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World File Search System免疫荧光
迈雷特蛋白通过调节氧化应激和tau高磷酸化
背景：阿尔茨海默氏病的特征是异常的β-淀粉样蛋白（Aβ）斑块积累，TAU高磷酸化，反应性氧化应激，线粒体功能障碍和突触损失。甲霉素是一种饮食类黄酮，已显示出在体外和体内发挥神经保护作用。在这里，我们旨在阐明米他汀保护作用所涉及的机制和途径。方法：对Myricetin的作用进行了对β42低聚物处理的神经元SH-SY5Y细胞和3×TG小鼠的作用。行为测试，以评估3×TG小鼠中典型素（14天，IP）的认知作用。通过蛋白质印迹评估了β-淀粉样蛋白前体蛋白（APP），突触和线粒体蛋白，糖原合酶激酶三酶3β（GSK3β）和细胞外调控激酶（ERK）2的水平。流式细胞仪测定，免疫荧光染色和透射电子显微镜用于评估线粒体功能障碍和反应性氧化应激。结果：我们发现，与对照治疗相比，三×TG小鼠的迈他汀治疗改善了空间认知，学习和记忆。myricetin在β42低聚物处理的神经元SH-SY5Y细胞以及3×TG小鼠中改善tau磷酸化以及突触前和突触后蛋白的降低。此外，米他素还减少了活性氧的产生，脂质过氧化和DNA氧化，并通过相关的GSK3β和ERK 2信号通路营救了线粒体功能障碍。结论：这项研究为细胞培养和体内的阿尔茨海默氏病小鼠模型中的细胞培养和体内的神经保护机理提供了新的见解。
Ph.D.学生（f/m/d）Ph.D.学生（f/m/d）
Werner Siemens Imaging Center（临床前成像和放射药物系，主任Bernd Pichler教授）在Eberhard Karls UniversityTübingen的大学医院竞争并与国际研究小组竞争并在抗旋链成像的科学顶级合作。Dominik Sonanini博士研究小组（转化免疫成像和癌症免疫疗法）目前在“肿瘤免疫学中的分子成像”（f/m/m/d）中为下一个时间点提供了博士学位。该职位最初仅限于一年，在成功评估后有可能进一步扩展。对肿瘤细胞的免疫反应涉及各种淋巴样和髓样免疫细胞的复杂相互作用。分子成像可用于非侵入性跟踪整个身体中不同免疫细胞群体的分布，尤其是在肿瘤微环境和淋巴机构中。在该项目中，新开发的免疫细胞示踪剂将被表征和应用在各种肿瘤小鼠模型中，以监测免疫疗法期间不同免疫细胞群体的迁移动力学和激活模式。将开发出高级图像分析技术，以定量评估体内摄取模式的空间和时间摄入模式，这将与离体多重免疫荧光显微镜以及流量和质量细胞仪相关。此外，博士生将为临床研究做出贡献，并对人体组织样本进行相关分析，以支持新开发的新开发的示踪剂候选者的临床翻译。
阐明虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）眼粘膜感染柱状黄杆菌后的动态免疫反应
脊椎动物的眼睛不断面临着来自水生或空气传播病原体的众多挑战。作为至关重要的第一道防线，眼粘膜 (OM) 保护鸟类和哺乳动物等脊椎动物的视觉器官免受外界威胁。然而，我们对硬骨鱼等早期脊椎动物眼粘膜免疫的了解仍然有限，特别是关于它们对细菌感染的抵抗力。为了深入了解 OM 在硬骨鱼抗菌免疫中的关键作用，我们利用虹鳟鱼 (Oncorhynchus mykiss) 中的柱状黄杆菌建立了细菌感染模型。此处 qPCR 和免疫荧光结果表明柱状黄杆菌可以侵入鳟鱼 OM，表明 OM 可能是细菌的主要目标和屏障。此外，qPCR 证实了鳟鱼 OM 中免疫相关基因（ il-6 、 il-8 、 il-11 、 cxcl10 、 nod1 、 il1-b 、 igm 、 igt 等）在 F. columnare 感染后上调，并通过 RNA-seq 进一步证实了这一点。转录组分析的结果表明，细菌感染会触发强烈的免疫反应，包括先天性和适应性免疫相关信号通路，如 Toll 样、NOD 样和 C 型凝集素受体信号通路和 IgA 产生的免疫网络，这强调了 OM 在细菌感染中的免疫作用。有趣的是，感染后观察到与视觉功能相关的基因表达显着降低，表明细菌感染可能影响眼部功能。总的来说，我们的研究结果首次揭示了硬骨鱼类眼部粘膜对细菌感染的强大粘膜免疫反应，为未来研究早期脊椎动物眼部粘膜免疫机制和功能提供了宝贵的见解。
