prepgem细菌试剂盒,Zymbobiommics DNA Miniprep Kit和In Bane In In Base AVA AVA)用于研究。对这些方法对来自最初三种禽类(鸡,鸵鸟和无飞行parrotkākāpō)的粪便样品的功效的系统测试发现,提取的DNA的质量,数量和完整性在提取的DNA的质量,数量和完整性上存在实质性差异,但对16S rRNA Gene基于基于基于的RRNA Gene Microbobiota profiles的质量,数量和完整性却微不足道。随后在10种系统发育和生态上多样化的鸟类物种上选择了保存和提取方法的选定组合,重申了所选方法的疗效,细菌群落结构通过技术复制的特定禽类强烈聚集。我们发现,提取功效的明显差异似乎不会影响16S基因基因的细菌群体概况,为正在进行的对鸟类肠道微生物群的研究奠定了重要的基础。
核仁显性 (ND) 是 35-48S rDNA 基因座的选择性表观遗传沉默。在异源多倍体中,它通常表现在细胞遗传学水平上,即从一个或多个进化祖先遗传下来的核仁组织区 (NOR) 失活。禾本科植物在生态和经济上是最重要的陆生植物群之一,它们经常通过杂交和多倍化事件进化。在这里,我们从细胞遗传学、分子和基因组学的角度回顾了这个单子叶植物科中 ND 现象的共同特征和独特特征。我们重点介绍了使用异源四倍体模型禾本科植物 Brachypodium hybridum 取得的最新进展,其中 ND 通常发生在种群水平,并且我们介绍了解读 NOR 核心阵列结构特征的现代基因组方法。
CRISPR 技术是研究基因组功能的强大工具。为了帮助从众多可能的选项中挑选出对目标靶标具有最大功效的 sgRNA,几个研究小组开发了预测 sgRNA 靶向活性的模型。尽管多种 tracrRNA 变体通常用于筛选,但现有的模型在提名 sgRNA 时都没有考虑到这一特征。在这里,我们开发了一个靶向模型,规则集 3,它可以对多种 tracrRNA 变体做出最佳预测。我们在一个新的 sgRNA 数据集上验证了规则集 3,该数据集涵盖了必需和非必需基因,与之前的预测模型相比有显著的改进。通过分析 tracrRNA 变体之间 sgRNA 活性的差异,我们表明 Pol III 转录终止是 sgRNA 活性的重要决定因素。我们期望这些结果能够提高 CRISPR 筛选的性能,并为未来对 tracrRNA 工程和 sgRNA 建模的研究提供参考。
摘要 近 90% 的人类致病突变是由微小的基因变异引起的,有效纠正这些错误的方法至关重要。进行微小 DNA 改变的一种方法是提供单链寡脱氧核苷酸 (ssODN),该单链寡脱氧核苷酸包含一个改变,并在基因组的目标位点处与靶向双链断裂 (DSB) 相结合。将 ssODN 供体与 CRISPR-Cas9 介导的 DSB 结合是引入微小改变的最简化方法之一。然而,在许多系统中,这种方法效率低下,并且会在基因连接处引入不精确的修复。我们在此报告一种使用 ssODN 和 CRISPR-Cas9 的时空定位来改进基因改变的技术。我们表明,通过将 ssODN 模板与反式激活 RNA (tracrRNA) 融合,我们可以恢复精确的基因改变,并且在体外和体内的整合度和精确度都有所提高。最后,我们表明该技术可用于与其他基因编辑工具(如转录激活因子如效应核酸酶)一起增强基因转换。
凌欣宇, 1 , 5 常丽英, 1 , 5 陈鹤琪, 1 高晓琴, 1 尹建航, 2 , 3 左毅, 1 黄玉佳, 1 张波, 4 胡佳芝, 2 , 3 和刘涛 1 , 6 , * 1 北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室, 北京市海淀区学院路 38 号, 100191, 中国 2 北京大学生命科学学院细胞增殖分化教育部重点实验室, 基因组编辑研究中心, 北京 100871, 中国 3 北京大学北大-清华生命科学联合中心, 北京 100871, 中国 4 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院医学研究中心, 北京 100730, 中国 5 上述作者贡献相同 6 主要联系人*通讯地址:taoliupku@pku.edu.cn https://doi.org/10.1016/j.molcel.2021.09.021
选项2:使用Hibit印迹确认全长蛋白的表达。取编辑的细胞样品,并用首选缓冲液裂解。在凝胶上运行样品,将蛋白质转移到膜上并使用纳米-Glo®Hibit印迹系统检测。使用未经编辑的细胞作为背景的负面对照。