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简单而强大的电转染方案，可在人类 B 细胞中实现有效的异位基因表达和基因组编辑
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产品编号 产品描述 单位大小 MPK1025 Neon 转染系统 10 µL 试剂盒 25 x 2 rxn MPK10025 Neon 转染系统 100 µL 试剂盒 25 x 2 rxn MPK1096 Neon 转染系统 10 µL 试剂盒 96 x 2 rxn MPK10096 Neon 转染系统 100 µL 试剂盒 96 x 2 rxn MPT100 Neon 转染管 100 管 我们鼓励您考虑转换到我们改进的 Invitrogen Neon NxT 电穿孔系统，该系统利用相同、可信赖的电穿孔技术，性能相当或更好。有关系统性能的更多信息，我们建议您查看 Neon 与 Neon NxT 比较应用说明。使用 Neon NxT 电穿孔系统，您将受益于 Neon 转染系统的以下相同方面：
EP0402 TAQ DNA聚合酶（rec。）
图3。准备和使用病毒载体在靶细胞中重组蛋白表达。（1）包装细胞（例如HEK293）用编码感兴趣基因和必要病毒蛋白的三个或四个质粒转染。（2）将病毒组装在包装细胞中，然后收获和纯化。（3）该病毒用于转导靶细胞，释放感兴趣的基因。（4）在此示例中，将慢病毒载体的RNA反向转录为DNA，将DNA整合到宿主基因组中以进行重组蛋白表达。
针对 Cas9 表达细胞的 Edit-R 合成向导 RNA 转染方案
以下是使用 DharmaFECT™ 1-4 转染试剂（目录号 T-2001、T-2002、T-2003、T-2004）将合成向导 RNA 转染到表达 Cas9 的培养哺乳动物细胞中的简化方案。合成向导 RNA 可以是合成的单向导 RNA，也可以是与 tracrRNA 复合的合成 crRNA。适用于完成细胞系优化后使用。有关完整详细信息以及优化指南，请参阅技术手册。
原生质体转染进展促进 CRISPR 高效应用
摘要 植物原生质体是利用基因编辑对所需性状进行遗传操作的可靠实验系统。尽管如此，突变原生质体的选择和再生仍具有挑战性，而随后恢复成功编辑的植物是先进植物育种技术的一个重要瓶颈。为了缓解与原生质体转基因表达和原生质体再生相关的障碍，开发了一种新方法。结果表明，线性化 DNA 可以有效转染马铃薯原生质体，而来自各种植物的 UBIQUITIN10 启动子可以有效地指导转基因表达。此外，还对转染原生质体的卡那霉素抑制浓度进行了标准化，新霉素磷酸转移酶 2 ( NPT2 ) 基因可用作富集转染原生质体的有力选择标记。此外，BABYBOOM ( BBM ) 转录因子的瞬时表达促进了原生质体衍生愈伤组织的再生。总之，这些方法显著增加了对表现出高转基因表达的原生质体的筛选，从而显著提高了原生质体衍生愈伤组织中基因编辑事件的发生率，达到 95%。本研究开发的方法促进了四倍体马铃薯植物的基因编辑，并为多倍体生物中的复杂基因操作开辟了道路。
2020; 10(12): 5532-5549. doi: 10.7150/thno.43465 评论 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑的新兴物理转染方法综述
基因编辑是生物医学领域的一种多功能技术，可促进基础研究和临床治疗。成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 作为基因组编辑机制的发展加速了基因编辑的应用。然而，由于包装尺寸有限以及对某些细胞类型的效率低下，使用传统转染方法（如病毒转导和化学载体）时，CRISPR 成分的递送通常会受到影响。在这篇综述中，我们讨论了可以克服这些限制的 CRISPR 基因编辑的物理转染方法。我们概述了不同类型的物理转染方法，重点介绍了递送 CRISPR 成分的新技术，并强调了微纳米技术在提高转染性能方面的作用。我们介绍了对当前技术局限性的看法，并对物理转染方法的未来发展提供了见解。
CRISPR 工作流程中的内毒素及其对转染效率的影响
图 3. 内毒素水平比较。根据制造商说明 (Lonza)，使用 Limulus Amebocyte Lysate (LAL) 测试测量使用 QIAGEN 的 EndoFree Plasmid Kit 和 QIAGEN Plasmid Plus Kit 以及 Zymo 的 ZymoPureII Endo-Zero Plasmid Kit 制备的质粒 DNA 样本中的内毒素水平。对于每个试剂盒，对 2 个样本进行 1:100 稀释，重复三次测试。测试的标准曲线范围在 0.005 EU/ml 和 50 EU/ml 之间。EndoFree Plasmid Plus 试剂盒产生的质粒 DNA 不含任何可检测的内毒素，而 Plasmid Plus 试剂盒提供的质粒 DNA 中内毒素含量显著降低。相比之下，ZymoPureII 产生的质粒 DNA 含有大量内毒素。通过琼脂糖凝胶电泳评估的两个试剂盒的质粒 DNA 的产量和质量相当（未显示数据）。
使用 DNA 和蛋白质格式优化转染方法，以实现 Beta-TC-6 细胞中 CRISPR Cas9 介导的基因敲除。
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