小分子抑制剂和生长因子共轭与丝质素衍生的生物学
摘要：表型稳定的软骨移植物的植入可以代表修复骨关节炎（OA）软骨病变的可行方法。在本研究中，我们研究了调节骨形态发生蛋白（BMP），转化生长因子β（TGFβ）和人介素1（IL-1）信号级联对人骨骨髓基质细胞（HBMSC）中的效果 - 包含的丝绸丝绸纤维蛋白胶质素胶质素（Sf-Gelatin（Sf-Gelatin（Sf-Gelatin））。选定的小分子LDN193189，TGFβ3和IL1受体拮抗剂（IL1RA）与SF-G生物材料共轭，以确保持续释放，增加生物利用度和可打印性，并由ATR-FTIR，释放Kinetics和Hapre-Ftair，Kinetics和Hapor-fterirics确认。在OA诱导培养基中孵育具有软骨分化的HBMSC的3D生物打印构建体14天，并通过详细的QPCR，免疫荧光和生化分析进行评估。尽管供体之间的观察结果存在很大的异质性，但IL1RA分子说明了增强关节软骨成分表达的最高效率，从而减少了肥厚型标记物（由Genemania工具重新验证）的表达，并降低了HBMSCS的炎症分子的产生。因此，这项研究表明了一种新的策略，可以开发一种化学装饰，可打印和仿生的SF-G生物互联，以产生透明的软骨移植物，可抵抗获得OA性状，可用于治疗退化的软骨病变。关键字：骨关节炎，信号通路，软骨发生，丝质纤维素明胶生物学，3D生物打印，软骨细胞肥大
Eganelisib 联合免疫检查点抑制剂治疗和化疗治疗一线转移性三阴性乳腺癌可触发肿瘤微环境中的巨噬细胞重编程、免疫激活和细胞外基质重组
摘要 背景 三阴性乳腺癌 (TNBC) 是一种侵袭性乳腺癌亚型，预后不良，尤其是在转移性环境中。抗程序性细胞死亡蛋白 1/程序性死亡配体 1 (PD-L1) 免疫检查点抑制剂 (ICI) 与化疗联合治疗已显示出对转移性 TNBC (mTNBC) 有良好的临床益处，但仍有未满足的需求，尤其是对于 PD-L1 阴性肿瘤患者。mTNBC 对 ICI 产生耐药的机制包括肿瘤微环境 (TME) 中存在免疫抑制性肿瘤相关巨噬细胞 (TAM)。Eganelisib 是一种强效且选择性的小分子 PI3K-γ 抑制剂，临床前研究表明，它可通过减少髓样细胞向肿瘤的募集并将 TAM 从免疫抑制表型重编程为免疫激活表型并增强 ICI 活性来重塑 TME。这些研究为在 II 期临床试验 MAcrophage Reprogramming in Immuno-Oncology-3（MARIO-3，NCT03961698）中对 Eganelisib 联合抗 PD-L1 atezolizumab 和 nab-paclitaxel 在一线 mTNBC 中的临床评估提供了理论依据。我们在此首次介绍了 MARIO-3 研究的深入转化分析以及 Eganelisib 单药治疗实体瘤 Ph1/b 研究（MARIO-1，NCT02637531）的补充数据。方法对配对的治疗前和治疗后肿瘤活检样本进行免疫表型分析，通过多重免疫荧光（n=11）、使用 GeoMx 数字空间分析的空间转录组学（n=12）和 PD-L1 免疫组织化学（n=18）。使用流式细胞术和多重细胞因子分析分析外周血样本。
卟啉症在宿主细胞中卟啉单胞菌对压力诱导的翻译控制的失调
