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利用CRISPR/Cas9基因编辑技术治疗β-地中海贫血的最新进展
dsDNA 或 ssODN 作为模板进行精确修复 , 而非同源末端连接 (NHEJ) 介导的随机修复可造成插入 、 缺失或突变 . ssODN: 单链寡核苷酸 ; dsDNA: 双链 DNA Figure 3 Two CRISPR/Cas9 gene editing strategies. Cas9 creates DNA double strand break at three bases upstream of the PAM sequence. Homologous recombination repair (HDR) mediates precise repair using dsDNA or ssODN as a template, while non-homologous end joining (NHEJ) -mediated repair can cause insertion, deletion or mutation. ssODN: Single-strand oligodeoxynucleotide; dsDNA: Double strand DNA
使用同源-NCI在Frederick的基因工程
■摘要在过去的几年中，体内技术已经出现，由于其效率和简单性，可能有一天会取代标准的基因工程技术。可以在质粒上或直接通过同源重组从PCR产物或合成寡核苷酸的大肠杆菌染色体上制成。这是可能的，因为噬菌体编码的重组函数有效地将序列与同源性序列短至35至50个碱基对。这项称为重新组合的技术正在提供修改染色体基因和片段的新方法。本综述不仅描述了重新组合及其应用，而且总结了大肠杆菌中的同源重组以及同源重组的早期使用以修饰细菌染色体。最后，基于噬菌体介导的重组功能在复制叉时的前提，提出了特定的分子模型。
早期真核生物的基因组扩展推动了从横向基因转移向减数分裂性别的转变
摘要 原核生物通过横向基因转移 (LGT) 从环境中获取基因。环境 DNA 的重组可以防止有害突变的积累，但第一批真核生物放弃了 LGT，转而选择有性生殖。我们在此开发了一个单倍体群体经历 LGT 的理论模型，其中包括两个新参数，即基因组大小和重组长度，这两个参数被以前的理论模型忽略了。真核生物的复杂性与更大的基因组有关，我们证明 LGT 的好处会随着基因组大小的增加而迅速下降。只有通过增加重组长度（与基因组大小相同的数量级）才能抵抗较大基因组的退化——就像在减数分裂中发生的那样。我们的研究结果可以解释在早期真核生物进化过程中对有性细胞融合和相互重组进化的强大选择压力——减数分裂性别的起源。
DNA损伤通过锥虫瘤的镶嵌变体表面糖蛋白（VSG）驱动抗原多样化。
图2。DNA双链破裂时，当同源性可用时触发镶嵌VSG形成a）沿Antat1.1转录本鉴定出的独特重组事件的直方图。Cas9 DNA断裂位点由垂直线表示。相对于VSG转录本的5'端的剪切位置为：243、369、694、894、978和1459。截面有色，以指示已确定的供体VSG。r表示与反向链结合的指南。绘制了ANTAT1.1与供体VSG之间的完美同源性的中点。如果镶嵌序列匹配> 1个潜在的供体VSG，则绘制平均重组位置。b）定量由DNA断裂引起的镶嵌重组事件。与从该区域的未经常规读数计数相比，该区域内检测到的250bp或下游中检测到的重组事件的数量被归一化，并具有最小的覆盖范围，以控制测序深度。（n = 2，两个独立的克隆）统计显着性是用带有事后Tukey HSD（** p <0.01）平均值的单向方差分析确定的。c）在ANTAT1.1内断裂后分离出的寄生虫克隆的镶嵌VSG示意图。显示的代表序列。d）在所有分离的镶嵌表达克隆中鉴定出的供体VSG插入长度的直方图。插入长度仅包括新插入的序列，不包括重组位点。e）atat1.1家族的示意图与antat1.1转录本排列。灰色序列与atat1.1的完美匹配。f）在每个重组位点，ANTAT1.1和供体VSG之间共享身份长度的直方图。g）量化Eatro1125和Lister427寄生虫的VSGNOM中VSG类型。lister427 vsgnome具有5个vsgs，可以完全复制，没有任何其他家庭成员。sl = 5'剪接领导者序列，14-mer = 3'序列在所有VSG转录本中保守
2024 年 10 月 31 日 - 行业通知。......
