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摘要 植物原生质体是利用基因编辑对所需性状进行遗传操作的可靠实验系统。尽管如此,突变原生质体的选择和再生仍具有挑战性,而随后恢复成功编辑的植物是先进植物育种技术的一个重要瓶颈。为了缓解与原生质体转基因表达和原生质体再生相关的障碍,开发了一种新方法。结果表明,线性化 DNA 可以有效转染马铃薯原生质体,而来自各种植物的 UBIQUITIN10 启动子可以有效地指导转基因表达。此外,还对转染原生质体的卡那霉素抑制浓度进行了标准化,新霉素磷酸转移酶 2 ( NPT2 ) 基因可用作富集转染原生质体的有力选择标记。此外,BABYBOOM ( BBM ) 转录因子的瞬时表达促进了原生质体衍生愈伤组织的再生。总之,这些方法显著增加了对表现出高转基因表达的原生质体的筛选,从而显著提高了原生质体衍生愈伤组织中基因编辑事件的发生率,达到 95%。本研究开发的方法促进了四倍体马铃薯植物的基因编辑,并为多倍体生物中的复杂基因操作开辟了道路。

原生质体转染进展促进 CRISPR 高效应用

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