摘要：牙龈卟啉单胞菌有助于慢性口腔疾病牙周炎，触发宿主炎性反应的激活，从而诱导细胞应激（例如氧化）。在压力期间，宿主细胞可以通过下调蛋白质合成并启动应力 - 反应基因表达程序或启动程序性细胞死亡来激活确定细胞命运的综合应力反应（ISR）。最近的研究暗示了宿主抗菌防御和某些微生物的病理机理中的ISR。在这项研究中，使用免疫荧光共聚焦显微镜和免疫印迹的结合，研究了在口腔上皮细胞中氧化应激诱导ISR激活过程中氧化应激诱导的ISR激活期间的分子机制。牙龈疟原虫感染并没有导致ISR激活。相比之下，感染与应力会导致差异应力颗粒的形成和组成。感染与核心ISR介体独立于应力诱导的翻译抑制。在牙龈疟原虫调节的培养基和外膜囊泡中都观察到了压力期间的平移抑制，这牵涉到这种加剧的转化抑制作用中的一个分泌因子。牙龈蛋白酶抑制剂和牙龈优异的牙龈假单胞菌突变体证实了这些病原体特异性蛋白酶，作为加剧翻译抑制的效果。gingipain会降解雷帕霉素（MTOR）的哺乳动物靶标，这项研究的发现意味着gingipain-mtor轴是压力期间宿主翻译失调的效果。
Aconitum carmichaelii Debx. Attenuates Heart Failure through Inhibiting Inflammation and Abnormal Vascular Remodeling
摘要：心力衰竭（HF）是心肌梗塞后最常见的并发症，与心室重塑密切相关。AconInum Carmichaelii Debx。是一种传统的中含中含的中国草药，对HF和相关心脏疾病具有治疗作用。然而，其对HF相关心脏疾病的影响和机制尚不清楚。在本研究中，提取烤的carmichaelii debx的水。（WETA）使用UPLC-Q/TOF-MS验证。通过超声心动图和应变分析评估HF大鼠的心脏功能，并通过CK-MB，CTNT和CTNI的血清水平测量心肌损伤。通过2,3,5-三苯基四唑（TTC）染色，苏木精和曙红（H＆E）染色以及Masson的三色染色，评估了心脏组织的病理变化。此外，通过RT-QPCR，Western blot和免疫荧光检测到与血管重塑相关的炎症相关基因和蛋白质和成分的水平。WETA显着抑制了超声心动图参数的变化以及心脏体重的增加，心脏梗塞的大小，肌肌症，肌表皮症，水肿和炎性细胞的效果，心脏组织中的胶原蛋白沉积，也减轻了CK-MB，CTNT和CTNI的血清级别的高度。Additionally, WETA suppressed the expressions of inflammatory genes, including IL-1 β , IL-6, and TNF- α and vascular injury-related genes, such as VCAM1, ICAM1, ANP, BNP, and MHC in heart tissues of ISO-induced HF rats, which were further confirmed by Western blotting and immunofluorescence.总而言之，通过抑制ISO处理的大鼠的炎症反应和异常的血管重塑，赋予了WETA的心肌保护作用。
发育期 Pb 暴露通过改变 Hipsc 衍生皮质神经元的细胞内 Ca2+ 稳态增加 AD 风险
