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大脑的定量组织化学
等。已经发表了一种核苷磷酸化酶的可比方法（1）。所有程序均已验证，以与可用于组织化学目的获得的冷冻干燥材料一起使用。尽管总体上已经用作现有的甲基动物，但样本量的急剧减少需要进行大量改变。Fumarase方法是基于未发表的John Speck2博士的方法基于Mal-Ate的测量，并且可能具有普遍的兴趣。已经研究了Sibley和Lehninger（2）的藻酶方法，并提出了某些变化。整个组织中酶的定量测量将被扭曲。为了测试这种可能性，所研究的每种酶都从大脑中部分纯化，并恢复为粗脑匀浆。尚未对严重的抑制作用和刺激尚未得到应对，也许是因为在所有情况下以高组织稀释液测量了这些酶。这些证据当然不能排除酶不活跃形式或验证其他组织的方法的可能性。首先提出了这些方法的评论主要限制为事项
从果蝇Melanogaster制备基因组DNA
从果蝇中的基因组DNA制备该方案可以从40-100 mg的成年蝇（蝇重约1 mg）中分离出高度纯的基因组DNA。首先，在核保持完整的条件下，蝇是在缓冲液中磨碎的，然后使用SDS将DNA从断裂的组织中释放出来。接下来，进行常规的苯酚提取（去除蛋白质）和氯仿提取（去除苯酚），并用乙醇沉淀核酸。离心后（去除脂质和小细胞分子），将核酸沉淀溶解并用rnasea（降解RNA）和蛋白酶K（降解rNASEA和其他蛋白质）串行消化。其他苯酚/氯仿沉淀和乙醇沉淀产生高度纯化的基因组DNA。我们的目标是完整的基因组DNA - 避免通过过度的移液和涡旋剪切DNA。1。将50个成年果蝇放入装有微型植物的1.5 mL微管中，并在500 µl的缓冲液中彻底磨碎A。用500 µl的缓冲液B冲洗杵，将冲洗液加入匀浆中；通过反转微管轻轻混合。在37°C下孵育1小时2。切断P1000微量移动尖端的尖端，然后使用它将匀浆（500 µL）的一半转移到第二个微管中。苯酚通过在每个管，帽和混合物中添加相等的体积（500 µL）Te饱和苯酚来提取样品。离心5分钟。3。使用截止P200尖端将透明顶层（水相）绘制为两个新的微管（每个微管）。避免绘制接口材料。离心5分钟。4。5。通过在每个管，帽和混合物中添加等体积（500 µl）苯酚的苯酚来重新提取样品。使用截止P200尖端将透明顶层（水相）绘制为两个新的微管（每个微管）。避免绘制接口材料。氯仿通过在每个管，帽和混合物中添加等体积（500 µl）的氯仿提取样品。离心1分钟。使用截止尖端将透明顶层（水相）绘制为两个新的微管（每个微管）。将NaCl添加到0.1m的最终浓度。乙醇通过在每个微管中添加2卷（〜850 µl）的EtOH来沉淀您的样品；轻轻混合。观察核酸的沉淀。将微管放在-20°C过夜以鼓励沉淀。6。离心10分钟。丢弃上清液；短暂地干燥SpeedVac中的颗粒（将显示使用）。7。如下，将样品组合到单个微管中。然后，使用截止P200尖端将500 µl TE缓冲液加到一个管中
开发OGA的宠物示踪剂，具有改进的活力动力学
o -glcnacylation被认为在阿尔茨海默氏病中的tau病理发展中起作用，因为它可以调节Tau的聚集倾向。o -Glcnacylation由2种酶调节：O -GlCNAC转移酶和O- Glcnacase（OGA）。开发宠物示踪剂将是开发OGA治疗性小分子抑制剂的必要工具，从而实现靶向参与和剂量选择的临床测试。方法：筛选小分子化合物的集合，以抑制活性和与OGA的高度结合，以及有利的宠物示踪剂（多药耐药蛋白1 ef toplip of，中枢神经系统宠物系统宠物系统宠物多组合表的优化）等）。选择了两种具有较高属性的铅化合物，并且选择了OGA的选择性，以进一步实现，包括使用放射性访问结合测定法与组织匀浆的OGA结合。