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KYLT® RNA / DNA 纯化 HTP 试剂盒的自动化，用于快速兽医诊断
简介 通过分子分析检测和监测兽医病原体是评估风险和减少财务损失的有效工具。动物疾病不仅会造成生产力损失，还会对食品安全构成威胁。因此，对从农场到餐桌的整个食品生产链进行持续评估对于公共健康至关重要。传统的基于培养的方法不太适合检测某些细菌或病毒病原体。相比之下，实时 (RT) PCR 在灵敏度和特异性方面都具有优势，并且可以在快速的周转时间内完成。作为 SAN 集团的一部分，KYLT 开发和生产了广泛的基于 (RT-)qPCR 的检测方法，以简化相关兽医和食品病原体的诊断。ANICON 还提供这些检测作为诊断服务。为了应对有时每天超过 600 个样本的高处理需求，我们开发了一种功能极其强大的自动化解决方案，该解决方案集成了 KYLT 净化器元件设备。在这里，我们介绍了一种全自动解决方案，用于
矮化和自剪枝的基因组编辑可快速赋予适合植物工厂的特性，同时保留番茄的有用特性
采用人工光照的植物工厂比露天种植受作物栽培环境因素的影响更小，作为解决世界粮食问题的解决方案之一而受到关注。然而，植物工厂的栽培成本高于露天种植，目前，工厂化种植的有利可图的作物品种仅限于那些体型较小或生长期较短的品种。番茄是世界各地主要消费作物之一，但由于其株高和株宽较大，尚不适合在植物工厂中大规模生产。本研究利用 CRISPR–Cas9 方法对 GABA 超积累番茄品种#87-17 的 DWARF( D ) 和 SELF-PRUNING( SP ) 基因进行基因组编辑，以生产矮化番茄植株。在 T 1 基因组编辑代中获得了所需性状，果实性状与原始品种几乎相同。另一方面，含有 d 和 sp 突变的 #87-17 与 Micro-Tom 之间的 F 2 杂交品种矮化，但果实表型是两个品种性状的混合。这表明使用 CRISPR–Cas9 对这两个基因进行基因组编辑可以有效地赋予适合植物工厂化栽培的性状，同时保留原始品种的有用性状。
脑脊液靶向测序快速鉴定耐药结核性脑膜炎
摘要 结核性脑膜炎 (TBM) 的死亡率仍然保持在 30% 左右，大多数死亡发生在开始治疗后的 2 个月内。耐药菌株的死亡率更高，因此及早发现耐药性 (DR) 至关重要。靶向下一代测序 (tNGS) 产生高读取深度，可以检测低频率的 DR 相关等位基因。我们将 Deeplex Myc-TB（一种 tNGS 检测）应用于 72 名经微生物学确诊的 TBM 成人的脑脊液 (CSF) 样本，并将其基因组药物敏感性预测与表型敏感性测试 (pDST) 和全基因组测序的综合参考标准以及临床结果进行了比较。Deeplex 在 24/72 (33.3%) 个 CSF 样本中检测到结核分枝杆菌复合体 DNA，并为 22/24 (91.7%) 生成了完整的 DR 报告。 Deeplex 生成的读取深度与 MTB/RIF Xpert 的半定量结果相关。在与一线 DR 相关的典型基因座上可以看到频率 <20% 的等位基因。忽略这些低频等位基因，Deeplex 与除吡嗪酰胺和链霉素以外所有药物的综合参考标准 100% 一致。三名患者在治疗 30 天后脑脊液培养呈阳性；参考测试和 Deeplex 在其中两名患者中鉴定出异烟肼耐药性，而 Deeplex 单独在一名患者中鉴定出低频利福平耐药等位基因。五名患者死亡，其中一名患者通过 pDST 鉴定出吡嗪酰胺耐药性。脑脊液 tNGS 可以快速准确地检测出耐药 TBM，但其应用仅限于细菌负荷较高的患者。对于细菌负荷较低的患者，需要开发诊断和耐药性检测的替代方法。
护士处方对糖尿病患者的医疗保健分娩的影响
