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技术和策略测序
Pierce等，Proc。 natl。 学院。 ski.u.s.a. （1992）89，2056-2060•2 LOXP重组站点由Ricombinase CRE识别•PAC网站•PAC网站（162 bp），用于混合病毒颗粒中的重组分子•“填充”的“填充器”片段的“填充”（填充11 kb的adenovirus dna plapies plapies plase prastic•gene prast）复制品岩性的大量副本（在LAC启动子下）•SACB编码为Levan Sucrasi的SACB，催化蔗糖水解的酶。 在大肠杆菌中表达时，神圣的酶会产生levano，该酶积聚在周质空间中，对细胞的致命作用Pierce等，Proc。natl。学院。ski.u.s.a.（1992）89，2056-2060•2 LOXP重组站点由Ricombinase CRE识别•PAC网站•PAC网站（162 bp），用于混合病毒颗粒中的重组分子•“填充”的“填充器”片段的“填充”（填充11 kb的adenovirus dna plapies plapies plase prastic•gene prast）复制品岩性的大量副本（在LAC启动子下）•SACB编码为Levan Sucrasi的SACB，催化蔗糖水解的酶。在大肠杆菌中表达时，神圣的酶会产生levano，该酶积聚在周质空间中，对细胞的致命作用
CRISPR-Cas9 介导的大簇删除和...
图 5 . 基于 CRISPR-Cas9 的 pepC 和 sacB 基因多重基因组编辑。（A）以 mRFP 或 sfGFP 为目的基因的单基因缺失、多重缺失和多重整合的结合和编辑效率。Y 轴上提供结合效率（灰色）和编辑效率（橙色）。编辑效率条顶部的数字表示筛选的接合子总数。误差线表示标准偏差。在确定编辑效率之间的显著差异时，考虑 P 值 < 0.05（* p < 0.05；** p < 0.01）。与单基因缺失和多重缺失相比，多重 mRFP 整合具有显著差异，与单基因缺失相比，多重 sfGFP 整合也具有显著差异。 (B) P. polymyxa 突变体的显微图像，其中 sfGFP 取代了 pepC 和 sacB 基因。(左) 明场图像；(右) GFP 通道。(C) 筛选过程中获得的野生型和突变体的比例以饼状图形式提供。
GRAS 通知 (GRN) 1051 机构回复信
Kyowa 称，2′-FL 是使用源自宿主菌株大肠杆菌 W ATCC 9637 的基因工程生产菌株通过发酵生产的。Kyowa 通过删除宿主菌株基因组中的五个基因并在这些删除位点插入编码 α 1,2-岩藻糖基转移酶 4 的五个基因拷贝，构建了生产菌株大肠杆菌 W NITE SD_00487。Kyowa 还称，他们插入了一个标记盒，该标记盒包含用于菌株选择的 sacB 基因和 cat 基因，在使用该生物体生产 2′-FL 之前将其去除。Kyowa 称，他们使用聚合酶链式反应确认了所有基因改造。Kyowa 称，大肠杆菌生产菌株已存放在国家生物资源中心 (NBRC) 5，存放编号为 NITE SD_00487。 Kyowa 表示，大肠杆菌 NITE SD_00487 无致病性、无毒性，不会将 DNA 转移到其他生物体，并且不含任何可能产生抗生素耐药性的元素。此外，Kyowa 还得出结论，基于该宿主菌株在食品制造中长期安全使用的历史以及特征明确的基因变化，该生产菌株预计不会产生抗菌剂或次级代谢产物。