使用大鼠未标记化合物的微剂量方法建立了体内药代动力学。在带有11个标记化合物的啮齿动物和非人类培养物（NHP）中进行了体内成像研究。结果：两个选定的候选者Bio-735和Bio-578在体外显示出有希望的属性。用Tritium进行放射性标记后，[3 H] Bio-735和[3 H] Bio-578在啮齿动物脑匀浆中结合的结合分别表现出0.6和2.3nm的解离结合体。的结合被同源化合物和硫代thiamet G抑制了浓度，这是一种良好的特征和结构上多样的OGA抑制剂。成像研究表明，在非二型活性化合物存在下，这两种示踪剂在大脑中都具有很高的吸收，并且抑制了与OGA的结合。然而，只有BIO-578在具有11 c标记分子的PET研究的时间范围内显示出可逆的结合动力学，以使用动力学建模来实现定量。示踪剂摄取的植物与10 mg/kg的阻塞剂量结合在一起。铅化合物BIO-578在啮齿动物和人类后脑组织中对OGA的高度和选择性表现出很高的选择性，从而在NHP中进行了进一步的测试。NHP PET成像研究表明，示踪剂具有出色的脑动力学，并完全抑制了硫胺素G的特定结合。这些结果表明，示踪剂[11 C] Bio-578非常适合在人类中进一步表征。
测量的总汞和甲基汞浓度
以下成分（以下称为“组织”）在每只鱼时被解剖：大脑，尾骨，背部肌肉，胆囊，g丝，性腺，心脏，心脏，肠，肝脏，肝脏和胃衬里。仅采样白色肌肉组织；将背部肌肉在背鳍插入底部的孔和通风口前的后方采样，然后将尾肌放在脂肪鳍后的后方，并在尾部的前面。在分析之前，将皮肤，骨骼和软骨从白色肌肉组织中去除。性腺被整体取样，并不区分为睾丸或卵巢，因为柳叶鱼大于100 cm是同时的雌雄同体（Bañon等人。2022）。胃被清空，用Milli-Q水冲洗以清除所有内容物。解剖后，将所有组织用Milli-Q轻轻冲洗，以避免样品之间的污染，放置在预先投资的旋风中，并在干燥之前和之后称重以测量水分含量。组织在-80°C中冷冻，然后在旋转式中进行冷冻干燥和匀浆或使用电子磨坊（IKA管磨机100控制）。铣削容器和工具在样品之间用95％的乙醇清洁。
以 JNK 为靶点作为药物代谢调控的新方法
摘要：药物药代动力学和药效学管理是个性化药物治疗的一种方法。这可以通过控制外来化合物代谢来实现。本研究旨在研究通过靶向调节细胞内信号转导来控制体内物质生物转化的可能性。通过UPLC-MS/MS，研究了JNK抑制剂对肝细胞文拉法辛外来化合物代谢的影响。含有抗抑郁药的肝匀浆细胞中JNK的阻断伴随着其生物转化强度的增加。细胞悬浮液中O-去甲基文拉法辛单一药理活性代谢物的形成及其进一步的化学转化显著增加。实验数据表明JNK抑制剂显著诱导文拉法辛代谢。JNK抑制剂的这些特性可用于开发一种表征抗抑郁治疗的新方法。此外，研究结果还表明，研究细胞内信号分子（特别是丝裂原活化蛋白激酶）的活性调节剂有望开发出控制外来化合物转化过程的方法，并创造出一类新型药物——靶向药物代谢调节剂。
客户推荐
制剂的细菌资格通过螺旋计数技术（ISO7218标准化技术）进行制剂的细菌计数。 从带有NaCl和甘油的粪便悬浮液中，易螺旋稀释装置会自动执行串行1/10稀释液，直到获得10 -5溶液为止。 然后，从这种悬浮液中，自动机通过螺旋技术（允许在同一培养皿上获得4个稀释日志），以进行枚举。 每种镀介介质都是重复进行的，以确保可重复性。 为什么需要这些汽车？ Nebbad博士：我们需要节省时间并降低交叉污染的风险。 我们的设备如何改变了您的工作方式？ Nebbad博士：与旧制备方法相比，科学产品是明显的改进。 例如，样品的均质化是用搅拌器进行的，该搅拌器在每次操作后必须清洁，这是交叉污染的主要来源。 