寡核苷酸和基于序列的试剂 PCR 引物 本研究 从 IDT ssODN 合成 Ittiprasert 等人,2019 年和本研究 Ultramer DNA Oligos, 从 IDT 合成向导 RNA Ittiprasert 等人,2019 年和本研究 从 IDT 合成 化学品、酶和其他试剂 Alt-R® CRISPR-Sp HiFi Cas9 酶 V3 Integrated DNA Technologies 1081060 Alt-R® CRISPR-AsCas12a 酶 V3 Integrated DNA Technologies 1081068 DNAzol® ES 试剂 Molecular Research Center DN127 RNAzol® RT 试剂 Molecular Research Center RN190 Opti-MEM FisherScientific Gibco™ 31985062 DMEM FisherScientific 88364 胎牛血清 FisherScientific Gibco™ 26140079 100x 青霉素-链霉素-两性霉素 B FisherScientific SV30079.01 NucleoSpin® 凝胶和 PCR 纯化 Takara 740609
I.简介使用Smart®技术简介SMRNA-SEQ智能Smrna-Seq套件for Illumina(Cat。nos。635029,635030,635031)旨在生成高质量的SMRNA-SEQ库,用于在Illumina平台上进行排序。该套件的开发可直接与总RNA或富集的小RNA输入(范围为1 ng – 2 µg)。通过合并包括Takara Bio的专有智能(巫婆机构和R na T Emplate的5端)技术和锁定的核酸(LNA)的功能,该试剂盒使用户可以分析各种SMRNA物种,并生成相当复杂的库,从少于1 ng的Input材料中产生相当大的复杂性。Illumina适配器和索引序列在文库放大过程中以无连接方式掺入(图1),以确保不同的SmRNA物种以最小的偏见表示。
使用Nebuilder HIFI HIFI DNA组装大师组合(NEB#E2621),Geneart Gibson组装混合物(Thermo Fisher#A46627)和Fifusion Snap组装组合(TAKARBLEBLBLEBLEBLBLEBLEBLEM)(TAKARE MIX)(TAKARA)(TAKARE MIX)(takARe Mix77),使用NEBUILDER HIFI HIFI HIFI GASSINBLY MIX(NEB#E2621),使用线性化载体(30 ng CRISPR核酸酶报告基因DNA)组装。在50°C下进行60分钟或15分钟进行组装反应。2μL组装的混合物被转化为NEB 5-Alpha胜任的大肠杆菌NEB#C2987)。通过PCR进一步筛选20个菌落,以确认插入物的存在。超过95%的从Nebuilder Hifi和Geneart Gibson组装反应中测试的菌落中包含适当的插入物,尽管Geneart Gibson组装产生的菌落较少。融合式快照没有产生任何成功的菌落。nebuilder Hifi DNA组装主混合均优于Geneart Gibson组装和融合式快照组件。
1.6愿上帝保护我们并赐予您平安,我们将继续支持您,愿上帝保护您并赐予您平安。 Ymlaa Maadhan Azou Haplitis 朗诵 Tamla Madkhataw、Tanaibla Ladabat 的声音Tablat Talatalal Yallaalla Mazanalla 没有错过 Duhej 一侧的 Tardlala 进攻者也门没有互联网连接(GTS),没有服务员。塔莫拉姆拉。是的尤格拉·达斯尔。 Soqtalaba、Yadala、Tabnatala、Anna、Ali、Yahweh、Rama、Hetiqot,被召唤跟随的人,Yojla Lao Alabab Sakhla。你不知道你在说什么 (EPS)和 Nadimla 一样,这是 Birdtlao 和 Diego Samjajah 的作品,就好像他是 Noctus Puntalla Tayla Ma'if Jatunla,这是 mannoobentaml ahab noal'tathi Yatala 的果酱。迪托的姨妈塔卡拉·马加(Takara Maga)或塔拉古拉(Taragula)在未入境的情况下就获得了总收入。他们崩溃了,彻底崩溃了,他们进入了一个可怕的警察局的边界。尼亚塔yyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyyy。
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