行业通知 2024 年 10 月 31 日，Perpetual Energy Inc.（“Perpetual”）和 Rubellite Energy Inc.（“Rubellite”）根据《商业公司法》（艾伯塔省）第 193 条的规定进行了重组，成立了 Rubellite Energy Corp.，Rubellite 和 Perpetual 成为 Rubellite Energy Corp. 的全资子公司。由于重组结构和公司共同股权所有权，重组不会导致 Rubellite 或 Perpetual 的控制权变更。鉴于上述情况，自 2024 年 10 月 31 日起，有关 Perpetual、Perpetual Energy Partnership、Rubellite 或 Ukalta Limited Partnership 的所有通知、信函、发票或付款应继续发送至以下地址的适用实体：
将细胞融合与 CRISPR-Cas9 编辑相结合，在酵母中克隆较大的 DNA 片段或完整的细菌基因组
图 1：CReasPy-Fusion 方法的实验流程示意图。步骤 1（借用 CReasPy-Cloning 策略，左栏）：用两个质粒转化酵母，从而表达 Cas9 核酸酶和 gRNA。步骤 2（借用 Fusion Cloning 策略，右栏）：在线性重组模板（由酵母元件 CEN-HIS3 组成，带有或不带有 ARS，两侧是与目标基因座两侧相同的两个重组臂和一个抗生素抗性标记）存在下，将预装 pCas9 和 pgRNA 的酵母细胞与支原体细胞接触。步骤 3：进入酵母细胞后，目标基因组被 Cas9 切割，随后由酵母同源重组系统使用提供的线性 DNA 片段作为模板进行修复。因此，细菌基因组现在包括插入到精确位置的酵母元素，并由酵母作为着丝粒质粒携带。
将细胞融合与 CRISPR-Cas9 编辑相结合，在酵母中克隆较大的 DNA 片段或完整的细菌基因组
图 1：CReasPy-Fusion 方法的实验流程示意图。步骤 1（借用 CReasPy-Cloning 策略，左栏）：用两个质粒转化酵母，从而表达 Cas9 核酸酶和 gRNA。步骤 2（借用 Fusion Cloning 策略，右栏）：在线性重组模板（由酵母元件 CEN-HIS3 组成，带有或不带有 ARS，两侧是与目标基因座两侧相同的两个重组臂和一个抗生素抗性标记）存在下，将预装 pCas9 和 pgRNA 的酵母细胞与支原体细胞接触。步骤 3：进入酵母细胞后，目标基因组被 Cas9 切割，随后由酵母同源重组系统使用提供的线性 DNA 片段作为模板进行修复。因此，细菌基因组现在包括插入到精确位置的酵母元素，并由酵母作为着丝粒质粒携带。
孔雀鱼的Y染色体是如何进化的？
与常染色体不同，许多物种的性染色体对不会发生基因重组。有人提出，抑制重组是由自然选择造成的，这种自然选择倾向于将性别决定基因与这种染色体上的突变紧密联系在一起，这种突变对某一性别有利，而对另一性别不利（这被称为性拮抗突变）。目前尚未描述过这种选择导致抑制重组的例子，但孔雀鱼种群表现出性拮抗突变（影响雄性颜色），预计会进化出抑制重组。在孔雀鱼现存的近亲中，Y 染色体已抑制重组，并失去了 X 上的所有基因（这被称为基因退化）。然而，尽管孔雀鱼 Y 染色体携带性拮抗突变，但它偶尔会与 X 染色体重组。我们描述了孔雀鱼最近进化出一种新的 Y 染色体的证据，这种 Y 染色体来自与这些亲属相似的 X 染色体，取代了旧的、退化的 Y 染色体，并解释了为什么孔雀鱼配对仍然会重组。雄性着色因素可能在新的 Y 染色体进化之后出现，并且已经进化出仅限于雄性的表达方式，这是避免两性冲突的一种不同方式。