今天，每个样品都使用Dilu流动在其辐照的Bagfilter中稀释，并由BagMixer自动匀浆。 设备没有直接与样品接触，并且足够紧凑，可以在生物安全柜下使用，这使捐赠尽可能安全并保护操纵器。 此外，使用Bagfilter，无需手工过滤样品，我们将滤液直接放在袋中。 这减少了操纵步骤和与样品接触的消耗品数量。 因此，从卫生和安全的角度来看，它更快，更安全。通过螺旋计数技术（ISO7218标准化技术）进行制剂的细菌计数。从带有NaCl和甘油的粪便悬浮液中，易螺旋稀释装置会自动执行串行1/10稀释液，直到获得10 -5溶液为止。然后，从这种悬浮液中，自动机通过螺旋技术（允许在同一培养皿上获得4个稀释日志），以进行枚举。每种镀介介质都是重复进行的，以确保可重复性。为什么需要这些汽车？Nebbad博士：我们需要节省时间并降低交叉污染的风险。 我们的设备如何改变了您的工作方式？ Nebbad博士：与旧制备方法相比，科学产品是明显的改进。 例如，样品的均质化是用搅拌器进行的，该搅拌器在每次操作后必须清洁，这是交叉污染的主要来源。 今天，每个样品都使用Dilu流动在其辐照的Bagfilter中稀释，并由BagMixer自动匀浆。 设备没有直接与样品接触，并且足够紧凑，可以在生物安全柜下使用，这使捐赠尽可能安全并保护操纵器。 此外，使用Bagfilter，无需手工过滤样品，我们将滤液直接放在袋中。 这减少了操纵步骤和与样品接触的消耗品数量。 因此，从卫生和安全的角度来看，它更快，更安全。Nebbad博士：我们需要节省时间并降低交叉污染的风险。我们的设备如何改变了您的工作方式？Nebbad博士：与旧制备方法相比，科学产品是明显的改进。例如，样品的均质化是用搅拌器进行的，该搅拌器在每次操作后必须清洁，这是交叉污染的主要来源。今天，每个样品都使用Dilu流动在其辐照的Bagfilter中稀释，并由BagMixer自动匀浆。设备没有直接与样品接触，并且足够紧凑，可以在生物安全柜下使用，这使捐赠尽可能安全并保护操纵器。此外，使用Bagfilter，无需手工过滤样品，我们将滤液直接放在袋中。这减少了操纵步骤和与样品接触的消耗品数量。因此，从卫生和安全的角度来看，它更快，更安全。至于细菌枚举，它是通过使用Easyspiral的使用来促进的，该杂音可以通过其9个稀释日志，可以直接具有可解释的培养皿。这节省了我们的时间，并使我们的双重验证使我们能够获得更可靠和可重现的结果。您最喜欢我们的设备？nebbad博士：科学产品对我们制剂的细菌资格非常满意，因为我们在重复方面工作，并且这些设备的性能非常可重复。此外，使用袋子闭合棍的袋子可以使我们保持良好的厌氧条件，这对于生活在肠道中的细菌培养至关重要。紧凑型室间设备的紧凑格式允许在生物安全机柜下使用并降低污染风险。如果您必须用3个单词定义内科产品，则Nebbad博士：安全，易于使用且健壮。
白介素8在慢性根尖细胞病变的发展和临床进展中的作用
摘要简介/目标。慢性根尖牙周炎代表了牙齿根管系统中牙髓感染存在的动态延续，当时是激活了先天和获得的免疫反应，并募集了各种细胞和炎症介质，从而导致了细胞皮肤组织的破坏以及周围的生殖器的发展。该研究的目的是分析根本病变组织匀浆中IL-8的浓度，并将所获得的结果与患者的症状和病变的大小进行比较。方法。在这项研究中，总共分析了93个慢性根尖细胞病变的组织样品。与临床症状有关，将样品分为有症状和无症状，并根据大小分为大小病变。使用ELISA测试检查了IL-8的浓度。结果。与无症状的症状性周期病变中IL-8的浓度明显更高（p <0.001）。与小病变相比，大病变的这种趋化因子的浓度也明显更高（p <0.001）。结论。在具有明显的临床症状学的根尖性病变中IL-8的浓度升高以及在大病变中指出IL-8是一种主要的趋化因子，有助于根尖的炎症和根尖性病变的临床进展。关键字：根尖病变，细胞因子，趋化因子，IL-8通讯作者：JelenaPopović电子邮件：jelenadp@gmail.com
