噬菌体制剂滴定法。在之前的实验中,野生型耶鲁菌株用于估计噬斑形成单位的数量。使用 GGM 琼脂,获得了相当好但并非总是精确可重复的结果。由于该方法涉及测定板的干燥,有时由于水分分布不均匀,在板的某些部分噬斑不够明显。至于这一点,指示菌株被认为是原因,寻找比耶鲁菌株更合适的生物。在几个标准实验室培养物中,菌株 NRS 231 被发现足够;该菌株产生边界清晰的噬斑,而且比耶鲁菌株更敏感。另一个优点是,NRS 231 与耶鲁菌株不同,它对噬菌体 SP 10 敏感。
摘要 Öz 目的:近年来,许多重要细菌群落对抗生素的耐药性不断增加,导致人们对噬菌体分离和表征以及噬菌体不断扩大的临床潜力的文献兴趣日益浓厚。考虑到抗菌素耐药性特征,分离用于治疗鲍曼不动杆菌感染的噬菌体、确定其作用谱并进行表征非常重要。本研究旨在从环境水源中分离针对目标微生物鲍曼不动杆菌的特异性噬菌体。材料和方法:研究了 16 种不同的环境水样作为噬菌体的潜在来源。以具有多重耐药性的鲍曼不动杆菌临床分离株作为宿主细菌。使用单噬斑分离法分离针对目标细菌的特异性噬菌体。在体外研究期间,使用双琼脂法增加分离噬菌体的滴度,并评估其噬斑形态和宿主特异性。结果:噬菌体 vB_KlAcineto13 仅对目标细菌表现出溶解活性,不会感染其他细菌分离株。结论:根据本研究的结果,可以得出结论,噬菌体 vB_KlAcineto13 的宿主范围较窄,不会感染宿主细菌以外的其他测试细菌。然而,特性研究可能会提供有关噬菌体的更多详细信息。
加入6孔板中并在28°C下孵育2小时(不摇晃)以形成单层。我们制备了8μL Cellfectin II 试剂(Gibco-10362-100)和1μg每种DNA样本,并根据Bac-to-Bac手册提供的指导进行孵育。去除培养基后,将DNA转染试剂复合物逐滴加入6孔板中。将板在28°C下孵育5小时。然后,在从细胞培养板中取出DNA样本后,向每个孔中加入3mL不含抗生素的新鲜培养基进行孵育。每隔24小时观察一次细胞病变效应(CPE)。感染后72-96小时收获P0重组杆状病毒,并进行噬斑测定(Bac-to-Bac手册)以检查滴度。收获P1和P2以增加重组杆状病毒的库存和滴度,用于蛋白质表达。
马立克氏病(MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的家禽一种高度接触性淋巴组织增生性疾病。尽管MD已得到疫苗有效控制,但MDV野生分离株的毒力仍在不断演变,在疫苗的免疫压力下毒性变得更强。我们前期研究已证实插入REV-LTR的重组rMDV毒株可作为减毒活疫苗候选株。本研究旨在通过两个实验评估rMDV毒株的免疫起效时间和免疫持续时间。两个实验均给1日龄SPF鸡皮下接种rMDV毒株,剂量为每只鸡3,000 噬斑形成单位(PFU)并在0.2 mL MD稀释液中接种。随后,在试验设计1中,分别于免疫后3天、5天、7天用500 PFU vvMDV毒株MD5对Vac-3d/CC-3d、Vac-5d/CC-5d、Vac-7d/CC-7d组雏鸡进行攻击;在试验设计2中,分别于免疫后60天、120天、180天对Vac-60d/CC-60d、Vac-120d/CC-120d、Vac-180d/CC-180d组雏鸡进行攻击,观察并记录各组鸡的临床症状和体重增长情况。结果表明,插入REV-LTR的rMDV毒株从3日龄开始提供保护,1日龄免疫后5日龄即可获得良好的免疫效果,免疫持续时间至少可达180天。考虑到与年龄相关的抗性,可以证实我们的疫苗确实可以提供终身免疫。本研究为rMDV毒株的免疫起效和免疫持续时间提供了有价值的见解,将为MD疫苗的开发和改进提供基础。