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通过 CRISPR/Cas 介导的同源重组在模型硅藻 Thalassiosira pseudonana 中进行有效的基因替换
CRISPR/Cas 能够对包括模型硅藻 Thalassiosira pseudonana 在内的许多不同植物和藻类进行靶向基因组编辑。然而，迄今为止，仅报道了通过同源重组 (HR) 实现的有效基因靶向适用于单倍体生命周期阶段的光合生物。在这里，使用 Golden Gate 克隆组装的 CRISPR/Cas 构建体能够在二倍体光合生物中实现高效的 HR。使用序列特异性 CRISPR/Cas 并与 dsDNA 供体基质配对，在 T. pseudonana 中诱导同源重组，从而用抗性盒 (FCP: NAT) 替换 silacidin、硝酸还原酶和脲酶基因。通过嵌套 PCR 筛选出高达约 85% 的 NAT 抗性 T. pseudonana 菌落对 HR 呈阳性。使用反向 PCR 方法确认了 FCP: NAT 在每个位点的精确整合。硝酸还原酶和尿素酶基因的敲除分别影响了硝酸盐和尿素的生长，而 T. pseudonana 中 silacidin 基因的敲除导致细胞尺寸显著增加，证实了该基因在中心硅藻中调节细胞尺寸的作用。HR 的高效基因靶向使 T. pseudonana 像 Nannochloropsis 和 Physcomitrella 一样易于遗传处理，从而迅速推进了功能性硅藻生物学、生物纳米技术和生物技术应用，这些应用旨在利用硅藻的代谢潜力。
基因组替换为感光变体揭示生长锥的发育需要 EB1
摘要 分析动态细胞内生物过程的一个挑战是缺乏足够快速且特异性的方法来扰乱细胞内蛋白质活动。我们之前通过在功能域之间插入蓝光控制的蛋白质二聚化模块，开发了微管加末端追踪蛋白 EB1 的光敏变体。在这里，我们描述了一种先进的方法，可以在单个基因组编辑步骤中用这种光敏变体替换内源性 EB1，从而使这种方法可以在人类诱导多能干细胞 (hiPSC) 和 hiPSC 衍生的神经元中使用。我们证明，在发育中的皮质神经元中，急性和局部光遗传学 EB1 失活会诱导生长锥周围微管解聚，随后导致神经突回缩。此外，前进的生长锥会被蓝光照射区域排斥。这些表型与神经元 EB1 同源物 EB3 无关，揭示了 EB1 介导的微管末端相互作用在神经元形态发生和神经突引导中的直接动态作用。
利用 CRISPR-Cas9 同时进行 HDR 过表达和 NHEJ 抑制，在杨树中进行精确的外源插入和序列替换
CRISPR 介导的基因组编辑已成为生物性状遗传修饰的有力工具。然而，开发基于同源定向 DNA 修复 (HDR) 的高效、位点特异性基因敲入系统仍然是植物面临的重大挑战，尤其是在杨树等木本植物中。本文表明，同时抑制非同源末端连接 (NHEJ) 重组辅因子 XRCC4 和过度表达 HDR 增强因子 CtIP 和 MRE11 可以提高基因敲入的 HDR 效率。使用这种方法，BleoR 基因被整合到 MKK2 MAP 激酶基因的 3' 端以产生 BleoR-MKK2 融合蛋白。根据 TaqMan 实时 PCR 评估的完全编辑核苷酸，与没有 HDR 增强或 NHEJ 沉默相比，当使用 XRCC4 沉默结合 CtIP 和 MRE11 过度表达时，HDR 介导的敲入效率高达 48%。此外，HDR 增强子过表达和 NHEJ 抑制的组合还提高了基因组靶向效率，使 CRISPR 诱导的插入和缺失 (InDels) 减少了 7 倍，从而对杨树中基于 MKK2 的盐胁迫反应没有功能性影响。因此，这种方法不仅适用于杨树和植物或农作物，也适用于哺乳动物，以提高 CRISPR 介导的基因敲入效率。
非病毒精准T细胞受体替代用于个性化细胞治疗
Susan P. Foy、Kyle Jacoby、Daniela A. Bota、Theresa Hunter、Zheng Pan、Eric Stawiski、Yan Ma、William Lu、Songming Peng、Clifford L. Wang、Benjamin Yuen、Olivier Dalmas、Katharine Heeringa、Barbara Sennino、Andy Conroy、Michael T. Bethune、Ines Mende、William White、Monica Kukreja、Swetha Gunturu、Emily Humphrey、Adeel Hussaini、Duo An、Adam J. Litterman、Boi Bryant