MEM是由Harry Eagle开发的,是合成细胞培养基制剂的最广泛使用的基础培养基之一。mem是基础培养基(BME)的一种修饰,比BME含有更高浓度的必需营养素。MEM经常用于培养单层中生长的各种细胞。
CRISPR/Cas 系统基因编辑作为一种功能性基因组学工具,彻底改变了植物生物学。它通过加速优良品种的开发、创造遗传变异以及帮助驯化野生和孤儿作物,极大地促进了植物育种和作物改良。基因编辑是一个快速发展的领域。一些进步包括开发不同的 Cas 效应物,以增加靶标范围、提高效率,并增强通过碱基编辑和主要编辑进行精确 DNA 修饰的能力。现有的各种 CRISPR 试剂工具箱有助于基因敲除、靶向基因插入、精确碱基替换和多路复用。然而,植物基因组编辑的主要挑战仍然是将这些试剂有效地输送到植物细胞中。由于多倍体和其他基因组重排的普遍存在,植物与其他生物系统相比具有更大、更复杂的基因组结构。此外,植物细胞周围的坚硬细胞壁阻止任何外来生物分子的进入。不幸的是,仅在有限数量的植物物种中建立了用于递送基因编辑试剂的遗传转化。最近,CRISPR 试剂在植物中的递送取得了重大进展。本综述重点探讨这些递送机制,这些机制分为农杆菌介导的递送和突破、基于粒子轰击的生物分子递送和最近的改进,以及原生质体(一种用于植物基因编辑和再生的多功能系统)。植物基因编辑的最终目标是建立高效且不依赖基因型的试剂递送机制,以同时编辑多个目标,并大规模实现无 DNA 的基因编辑植物。
当该技术首次被发现时,需要构建质粒载体来表达 Cas 酶和 gRNA,因为长合成 RNA 非常昂贵且不广泛可用。转染的质粒将利用细胞的转录和翻译机制来产生 Cas 蛋白和 gRNA。然而,现在大量数据表明这种方法效率低下,并且会产生很高的脱靶效应。将 Cas 蛋白和 gRNA 作为核糖核蛋白 (RNP) 复合物递送是一种有效且经过验证的方法,与质粒表达载体相比具有多种优势。
或细胞培养病毒或 rHA • 参考抗原和 PLS 通常由制造商捐赠;ERL 负责校准参考抗原 • 使用“初级液体标准”(PLS) 校准第一个(初级)冻干参考抗原;后续批次使用初级冻干参考抗原进行校准(二次校准)
阳离子脂质有助于将核酸递送到真核细胞中。它们的基本结构由带正电的头部基团和一条或两条烃链组成。带电的头部基团介导脂质与核酸带负电的磷酸骨架之间的相互作用。据推测,这些相互作用导致核酸-脂质体复合物的形成,该复合物随后可能与靶细胞的质膜接触并通过内吞作用被吸入。或者,核酸-脂质体复合物可能与质膜融合并混合,将核酸沉积到细胞质中。
图 1. 最佳条件基于细胞存活率和靶向敲除率。根据上述方案,每次电穿孔用含有靶向人 CD19 的 crRNA 的 RNP(从针对不同 B 细胞系中细胞内和细胞外标志物的 30 多种 crRNA 筛选中选择)转染 100 万个 Ramos 细胞。(A)电穿孔后的第二天,用 2.5 μg/mL 碘化丙啶(BioLegend,产品目录号 421301)对部分细胞染色,并通过流式细胞术进行分析。(B)电穿孔五天后,用 2.5 μg/mL Alexa Fluor ® 647 抗人 CD19(BioLegend,产品目录号 302220,克隆 HIB19)加碘化丙啶对部分细胞染色,并通过流式细胞术进行分析。对照 = 未经电穿孔的细胞:RNP 混合物。数据由德国弗莱堡大学的 Marco Cavallari 博士提供。
CRISPR/Cas9 已成为斑马鱼基因组编辑的有力工具,它允许使用 DNA 模板和同源定向修复 (HDR) 快速产生功能丧失突变和特定等位基因的敲入。我们检查了合成的、化学修饰的 gRNA 的效率,并证明与重组 Cas9 蛋白结合可诱导插入缺失和大型基因组缺失。我们开发了一种体内遗传检测方法来测量 HDR 效率,并利用该检测方法来测试改变模板设计对 HDR 的影响。利用合成的 gRNA 和线性 dsDNA 模板,我们成功地在多个基因组位点进行了荧光团的敲入,并证明了以高效率通过种系传递。我们证明合成的 HDR 模板可用于敲入细菌硝基还原酶 (ntr),以促进特定细胞类型的谱系消融。总的来说,我们的数据证明了结合合成 gRNA 和 dsDNA 模板在体内进行同源定向修复和基因组编辑的实用性。
用于 HPLC 梯度分析。通过临界波长的梯度控制洗脱和漂移可确保无峰基线。GOLD 质量,过滤深度为 0.1 µm,适合 UPLC 分析。更多
Thermo Scientific™TMTPRO试剂使研究人员能够在单个LC-MS/MS实验中同时识别和量化许多样品中的蛋白质和肽。当前的TMTPRO同质质量标签结合了13 C&15 N稳定的同位素,以通过高分辨率MS/MS分析并行对多达18个样品进行定量分析。为了进一步提高多路复用能力,我们开发了17种同位素的同型同位同位素集,该集合在记者组上包含一个2 h同位素,以产生不同的记者离子质量,与3 MDA的现有集合不同。与传统的试剂集合结合使用,氘化试剂可以对Thermo Scientific™Orbitrap平台上多达35个样品进行多重定量分析。在这里,我们表征了新型的TMTPRO变体,并评估了它们的32个PLEX定量的性能。
digeorge综合征临界区域基因2(DGCR2)蛋白已被认为是胰腺中的β细胞特异性蛋白,但到目前为止,缺乏适用于靶向药物或分子成像的可用高亲和力粘合剂。杂物分子属于一类小亲和力蛋白,具有出色的分子成像特性。在这里,我们进一步验证了胰腺和干细胞(SC)衍生的β细胞中DGCR2的存在,然后描述靶向人DGCR2的几种候选候选物的产生和选择。使用内部开发的定向进化方法,生成了新的DGCR2结合分子并评估了热稳定性和亲和力。杂物分子变体进一步开发为将成像试剂传递到β细胞的靶向剂。Affibody分子Z DGCR2:AM106显示纳摩尔亲和力,合适的稳定性和生物分布,对胰岛的毒性可忽略不计,将其作为用于进一步开发的合适铅候选者,作为用于特定药物递送和对Beta细胞成像的特定递送的工具。