简介。全球糖尿病患病率是一个紧迫的公共卫生问题。超过4亿个人患有这种疾病的影响，主要是低收入和中等收入的国家。在新西兰Aotearoa（新西兰）中，超过30万人患有糖尿病，导致人口率为43.1，每1000。使护士可以开处方糖尿病药物可以提高可及性并改善大量人群的健康结果。目标。进行了迅速的审查，以调查针对新西兰，澳大利亚，英国和加拿大糖尿病患者的护士处方对医疗保健分娩的影响，共享可比的医疗保健系统和多元文化背景的国家。方法。审查协议发表在Prospero上。在2022年11月，在多个数据库中进行了搜索，以找到限制在过去十年（从2012年1月至2022年11月）的相关文献和资源。利用首选的报告项目进行系统的评论和荟萃分析框架，数据提取是系统地结构的，而严格的评估过程则保持了选择质量。结果。15个出版物被确定为符合预定义的纳入和排除标准。对这些文章的审查揭示了四个主要主题：开处方对临床结果的影响，患者满意度，对医疗保健服务规定的影响以及与护士处方相关的障碍和促进者的识别。讨论。本报告确定了护士预先订阅的结果，得出结论，它提供了一种潜在的途径，以增强对医疗保健系统的访问和减轻负担。
RCSM的临床验证：一种快速敏感的CRISPR-CAS12A测试，用于从唾液中检测SARS-COV-2的分子检测
秘鲁的持有全球人均死亡率最高。这一结果的关键是缺乏可靠，快速和准确的分子测试，无法通过RT-QPCR避免SARS-COV-2检测的成本和物流的升高。为了促进在农村和社会经济剥夺的环境中进行大规模和及时的共同测试，我们实施并验证了RCSM，这是一种快速而敏感的CRISPR-CAS12A测试，用于从唾液中对SARS-COV-2进行分子检测。rcsms使用CRISPR-CAS技术和横向流条的功能，即使在设备有限的实验室中，即使在实验室中，SARS-COV-2也很容易地可视化。我们表明，使用TCEP/EDTA进行低成本的热化学处理足以使唾液中的病毒颗粒和细胞核酸酶失活，从而消除了需要用商业试剂盒提取病毒RNA的需要，以及笨拙的鼻咽猪咽swab手术和生物液级别的需求，以及生物液级别的2级实验室。值得注意的是，在利马两家医院进行的352名患者进行的临床验证中，RCSM在40分钟内检测到每10μL反应的352例患者，其灵敏度和特异性分别为96.5％和99.0％，相对于RT-QPCR。从该字段验证获得的负和正预测值表明，RCSM可以自信地部署在高和低患病率设置中。与其他基于CRISPR-CAS的生物传感器一样，RCSM可以轻松地重新编程以检测新的SARS-COV-2变体。我们得出的结论是，RCSM是RT-QPCR的快速，高效且廉价的替代品，用于扩大秘鲁和其他低收入和中低收入国家的COVID-19测试能力，具有不稳定的医疗保健系统。
多重RPA和CRISPR-CAS12A系统，用于快速且具有成本效益的抗碳青霉苯甲酸杆菌baumannii
（Fursova等，2023），菌血症（Hong等，2023; Nutman等，2023）和与呼吸机相关的肺炎（Riddles and Judge，2023）。值得注意的是，鲍曼尼曲霉最常见于重症监护病房（ICU）和重症患者，在这些患者中，感染对器官衰竭和脓毒症产生了显着贡献，代表了患者死亡的主要原因（Blanco等，2018; Seok等，2021）。碳青霉烯类历史上一直是控制A. baumannii感染的一线药物。然而，在过去的几十年中，这类药物的广泛使用，再加上鲍曼尼a。baumannii的内在耐药性和获得的抗药性特征，从而导致了受碳苯二甲酸苯甲酸甲抗体引起的感染的升级，这是由碳苯二甲酸苯丙胺的抗苯甲酸抗菌素（crab）（crab）（Raible等，2017年）。这种抗性特征表现出广泛的抗菌耐药性，进一步提高了其发病率和死亡率（Hamidian and Nigro，2019年）。目前，只有有限数量的药物，例如多粘蛋白和Tigecycline，可用于管理感染（Abdul-Mutakabbir等人，2021年）。螃蟹在世界卫生组织的病原体优先级清单中持有“优先级1：批判性”的名称，这表示对全球公共卫生的严重威胁（Tacconelli等，2018）。在马里兰州进行的一项调查，涉及482例机械通风患者的调查显示，鲍曼尼a。30.7％的感染率为30.7％，螃蟹占88例（59.5％）（Harris等，2023）。此外，一项调查报告了几乎所有临床或非临床蟹阳性患者的环境中的螃蟹载荷类似（Schechner等，2023）。因此，预防和控制螃蟹感染的及时有效策略对于限制其对医院获得的感染和死亡率的影响至关重要。
全基因组分析有助于快速准确地鉴定真菌种类