Quach、Alphonsus H. C. Ng、Yue Lu、Chad Smith、Katie M. Campbell、Daniel Anaya、Lindsey Skrdlant、Eva Yi-Hsuan Huang、Ventura Mendoza、Jyoti Mathur、Luke Dengler、Bhamini Purandare、Robert Moot、Michael C. Yi、Roel Funke、Alison Sibley、Todd Stallings-Schmitt、David Y. Oh、Bartosz Chmielowski、Mehrdad Abedi、袁媛、Jeffrey A. Sosman、Sylvia M. Lee、Adam J. Schoenfeld、David Baltimore、James R. Heath、Alex Franzusoff、Antoni Ribas、Arati V. Rao 和 Stefanie J. Mandl
通过定制图神经网络进行预置网络长度和时间估计
摘要 — 网络长度是标准数字设计流程各个阶段中优化时序和功耗的关键代理指标。然而，大部分网络长度信息直到单元布局之前才可用，因此，在布局之前的设计阶段（例如逻辑综合）明确考虑网络长度优化是一项重大挑战。此外，缺乏网络长度信息使准确的布局前时序估计变得极其困难。时序可预测性差不仅影响时序优化，而且妨碍对综合解决方案的准确评估。这项工作通过一个带有网络长度和时序估计器的布局前预测流程解决了这些挑战。我们提出了一种可定制的图注意网络 (GAT) 方法，称为 Net 2，用于在单元布局之前估计单个网络长度。其面向准确度的版本 Net 2a 在识别长网络和长关键路径方面的准确度比之前的几项工作高出约 15%。其快速版本 Net 2f 比布局快 1000 倍以上，同时在各种精度指标方面仍优于以前的工作和其他神经网络技术。基于网络大小估计，我们提出了第一个基于机器学习的预布局时序估计器。与商业工具的预布局时序报告相比，它将电弧延迟中的相关系数提高了 0.08，并将松弛、最差负松弛和总负松弛估计的平均绝对误差降低了 50% 以上。
利用 CRISPR-Cas9 同时进行 HDR 过表达和 NHEJ 抑制，在杨树中进行精确的外源插入和序列替换
CRISPR 介导的基因组编辑已成为生物性状遗传修饰的有力工具。然而，开发基于同源定向 DNA 修复 (HDR) 的高效、位点特异性基因敲入系统仍然是植物面临的重大挑战，尤其是在杨树等木本植物中。本文表明，同时抑制非同源末端连接 (NHEJ) 重组辅因子 XRCC4 和过度表达 HDR 增强因子 CtIP 和 MRE11 可以提高基因敲入的 HDR 效率。使用这种方法，BleoR 基因被整合到 MKK2 MAP 激酶基因的 3' 端以产生 BleoR-MKK2 融合蛋白。根据 TaqMan 实时 PCR 评估的完全编辑核苷酸，与没有 HDR 增强或 NHEJ 沉默相比，当使用 XRCC4 沉默结合 CtIP 和 MRE11 过度表达时，HDR 介导的敲入效率高达 48%。此外，HDR 增强子过表达和 NHEJ 抑制的组合还提高了基因组靶向效率，使 CRISPR 诱导的插入和缺失 (InDels) 减少了 7 倍，从而对杨树中基于 MKK2 的盐胁迫反应没有功能性影响。因此，这种方法不仅适用于杨树和植物或农作物，也适用于哺乳动物，以提高 CRISPR 介导的基因敲入效率。
BREMBO 在 2022 年法兰克福国际汽车零部件及服务展览会上展示其最新的售后产品系列。该公司提供广泛的替换制动解决方案
BREMBO 在 2022 法兰克福国际汽车零配件及售后服务展览会上展示最新售后产品系列 公司的产品涵盖广泛的替换制动解决方案，分为四个不同的产品集群，可满足所有车辆和消费者的需求 法兰克福（德国），2022 年 9 月 13 日 — Brembo 的产品组合是多年来在制动技术领域不断研究和创新的成果。 为了应对新的出行挑战和需求，Brembo 不断开发最能适应现代汽车发展的尖端创新解决方案。 这也反映在其不断扩大的替换产品供应和 Brembo 的整体产品战略中，以预测客户需求，在可持续性方面实现一流的表现。 鉴于售后市场的运作方式和发展方式，Brembo 决定将其整个替换解决方案细分为四个产品系列。每款产品都旨在满足特定客户和车辆的需求，并具有 Brembo 闻名的最高质量、创新和性能。Brembo Essential 是寻求首次更换机会人士的完美选择。它在设计时融入了 Brembo 技术元素，体现了公司在所有产品中追求质量的态度。