高素质成像用于监测单个单元格中的信号动力学
所有活细胞都是其环境的传感器：他们感觉到信号，激素，细胞因子和生长因子等。这些信号与细胞表面受体的结合通过蛋白质 - 蛋白质相互作用，酶促修饰和构象变化启动消息沿细胞内信号通路的传播。通常，在整个细胞种群中监测信号通路的激活，从而给予人群平均度量，通常使用破坏和匀浆细胞种群的实验方法。高内容成像是一种自动化的高通量荧光显微镜方法，可实现从活细胞中采取信号转导途径的测量。它可用于测量信号动力学，感兴趣的特定蛋白质的丰度随着时间的流逝而变化，或记录特定蛋白质如何移动和改变其本地化，以响应来自其环境的信号。使用此方法和其他单细胞方法，越来越清楚的是，即使在克隆（同源性）细胞系中，细胞对给定刺激的响应以及它们表达的细胞成分的量也很大。本综述将讨论高素质成像如何促进我们对细胞异质性的日益了解。它将讨论如何将生成的数据与信息理论方法相结合，以量化通过嘈杂的信号通路传输的信息量。最后，将考虑异质性与我们对疾病的理解和治疗的相关性，强调了单细胞测量的重要性。
补充信息
补充图 S5。olslc38a4 (SAT) 的消除对青鳉幼虫表型、上皮 Na + 通量和蛋白质表达的影响。 (A)，青鳉 Sat 与商用抗 SLC38A4 抗体免疫原肽（针对人类 SLC38A4 的合成肽；序列同源性：74%；ab58785；Abcam Cambridge，英国）的推断序列比对。Western blot 分析 SAT 消除对 Sat 变体蛋白质表达的影响。分别应用了 6 dpf 青鳉幼虫匀浆（从 FW 中的野生型、20‰ SW 中的野生型和 20‰ SW 中的 Sat 变体中收集），并表明商用抗 SLC38A4 抗体可以检测到来自不同青鳉幼虫样本的蛋白质，预期分子量大小约为 56 KDa。 (B) 野生型 (Wt) 和 1 ng SAT MO 注射青鳉胚胎在 20‰ SW 条件下的光学显微镜图像。 (C) 淡水 (FW) 环境下，与野生型和假对照青鳉幼体相比，SAT MO 注射对 6 dpf 青鳉幼体 Na + 通量的影响。值以平均值 ± SD 表示，并使用 Student's t 检验进行比较。当 p < 0.05 时，认为存在显著差异。
从神经引导因素Netrin-1中的见解到神经变性和其他疾病
Netrin-1是用于轴突引导的规范化趋化提示。可以追溯到1890年代，当Cajal博士提出轴突可能会受到可扩散的线索的指导，这些提示吸引了脊柱连任神经元轴突向胚胎脊髓的腹中线的投影，这些提示是分泌的，并在其中分泌了这些线索，并形成了化学动物的渐变渐变（Moore in neuroerepithium（Moore）（Moore）（Moore）。Netrin-1与Netrin-2一起在胚胎鸡脑匀浆中发现并纯化。随后，其他Netrin家族蛋白已被鉴定或与果蝇，小鼠和人类有关（Moore等，2007）。现在，发现Netrins不仅在轴突探路中起作用，而且在其他多种细胞过程中起关键作用，包括细胞迁移，粘附，分化和生存，并参与神经变性（Jasmin等，2021），炎症，炎症，炎症，癌症（Xia等，2022），癌症和其他临床疾病（2022）。Netrin-1已在帕金森氏病（PD），阿尔茨海默氏病（AD）和其他类型的神经系统疾病中进行了研究，我们发现了与AD发病机理有关的Netrin-1的新证据（Bai等，2020）。在这里，我们提供了Netrin-1的概述，以突出其在这些神经系统疾病中的机械作用和生物标志物潜力。