在脆弱的发育时期接触铅 (Pb) 等环境化学物质会导致晚年健康出现不良后果。人类队列研究表明，发育期 Pb 暴露与晚年阿尔茨海默病 (AD) 发病之间存在关联，动物研究的结果进一步证实了这一观点。然而，发育期 Pb 暴露与 AD 风险增加之间的分子通路仍然难以捉摸。在这项工作中，我们使用人类 iPSC 衍生的皮质神经元作为模型系统来研究 Pb 暴露对人类皮质神经元中 AD 样发病机制的影响。我们将来自人类 iPSC 的神经祖细胞暴露于 0、15 和 50 ppb Pb 中 48 小时，去除含 Pb 的培养基，并进一步将它们分化为皮质神经元。免疫荧光、蛋白质印迹、RNA 测序、ELISA 和 FRET 报告细胞系用于确定分化皮质神经元中 AD 样发病机制的变化。将神经祖细胞暴露于低剂量 Pb，模拟发育暴露，可导致神经突形态改变。分化神经元表现出钙稳态、突触可塑性和表观遗传景观的改变，以及 AD 样发病机制标志物升高，包括磷酸化 tau、tau 聚集体和 A β 42/40。总之，我们的研究结果为发育性 Pb 暴露引起的 Ca 失调提供了证据基础，这是一种合理的分子机制，可解释发育性 Pb 暴露人群中 AD 风险的增加。
自噬激活可以部分挽救蛋白酶体功能障碍介导的心脏毒性
图 1 心脏靶向（Gal4 Τ inC Δ 4 ）蛋白酶体 Pros β 5 基因的 KD 导致蛋白质组不稳定和线粒体数量减少。 (a) Pros β 5 siRNA 后心脏组织中 Pros β 5 基因的相对表达（与对照相比）。 (b, c) Pros β 5 RNAi（与对照相比）果蝇心脏组织中相对 (%) 26S 蛋白酶体活性 (b) 和 ROS 水平 (c)。 (d) Pros β 5 KD 后果蝇心脏组织中蛋白质组泛素化 (Ub) 和羰基化 (DNP) 的免疫印迹分析。 (e) CLSM 观察用 LysoTracker 染色的 Pros β 5 RNAi（与对照相比）果蝇心管（e1）、LysoTracker 定量（e2）和使用溶酶体标记物抗 Lamp1（e3）进行免疫印迹分析。(f) 所示基因型果蝇心脏组织中蛋白酶活性的相对（％）。(g) blw/ATP5A 免疫荧光染色后，CLSM 可视化所示果蝇品系心脏组织中的线粒体；细胞核用 DAPI 复染。(h) Pros β 5 KD 后，所示基因型分离心脏组织中所示线粒体基因的相对表达水平（与对照相比）。在 (a, h) 中，基因表达与相应对照作图；使用 RpL32/rp49 基因作为 RNA 输入参考。 （d）和（e3）中的 Gapdh 和 Actin 探测分别用作蛋白质输入参考。p 值采用非配对 t 检验计算。条形图，± SD（n ≥ 3）；* p < 0.05；** p < 0.01
o r i g i n a l r e s a r c h上调通过ddit4介导的自噬途径抑制低氧 - 异化脑损伤
简介：低氧 - 缺血（HI）仍然是婴儿脑瘫和长期神经后遗症的主要原因。尽管进行了深入的研究和许多治疗方法，但针对HI侮辱的神经保护策略有限。在此，我们报告了HI损伤在新生儿小鼠的同侧皮层中显着下调的MicroRNA-9-5P（miR-9-5p）水平。方法：通过QRT-PCR，蛋白质印迹分析，免疫荧光和免疫组织化学评估缺血性半球蛋白质的生物学功能和表达模式。开放现场测试和Y迷宫测试用于检测运动活动，探索性行为和工作记忆。结果：miR-9-5p的过表达有效地减轻了HI侮辱后的脑损伤并改善了神经系统行为，并伴随着抑制神经炎症和凋亡。miR-9-5p直接与DNA损伤诱导转录物4（DDIT4）的3'未翻译区域结合，并对其表达负面调节。此外，miR-9-5p模拟处理下调节的轻链3 II/轻链3 I（LC3 II/LC3 I）比率和Beclin-1表达，并降低了同侧皮层中LC3B的积累。进一步的分析表明，DDIT4敲低明显抑制了HI-UP调节的LC3 II/ LC3 I比和Beclin-1表达，与脑损伤相关。结论：研究表明，miR-9-5p介导的HI损伤受DDIT4介导的自噬途径调节，而miR-9-5p水平的上调节可能会对HI脑损伤产生潜在的治疗作用。关键字：缺氧 - 疾病，HI，miR-9-5p，DNA损伤诱导的转录本4，（DDIT4），自噬