该系列包括制动鼓、制动蹄、液压部件和再生卡钳。高端系列 Brembo Prime 专为寻求最适合其轿车、轻型商用车或卡车的消费者量身定制。Brembo 的工程师开发了这个替换系列，以满足车辆型号的规格并通过高技术和质量标准增强其特性。Brembo Prime 系列包括制动盘、制动片、制动钳、制动液和其他制动配件。Brembo Beyond 秉承公司成为解决方案提供商的使命，改善新型移动车辆的驾驶动力，特别注重可持续解决方案。该产品系列包括 Brembo Beyond EV 套件、一系列全新特殊涂层制动盘和创新型制动衬块，它们更安静、更耐氧化和腐蚀，因此使用寿命更长。这些优势都有助于减少车辆对环境的影响。Brembo Beyond EV 套件完全适用于电动汽车，并在马德里 Motortec 创新画廊的“机械部件”类别中获奖。Brembo Xtra 是热情的驾驶者的理想和最佳选择，他们正在寻找汽车的定制元素以及所有 Brembo 产品特有的质量、可靠性和性能特征。这就是为什么 Xtra 系列是售后市场领域的酷炫产品线。Xtra 包括钻孔和开槽制动盘、高摩擦衬块、新型彩色铝制卡钳，以及一种新型的先进刹车油。
人工智能：教育工作者的盟友而非替代者
Yang, S. 和 Evans, C. (2019 年 11 月)。在高等教育中使用人工智能聊天机器人的机遇和挑战。2019 年第三届国际教育和电子学习会议论文集（第 79-83 页）。Hwang, GJ 和 Chien, SY (2022)。教育中元宇宙的定义、作用和潜在研究问题：人工智能视角。计算机与教育：人工智能，100082。
“1. AFCS 表 9、项目 2、9 级（化脓性关节炎或其他需要关节融合或全关节置换的病症）中有多少奖项将过度使用、损耗、重复或重复动作列为原因？
2. 表 9、第 2 项、第 9 级中所有成功授奖的记录原因是什么？“我将您的来信视为《2000 年信息自由法》（FOIA）下的信息请求。国防部内的信息搜索现已完成，我可以确认您请求范围内的所有信息均已保存。问题 1 – 表 9、第 2 项、第 9 级下的 11 个奖项将过度使用、人员流失、重复或重复行动列为原因。问题 2 – 表 9、第 2 项、第 9 级下所有成功授奖的记录原因可在以下附件 A 中找到。如果您对这封信的内容有任何疑问，请首先联系本办公室。如果您想投诉对您的请求的处理方式或此回复的内容，您可以通过联系信息权利合规团队（地址：Whitehall, SW1A 2HB，国防部主楼底层，电子邮箱：CIO-FOI- IR@mod.gov.uk）申请独立内部审查。请注意，任何内部审查请求均应在收到此回复之日起 40 个工作日内提出。如果您在内部审查后仍不满意，您可以根据《信息自由法》第 50 条的规定直接向信息专员投诉。请注意，信息专员通常不会在国防部内部审查过程完成之前调查您的案件。信息专员的联系方式：信息专员办公室，威克利夫大厦，水巷，威姆斯洛，
利用双主键编辑对大型 DNA 序列进行可编程删除、替换、整合和反转
与疾病相关的人类遗传变异范围从单碱基对替换到兆碱基重复、缺失和重排 1-3 。可以在人类细胞中安装、纠正或补充这些致病变异的基因编辑方法有可能促进对遗传疾病的了解，也可能实现新的治疗方法 4、5。过去十年来，已经开发出几种基于 CRISPR-Cas 系统的哺乳动物细胞基因编辑方法 6，包括核酸酶 7-9 、碱基编辑器 10、11 和主要编辑器 12 ，每种方法都有可能解决一组已知的致病序列变化。CRISPR-Cas 核酸酶（如 Cas9）可用于通过创建导致不受控制的插入/缺失混合的 DSB 来破坏基因。此外，配对的 Cas9 核酸酶策略可以介导长度从约 50 到 > 100,000 个碱基对的基因组 DNA 序列的靶向删除 13 。通过提供线性供体 DNA 序列，可以通过末端连接或同源性定向修复 (HDR) 过程在单个切割位点或成对切割位点之间定向插入新的 DNA 序列 14, 15。单核酸酶和成对核酸酶编辑方法虽然用途广泛，但它们也存在相当大的缺点。DNA 供体敲入伴随着高效的 indel 副产物 16，因为在大多数细胞类型中，HDR 与末端连接过程相比通常效率低下 17, 18。使用成对核酸酶进行靶向删除会产生多种副产物 13, 19，而且缺失的精确位置受到 PAM 可用性的限制。此外，在靶位或脱靶位点的 DSB 可促进大面积缺失 20-22、染色体异常 23、24 和染色体碎裂 25。 DSB 倾向于生成不良副产物和染色体改变的复杂混合物 26 - 28，这在应用基于核酸酶的编辑来操作较大的 DNA 序列时带来了相当大的挑战，特别是在治疗环境中。