真菌鉴定是真菌研究的基础，但传统的分子方法难以在现场快速准确地鉴定，特别是对于近缘物种。为了解决这一挑战，我们引入了一种通用的鉴定方法，称为全基因组分析（AGE）。AGE 包括两个关键步骤：生物信息学分析和实验实践。生物信息学分析在真菌物种基因组内筛选候选靶标序列，称为 Targets，并通过将它们与其他物种的基因组进行比较来确定特定 Targets。然后，使用测序或非测序技术的实验实践将验证生物信息学分析的结果。因此，AGE 为子囊菌门和担子菌门中的 13 个真菌物种中的每一个获得了超过 1,000,000 个合格 Targets。接下来，测序和基因组编辑系统验证了特定 Targets 的超特异性性能；尤其值得注意的是首次展示了来自未注释基因组区域序列的鉴定潜力。此外，通过结合快速等温扩增和硫代磷酸酯修饰引物以及无需仪器的可视化荧光方法，AGE 可以在 30 分钟内通过单管测试实现定性物种鉴定。更重要的是，AGE 在识别近缘物种和区分中药及其掺假物方面具有巨大潜力，尤其是在精确检测污染物方面。总之，AGE 为基于全基因组的真菌物种鉴定的发展打开了大门，同时也为其在植物和动物界的应用提供了指导。
快速综合征PCR的潜在价值用于诊断天然和假体关节感染：一项现实世界证据研究
Pascus Stephanie 1 , Noble 2 , Syronine Ahmat 4 , Sharon Amit 6 , Rachel Annett Barriett 10 , Mario Berth 11 , Bondi 12 : Daniel Goldenberger 16 , Andrej Golle 23 , Juna O. Groonrouos 24 , Peter, St. Hoffmann Karahan 28 , Laura Laura 10 , Laurde Lee Host 21:22 , Caroline Louis 30 ,罗伯特·J·米尔本（Robert J. Milburn）4，卢克·S·P·摩尔（Luke S. Trebe Wouthuyzen-Bakker 40，Brianne Couturier 2和Florence Allland
开发一种快速定量方法，以区分MS1疫苗菌株与野生型支原体Synoviae
支原体Synoviae（MS）是家禽行业中经济上重要的病原体。疫苗接种是预防和控制MS感染的有效方法。目前可获得两种活体减毒MS疫苗，即温度敏感的MS-H疫苗菌株和NAD独立的MS1疫苗菌株。疫苗菌株与野生型（WT）菌株的分化对于监测MS感染至关重要，尤其是在疫苗接种后。在这项研究中，我们开发了一种Taqman双链实时聚合酶链反应（PCR）方法，以鉴定来自WT菌株的MS1疫苗菌株。该方法是特异性的，并且没有与其他禽病原体交叉反应。灵敏度分析表明，在双工实时PCR中，探针或混合模板和纯模板之间没有抑制作用。与基于熔体的不匹配扩增突变测定（MAMA）相比，我们的方法更敏感和快速。总而言之，Taqman双工实时PCR方法是单个反应中WT-MS和MS1疫苗菌株的诊断和分化的有用方法。
一种用于快速和敏感检测MPOX病毒的现场诊断方法
图1通过整合侧向流条（RAA -LF）系统，重组酶 - AID放大测定法的特异性和灵敏度。（a）横向流条的说明。FITC-生物素标记的RAA扩增子首先与胶体金标记的抗FITC抗体结合。随着偶联的飞行，该建筑群被测试线上的链霉亲和蛋白捕获。其余的复合物继续向前扩散，并被控制线的抗FITC抗体抗体捕获。在测试和控制线上的视觉带表示正读数，而控制线处的单个频段仅表示负读数。（b，c）用底漆和探针集对MPXV和VACV DNA的RAA -LF检测，靶向D6R，E9L，N3R和N4R基因。控件不包括模板控件（模拟）。（d）使用MPXV DNA作为具有横向流量读数的模板的D6R，E9L，N3R和N4R引物的检测极限。MPXV DNA浓度作为基因组拷贝/μL表示。控件不包括模板对照（模拟）。（E）在手掌温度下放大N4R引物和探针设置的横向流量结果。在指定的时间消除了10μL反应产物的体积并用横向读数进行测试。所有实验重复了三次，显示了一个代表性结果。